检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2023年第10期39卷 1436-1444页

作者：刘行辉刘若兰龙云峰陈邦航张峥嵘敖欣樊洁柔李准洁苏延停湖北科技学院医学部药学院药理学教研室湖北咸宁437100 湖北科技学院医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室湖北咸宁437100 江汉大学环境与健康研究院持久性有毒污染物环境与健康危害湖北省重点实验室武汉430056

N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战... 详细信息

N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战。之前的研究已经表明,一种识别GlcNAc的茶树菇凝集素6(Agrocybe aegerita lectin recognizing GlcNAc,AANL6)对末端的GlcNAc糖结构特异性识别,但是亲和力较低。为了改造更高效的末端GlcNAc糖识别工具,AANL6通过二聚化来提高单体的亲和力。将AANL6单体通过中间的接头序列(linker)进行分子水平的二聚化,然后克隆到pET-30a质粒上,转化至大肠杆菌表达菌BL21中。确立最优的表达条件,并大量表达纯化AANL6二聚体蛋白(根据linker命名为PA6和EAA6)。随后对AANL6二聚体进行纯度、分子量和糖结合活性研究。SDS-PAGE结果显示,AANL6二聚体纯度较高(92.5%),分子量介于66.2~116 kD之间,符合预期值88 kD的大小。等温滴定热量法(isothermal titration calorimetry,ITC)检测结果显示,二聚化的AANL6显著提高了对GlcNAc的结合能力(P<0.01)。糖结合活性检测显示,AANL6二聚体对末端的GlcNAc糖基化修饰与单体相比有着更高的特异性。这些结果显示,AANL6二聚体通过二聚化显著提高了对末端GlcNAc糖基化的亲和力和特异性,这不仅为未来的末端GlcNAc糖基化修饰的功能提供有效的识别工具,而且提供了一种新的改造凝集素的策略。

关键词： N-乙酰葡萄糖胺糖基化修饰二聚化糖识别工具

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基于SLBFC的人体分子与细胞整合课程的教学探索

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基础医学教育 2024年第10期26卷 837-842页

作者：侯妮杨旭东吕社民彭小倩陈煜倪磊王一东李冬民西安交通大学医学部人体分子与细胞整合教研室西安710061 西安交通大学医学部基础医学院细胞生物学与遗传学系西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系

整合课程是医学基础课程教学改革的方向。人体分子与细胞有机整合生物化学、细胞生物学、分子生物学和医学遗传学四门学科内容,课程容量大、知识点多。教师在教学过程中采用基于科研文献研读的翻转课堂(scientific literature-based fli... 详细信息

整合课程是医学基础课程教学改革的方向。人体分子与细胞有机整合生物化学、细胞生物学、分子生物学和医学遗传学四门学科内容,课程容量大、知识点多。教师在教学过程中采用基于科研文献研读的翻转课堂(scientific literature-based flipped classroom, SLBFC),旨在提升学生阅读科研文献的能力,提高学生的学习自主性,促进其将所学知识融会贯通,提高学生从分子和细胞水平认知疾病的能力。问卷调查结果显示:90%以上的学生对SLBFC课堂持满意态度,超过85%的学生认为SLBFC有助于理解人体分子与细胞整合课程的理论知识,养成从分子细胞水平分析医学问题的意识和提升综合能力。文章从SLBFC的设计、实施和评价过程予以展示、分析和总结,以期为我国医学整合课程改革提供参考和借鉴。

关键词：人体分子与细胞整合课程翻转课堂科研文献多元化教学

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人磷酸丙糖异构酶在大肠埃希菌中的表达、纯化及鉴定

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湖北科技学院学报（医学版） 2023年第4期37卷 298-302页

作者：刘洁金科华湖北科技学院医学部公共卫生与健康学院湖北咸宁437100 湖北科技学院医学部基础医学院生物化学教研室

目的本研究拟在大肠埃希菌中表达并纯化人磷酸丙糖异构酶(TPI),为其后续研究奠定基础。方法根据TPI编码序列(CDS)设计一对引物,其5′端分别添加Nde I和Xho I位点,PCR扩增TPI CDS。Nde I和Xho I酶切PCR产物和质粒pET-28a,胶回收酶切的质... 详细信息

目的本研究拟在大肠埃希菌中表达并纯化人磷酸丙糖异构酶(TPI),为其后续研究奠定基础。方法根据TPI编码序列(CDS)设计一对引物,其5′端分别添加Nde I和Xho I位点,PCR扩增TPI CDS。Nde I和Xho I酶切PCR产物和质粒pET-28a,胶回收酶切的质粒和PCR产物,并用DNA连接酶连接,连接产物转化DH5α感受态细胞,用含卡那霉素的抗性平板筛选抗性菌落。将抗性菌落接种于含卡那霉素的LB培养基,于37℃250r/min培养过夜,抽提质粒,双酶切和测序鉴定重组质粒pET-28a-TPI。将重组质粒pET-28a-TPI转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,于含卡那霉素的抗性平板筛选抗性菌落。将一个抗性菌落接种于100mL含卡那霉素的LB培养基,于37℃摇床中250r/min培养至A600约0.9,加入0.1mmol/L IPTG诱导TPI表达4h,收集菌体,超声裂解细胞,裂解液上清中的TPI用Ni^(2+)亲和层析柱纯化。用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的表达产物,纯化的TPI经超滤浓缩后,保存于-20℃。结果pET-28a-TPI序列正确,可溶性TPI在大肠埃希菌中获得表达,产量达300mg/L,纯度约90%。结论高产率、高纯度的TPI为后续研究奠定了良好基础。

关键词：磷酸丙糖异构酶可溶性表达纯化超滤

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多元分层生物化学实验课在提升医学生综合创新能力中的作用

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生物化工 2023年第5期9卷 170-173页

作者：郭慧芳胡雪林陈晨刘宝宁程江红张瑞三陈鹏西安医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710021

为评价多元分层生物化学实验课教学改革的科学性与有效性,本课题选择全科卓越医学班进行生物化学实验课教学改革实践,并以传统教学方式为对照。实验课结束后,从学生实验报告成绩、4方面量化表格比较和远期影响为结局指标,对实验组和对... 详细信息

为评价多元分层生物化学实验课教学改革的科学性与有效性,本课题选择全科卓越医学班进行生物化学实验课教学改革实践,并以传统教学方式为对照。实验课结束后,从学生实验报告成绩、4方面量化表格比较和远期影响为结局指标,对实验组和对照组进行了教学效果比较。研究结果显示,与传统教学方法相比,多元分层生物化学实验课将学生实验报告平均成绩提高4.05分,医学生综合创新能力所包含的4方面均获得提升,其中知识,能力,素质和发展分别提高7.60分、14.30分、4.90分和7.80分,实验组学生已经具备一定的科研实验设计及实施能力,这些有利于增强学生自信心和自主学习能力,该教学模式获得学生高度认可。结果说明,多元分层生物化学实验课在提高实验成绩和提升学生综合创新能力方面具有较大优势。本研究为多元分层生物化学实验课在实验教学中的开展提供了依据,为推动实验教学方法的改革提供参考。

关键词：多元分层综合创新能力生物化学实验课

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医学生物化学实验线上教学资源的建设与应用

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生命的化学 2024年第12期44卷 2353-2360页

作者：谢彩凤涂硕罗达亚熊向阳杨晓红朱伟锋黄春洪胡晓鹃南昌大学江西医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室南昌310006 南昌大学玛丽女王学院南昌330031

医学生物化学实验是医学生理解和应用生物化学理论知识、提高动手能力及培养科研创新思维的重要专业课程。为了延伸实验课程深度和广度进而提高课程育人成效,培养学生创新思辨能力,本教学团队构建了含实验慕课、虚拟仿真实验平台、直播... 详细信息

医学生物化学实验是医学生理解和应用生物化学理论知识、提高动手能力及培养科研创新思维的重要专业课程。为了延伸实验课程深度和广度进而提高课程育人成效,培养学生创新思辨能力,本教学团队构建了含实验慕课、虚拟仿真实验平台、直播授课及线上生物软件学习的“四位一体”线上教学资源,进而将该线上教学资源与线下实验课程项目内容进行有机融合,有效地提升了学生对于实验项目的掌握度和满意度。教学实践发现,单纯的线上实验课程无法满足学生实际动手操作的需求,存在学生掌握度较低,且学生成绩区分度较差等问题。而通过构建完善的线上实验课程内容并有机整合线下实验项目,打造线上线下混合式综合创新实验课程体系可以较好地突破时间空间的限制,提升课程的广度和深度,增加课程的抗压度。本文的相关改革内容可供借鉴及参考。

关键词：医学生物化学实验课程线上教学

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科研视频教学在医学生科研启蒙教育中的探索与实践——以生物化学教学为例

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生命的化学 2024年第2期44卷 349-356页

作者：汤晓丽罗达亚杨晓红刘卓琦张鹏霞邓立彬南昌大学江西医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室南昌330000 佳木斯大学医学部佳木斯154000 南昌大学江西医学院公共卫生学院统计学教研室南昌330000

医学是与生命健康密切相关的学科。医学科技的进步与创新在提高人类疾病防治水平和应对公共卫生突发事件起着至关重要的作用。在新医科及创新人才培养视域下,医学生科研创新能力的提升关乎国家医疗卫生事业的发展、人民福祉与民族未来... 详细信息

医学是与生命健康密切相关的学科。医学科技的进步与创新在提高人类疾病防治水平和应对公共卫生突发事件起着至关重要的作用。在新医科及创新人才培养视域下,医学生科研创新能力的提升关乎国家医疗卫生事业的发展、人民福祉与民族未来。科研实践是培养创新型人才的一条重要途径,而早期的科研启蒙是科研实践的重要基础。本课题组近两年来针对大学二年级学生开展了课外视频教学。教学内容主要是与查阅网络资料和使用科研软件相关的基础科研技能。通过调查问卷和作业等方法评价教学效果。已取得初步成效。现对科研视频教学模式做一些总结与探讨,旨在为医学创新教育及早期接触科研育人模式提供参考与建议。

关键词：生物化学教学科研视频创新能力科研育人服务社会

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丝氨酸羟甲基转移酶2对人皮肤黑色素瘤细胞增殖的影响

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山西医科大学学报 2024年第5期55卷 537-543页

作者：夏艳曹远均李俊葓张妮四川中医药高等专科学校生物化学教研室绵阳621000 九〇三医院麻醉科西安医学院基础医学部细胞与遗传学教研室

目的研究丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)对人皮肤黑色素瘤细胞增殖的影响及作用机制。方法通过GEPIA在线数据库分析人皮肤黑色素瘤中SHMT2的表达情况及其与β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达的相关性。通过嘌呤霉素进行压力筛选获取稳定表... 详细信息

目的研究丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)对人皮肤黑色素瘤细胞增殖的影响及作用机制。方法通过GEPIA在线数据库分析人皮肤黑色素瘤中SHMT2的表达情况及其与β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达的相关性。通过嘌呤霉素进行压力筛选获取稳定表达SHMT2的人皮肤黑色素瘤A-375-SHMT2细胞株,采用细胞计数、CCK-8法、流式细胞术分别检测SHMT2对细胞增殖和细胞周期的影响,Western blot检测β-catenin及其下游分子Cyclin D1和c-Myc蛋白的表达。萤火虫荧光素酶报告系统实验(TOP/FOP-Flash luciferase reporter assay)检测wnt/β-catenin信号通路的活性。在稳定表达SHMT2的A-375-SHMT2细胞中使用XAV-939抑制wnt/β-catenin信号通路活性后,观察细胞增殖的变化。结果GEPIA在线数据库分析的结果显示,SHMT2在人皮肤黑色素瘤患者肿瘤组织中高表达(P<0.05),SHMT2表达与β-catenin、c-Myc和Cyclin D1呈正相关(P<0.05)。成功筛选获得稳定表达SHMT2的A-375-SHMT2细胞系及对照细胞系A-375-GFP。与A-375-GFP组相比,A-375-SHMT2组细胞的增殖能力更强(P<0.05),处于细胞周期G0/G1期的细胞比例降低(P<0.05),S期和G2/M期的细胞比例增高(P<0.05)。Western blot和双荧光素酶TOP/FOP实验的结果显示SHMT2增强wnt/β-catenin信号通路活性(P<0.05),并上调β-catenin、c-Myc和Cyclin D1的表达(P<0.05)。在A-375-SHMT2细胞中使用XAV-939抑制wnt信号通路后可以逆转SHMT2对细胞增殖的促进作用及对Cyclin D1和c-Myc的上调效应(P<0.05)。结论SHMT2通过激活wnt/β-catenin信号转导通路活性促进人皮肤黑色素瘤细胞的体外增殖。

关键词：丝氨酸羟甲基转移酶2 wnt/β-catenin信号通路细胞增殖皮肤黑色素瘤细胞周期

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SHMT2通过上调Akt1促进人皮肤黑色素瘤细胞的迁移和侵袭

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现代肿瘤医学 2024年第13期32卷 2328-2334页

作者：夏艳曹远均夏苗张妮四川中医药高等专科学校基础医学部生物化学教研室四川绵阳621000 九〇三医院麻醉科四川江油621700 甘肃医学院附属医院病理科甘肃平凉744000 西安医学院基础医学部细胞学遗传教研室陕西西安710021

目的:研究丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)通过上调Akt1促进人皮肤黑色素瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:通过嘌呤霉素压力筛选获取稳定表达SHMT2蛋白的A-375和WM35细胞系;通过Western Blotting和细胞免疫化学检测SHMT2蛋白在A-375和WM3... 详细信息

目的:研究丝氨酸羟甲基转移酶2(SHMT2)通过上调Akt1促进人皮肤黑色素瘤细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:通过嘌呤霉素压力筛选获取稳定表达SHMT2蛋白的A-375和WM35细胞系;通过Western Blotting和细胞免疫化学检测SHMT2蛋白在A-375和WM35细胞系中的稳定表达;通过细胞划痕、Transwell小室实验检测SHMT2对A-375和WM35细胞体外划痕愈合、迁移和侵袭能力的影响;通过GEPIA在线数据库分析SHMT2与Akt1及上皮-间充质转换(EMT)相关因子Snai1、Snai2、ZEB2和vimentin在人皮肤黑色素瘤中表达的相关性;通过RT-PCR、Western Blotting检测Akt1、p-Akt1、Snai1、Snai2、ZEB2和vimentin在SHMT2稳定表达细胞系中的表达情况。结果:成功构建SHMT2稳定表达的A-375和WM35细胞系;过表达SHMT2可以促进A-375和WM35细胞的体外划痕愈合、迁移和侵袭;GEPIA在线数据库结果显示在人皮肤黑色素瘤中SHMT2表达与Akt1、Snai1、Snai2、ZEB2和vimentin表达呈正相关;过表达SHMT2可以上调Akt1和p-Akt1蛋白在人皮肤黑色素瘤细胞中的表达。结论:SHMT2通过上调Akt1表达促进A-375和WM35细胞的体外迁移和侵袭。

关键词： SHMT2 Akt1 人皮肤黑色素瘤迁移侵袭

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“聚徒教学”与基础医学创新实验课程的融合与实践

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基础医学教育 2022年第4期24卷 276-279页

作者：林桂淼杨一王子梅赵振富王晓梅深圳大学医学部公共卫生学院毒理学教研室深圳518060 深圳大学医学部医学教学实验中心深圳大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室深圳大学医学部基础医学院解剖学教研室深圳大学医学部基础医学院生理学教研室

为培养医学本科生的科研思维和创新能力,深圳大学医学部构建了系统的创新人才培养体系,包括开设基础医学创新课程、建立科研导师培养制度、设立本科生科研项目、组织科研竞赛活动等。文章探索利用“聚徒教学”将本科生科研活动有效组织... 详细信息

为培养医学本科生的科研思维和创新能力,深圳大学医学部构建了系统的创新人才培养体系,包括开设基础医学创新课程、建立科研导师培养制度、设立本科生科研项目、组织科研竞赛活动等。文章探索利用“聚徒教学”将本科生科研活动有效组织和整合起来,取得了良好的教学效果。

关键词：基础医学实验教学创新实验聚徒教学

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用于小鼠及兔源IgG的通用型二抗PA/G-HRP融合蛋白的真核表达及活性检测

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第7期37卷 590-595页

作者：王鹏举王依依张仪婷杨甜宋源赵晶阎博杨安钢新乡医学院医学检验学院河南新乡453003 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK2... 详细信息

目的制备可与小鼠及兔来源IgG结合的通用型二抗,并用于多种免疫检测实验。方法全基因合成金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)、链球菌蛋白G(SPG)与辣根过氧化物酶(HRP)融合基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNATM3.1骨架中,瞬时转染入人胚肾HEK293F细胞进行表达。通过SDS-PAGE、Western blot法鉴定融合蛋白表达情况,通过Western blot法、ELISA、免疫组织化学实验验证其应用。结果酶切鉴定和基因测序显示pPA-HRP、pPG-HRP和pPA/G-HRP表达质粒构建成功。考马斯亮蓝染色和Western blot法结果表明,融合蛋白PA-HRP、PG-HRP和PA/G-HRP在HEK293F细胞中成功表达。Western blot法、ELISA和免疫组织化学结果显示,三种融合蛋白均能识别结合小鼠及兔来源的IgG,其中PA/G-HRP表现出更为灵敏的结合活性。结论成功制备了具有高亲和力、通用型二抗功能的融合蛋白,PA/G-HRP能够替代传统抗小鼠IgG及抗兔IgG,可用于多种免疫检测实验。

关键词：金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA) 链球菌蛋白G(SPG) 辣根过氧化物酶(HRP) 融合蛋白真核表达

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