检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2020年第4期28卷 52-57页

作者：李任峰田香勤韩笑王晓斐姜金庆夏小静王异民王自良河南科技学院动物科技学院新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化... 详细信息

本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化。将纯化后的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其分泌抗体的特性进行了分析。结果显示:重组质粒pET28a-N在*** BL21中高效表达,筛选获得了2株稳定分泌抗N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A3和4F6,其分泌的抗体均为IgG1亚型,腹水效价分别为5.12×10^5、1.28×10^5。本研究为进一步研究N蛋白的功能以及建立PEDV免疫学诊断方法奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白原核表达单克隆抗体

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C1型尼曼-匹克病小鼠生长繁殖及血液生理生化指标的测定分析

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中国实验动物学报 2017年第3期25卷 250-255页

作者：乔梁杨恩慧杨记超顾巧美董宏天林俊堂闫欣新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠(Npc1^(-/-)小鼠)的生长繁殖及血液生理生化指标,为开展NPC1病人的研究提供理论性的基础资料。方法 (1)选取0~77日龄Npc1^(-/-)、Npc1^(+/-)和Npc1+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;(2)Npc1^(... 详细信息

目的测定SPF级C1型尼曼-匹克病小鼠(Npc1^(-/-)小鼠)的生长繁殖及血液生理生化指标,为开展NPC1病人的研究提供理论性的基础资料。方法 (1)选取0~77日龄Npc1^(-/-)、Npc1^(+/-)和Npc1+/+小鼠雌雄各40只,定期称重并绘制生长曲线;(2)Npc1^(-/-)小鼠由Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生,统计Npc1^(+/-)小鼠连续4代的繁殖数据;(3)检测60日龄Npc1^(-/-)和Npc1+/+小鼠的血液生理生化指标。结果 (1)Npc1^(-/-)小鼠的体重在7周前随着日龄的增加而增加,7周后随着日龄的增加而减少,直至11周左右死亡。Npc1+/+和Npc1^(+/-)小鼠的体重均随着日龄的增长而逐渐增加,两者之间并没有显著差别。4周后雄性比雌性体重增加明显比雌性小鼠快;(2)Npc1^(+/-)小鼠不同代内交配分娩间隔、窝产仔数、离乳仔数、离乳仔数中雌雄数量及阳性数量差异无显著性(P>0.05),而第2代的离乳率明显大于第1代(P<0.05);(3)Npc1^(-/-)和Npc1+/+小鼠血液生理指标中平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均过氧化物酶指数(MPXI)差异有显著性(P<0.05),其余差异无显著性(P>0.05)。生化指标中尿素(UREA)差异有极显著性(P<0.01),而天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、葡萄糖(GLU)、乳酸脱氢酶(LDH)、钾(K)和铜(Cu)等差异有显著性(P<0.05),其余差异无显著性(P>0.05)。结论 (1)Npc1^(-/-)、Npc1^(+/-)和Npc1+/+小鼠的生长曲线因基因型和性别的不同而存在差异;(2)Npc1^(+/-)小鼠不同代的繁殖能力差异无显著性;(3)Npc1^(-/-)和Npc1+/+小鼠的部分血液生理生化指标差异有显著性。

关键词： C1型尼曼-匹克病,小鼠生长曲线繁殖血液参数

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3种诱导法诱导CD73^+脂肪间充质干细胞成心肌细胞效果的比较

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解剖学报 2013年第3期44卷 339-344页

作者：齐立杰郭康李琼郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室第三附属医院肿瘤科河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430000

目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚... 详细信息

目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚群。分别培养两组细胞,利用5-氮杂胞苷(5-aza)、心肌组织裂解液和5-aza+心肌组织裂解液对两组分选出的细胞分别进行成心肌的诱导。利用免疫细胞化学技术检测3种诱导法的成心肌效果。结果未分选的ADMSCs可分化为成脂和成骨细胞,分选的CD73+细胞具备分化为心肌细胞的良好潜能。3种诱导法均能诱导CD73+ADMSCs向心肌方向分化,5-aza诱导CD73+ADMSCs分化为心肌细胞率为(22.99±6.72)%,心肌组织裂解液组心肌细胞率(14.12±5.42)%,5-aza+心肌组织裂解液组心肌细胞率(26.94±6.11)%。3种方法比较,5-aza+心肌组织裂解液的诱导效果最佳(P<0.05)。结论 CD73+比CD73-的ADMSCs更易于分化为心肌细胞。化学诱导因素和体外模拟心肌微环境,可高效诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌细胞。

关键词： CD73 5-氮杂胞苷心肌组织裂解液脂肪源间充质干细胞细胞培养免疫荧光小鼠

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体外转染CyclinA2基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响

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解剖学报 2015年第1期46卷 57-62页

作者：卢杏张进忠郭志坤常玉巧贾银明徐振平新乡医学院生命科学技术学院新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 安阳市中医院心内科河南安阳455000 河南医学高等专科学校基础医学部生物学教研室郑州451191

目的探讨体外转染细胞周期素A2（Cyclin A2）基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组：转染带有强化绿色荧光蛋白（GFP）和Cyclin A2基因的重... 详细信息

目的探讨体外转染细胞周期素A2（Cyclin A2）基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组：转染带有强化绿色荧光蛋白（GFP）和Cyclin A2基因的重组腺病毒（Ad-Cyclin A2-GFP）;空病毒组：转染不含目的基因带有GFP的重组腺病毒（Ad-Null-GFP）;阴性对照组：未做转染处理,仅加入等量的培养基。利用GFP示踪技术,评估原代心肌细胞转染效率;转染后的细胞继续体外培养3～5d,利用免疫荧光技术分别检测Cyclin A2、磷酸化组蛋白H3（H3P）、心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）。结果 1.荧光GFP示踪表明原代心肌细胞的转染效率高达（97±0.74）%;2.免疫荧光标记显示,空病毒组和对照组结果相似;心肌细胞特异性标记蛋白c Tn T分布于细胞质,原代心肌细胞纯度高达（95±0.62）%;心肌细胞Cyclin A2主要在胞核内聚集,少数分布于细胞质。H3P为核蛋白在细胞核内分布。3.转染Cyclin A2后,实验组H3P阳性率明显高于空病毒组和对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;实验组可见大量多核细胞,以双核为主,伴少量3核细胞。结论腺病毒作为转染载体对原代心肌细胞有很好的侵染效率;Cyclin A2超表达促进原代心肌细胞形成双核。

关键词： Cyclin A2 心肌细胞增殖基因转染免疫荧光大鼠

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ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响

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神经解剖学杂志 2014年第6期30卷 683-687页

作者：杨慈清李小英王聪睿付苏雷李晗林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的：分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法：采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d（E5）,将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准... 详细信息

目的：分析在胚胎发育过程ADAM17异常表达对神经前体细胞迁移的影响。方法：采用鸡胚活体电转和小鼠子宫内电转基因技术,在鸡胚发育的第5 d（E5）,将2μg/μl的p CAGGS-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到视顶盖内,然后电转基因,E12时收集胚胎;小鼠胚胎发育的15 d（E15）进行子宫内电转,将2μg/μl的shRNA-ADAM17和0.25μg/μl的p CAGGS-GFP质粒以1∶8混合液0.25-0.5μl准确地注射到一侧脑室,电转基因后E20时收集胚胎。冰冻切片,采用免疫荧光组织化学和DAPI染色观察组织形态结构及相关蛋白的变化。结果：在鸡胚模型中,ADAM17的超表达并不会明显的引起神经前体细胞迁移的改变,对细胞核转录因子Pax7的表达也没有影响;在鼠胚模型中,ADAM17的抑制表达能够引起神经前体细胞迁移受阻,但并没有引起大脑皮层各层的结构的变化。结论：ADAM17的抑制表达对神经前体细胞的迁移具有抑制作用,但并不会引起大脑皮层结构的改变。

关键词： ADAM17 神经前体细胞鸡胚小鼠胚胎

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6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化

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中国病理生理杂志 2017年第6期33卷 975-980页

作者：张毅敏连辉宋海岩周立蔡君艳王志勇新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 东南大学附属中大医院江苏南京210009

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组... 详细信息

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P<0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P<0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P<0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P<0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P<0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P<0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P<0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P<0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P<0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。

关键词： 6-羟多巴弓状核酪氨酸羟化酶离子钙接头蛋白1 阿片-促黑素皮质素原

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多巴胺D2受体基因敲除导致体重减轻以及棕色脂肪PRDM16、UCP1、FAS和ACC的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2019年第3期37卷 278-281,286页

作者：张毅敏连辉付升旗宋海岩毛康新乡医学院基础医学院河南省医用组织再生重点实验室河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心新乡医学院三全学院河南新乡453003

目的以多巴胺D2受体基因敲除(D2KO)小鼠为动物模型,研究D2KO小鼠体重减轻后,棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)重量,白色脂肪重量,BAT中含PR结构域蛋白16(PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16,PRDM16)、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)以及乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Coenzyme A carboxylase,ACC)的mRNA和蛋白表达变化,以期为肥胖机制研究提供线索。方法 8周龄野生型小鼠组(wild type,WT)和D2KO小鼠组各10只。分别称量各小鼠体重及其白色脂肪、棕色脂肪重量。Real-time quantitative RT-PCR方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的m RNA表达水平,Western blotting方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的蛋白表达水平。结果 WT组动物体重为(23.78±0.54)g,D2KO组动物体重为(20.54±1.15)g,P<0.05。WT组动物附睾脂肪(epididymal adipose tissue,eAT)重量为(1.083±0.02)g,D2KO组动物e AT重量为(0.978±0.03)g,P<0.05。WT组动物皮下脂肪(subcutaneous adipose tissue,sAT)重量为(1.85±0.05)g,D2KO组动物sAT重量为(1.72±0.03)g,P<0.05。WT组动物BAT重量为(31.38±4.22)mg,D2KO组动物BAT重量为(42.44±2.47)mg,P<0.05。半定量PCR与Western blotting检测结果显示,相对于WT组,D2KO组小鼠棕色脂肪中PRDM16、FAS、ACC的mRNA与蛋白的表达均显著增加,UCP1的mRNA与蛋白表达显著减少。结论 D2KO小鼠的体重减轻与棕色脂肪中的PRDM16、UCP1、FAS以及ACC存在一定关联。

关键词： D2受体敲除体重减轻棕色脂肪

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淫羊藿苷对经血源性子宫内膜干细胞成心肌样细胞分化的影响

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中国细胞生物学学报 2016年第11期38卷 1373-1381页

作者：杨芬刘彦礼闫岩张大林吉祥林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

选择安全高效的诱导剂促进干细胞成心肌样细胞分化,将为干细胞治疗心脏疾病提供更佳的种子细胞,加强干细胞治疗效果。该研究重在明确淫羊藿苷(icariin,ICA)对经血源性子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Me... 详细信息

选择安全高效的诱导剂促进干细胞成心肌样细胞分化,将为干细胞治疗心脏疾病提供更佳的种子细胞,加强干细胞治疗效果。该研究重在明确淫羊藿苷(icariin,ICA)对经血源性子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men ESC)成心肌样细胞分化的影响。首先,通过MTT法和划痕实验检测ICA对Men ESC增殖和迁移的影响。RT-PCR检测ICA与5氮杂胞苷(5azacytidine,5aza C)诱导前后心肌特异性转录调控因子肌细胞增强因子-2C(myocyte enhancer factor-2C,MEF-2C)、NK2转录因子相关蛋白5(NK2 transcription factor related locus 5,Nkx2.5)、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)以及心肌特异性标志物人类心房钠尿肽(human atrial natriuretic peptide,h ANP)、肌钙蛋白I(cardiac tropomin I,c Tn I)、肌钙蛋白T(cardiac tropomin T,c Tn T)基因的表达水平。免疫荧光检测ICA与5aza C诱导后细胞中c Tn T的蛋白质水平表达。结果表明,ICA对Men ESC的增殖和迁移无显著性影响;进一步发现,ICA与5aza C诱导Men ESC后,均能显著上调MEF-2C、Nkx2.5、GATA4、h ANP、c Tn I及c Tn T基因的表达;而最终的免疫荧光结果也证实,ICA诱导后的Men ESC阳性表达c Tn T。综上所述,ICA可在不影响Men ESC增殖和迁移活性的基础上促进其成心肌样细胞分化,为Men ESC在临床上治疗心脏疾病提供新途径。

关键词：经血源性子宫内膜干细胞淫羊藿苷心肌分化心脏疾病

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两种真核启动子体内外转录活性比较研究

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中国细胞生物学学报 2015年第10期37卷 1370-1376页

作者：刘彦礼于亚楠杨坤林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

启动子作为基因工程表达载体的核心组成部分,在很大程度上决定了目的基因的转录活性。为筛选出一个转录活性较高的真核启动子,以目的蛋白与增强型绿色荧光蛋白融合表达的形式,在体内外检测CMV和CAG两种真核启动子的转录活性。首先,通过... 详细信息

启动子作为基因工程表达载体的核心组成部分,在很大程度上决定了目的基因的转录活性。为筛选出一个转录活性较高的真核启动子,以目的蛋白与增强型绿色荧光蛋白融合表达的形式,在体内外检测CMV和CAG两种真核启动子的转录活性。首先,通过常规分子生物学技术将神经钙黏着蛋白(N-cad)克隆到p CAG-MCS-EGFP质粒中(携带CAG启动子),菌落PCR、双酶切及测序验证;与p EGFP-N-cad质粒(携带CMV启动子)一起通过磷酸钙法分别转染HEK293T细胞,比较两种质粒在体外细胞水平转染目的基因效率;随后,通过已建立的鸡胚脊髓活体电转方法比较两种质粒在活体鸡胚脊髓内转录目的基因效率,冷冻切片后进行荧光强度观察;而体内外实验均应用常规Western blot和RT-PCR技术验证目的基因N-cad在蛋白及基因水平上的表达。荧光显微镜观察结果表明,CMV启动子仅能在体外细胞水平上行使其转录活性,而CAG启动子可在体内体外高效行使其转录活性,进一步的Western blot和RT-PCR结果与荧光观察结果一致。该研究结果可为体内研究目的基因功能时的载体构建提供借鉴。

关键词：启动子转录活性活体电转技术增强型绿色荧光蛋白

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新生大鼠心telocytes的形态学和蛋白标记

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解剖学报 2016年第5期47卷 633-637页

作者：甘黎常玉巧张三林牛艳菲余霞郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 解放军第371中心医院心血管内科河南新乡4530030

目的探讨新生大鼠心telocytes(TCs)的形态学特征并验证其是否表达神经细胞、神经胶质细胞的特异性标记。方法酶消化法培养新生大鼠原代细胞,免疫细胞化学、扫描电子显微镜鉴定TCs,免疫荧光技术检测TCs的神经细胞和神经胶质细胞的蛋白表... 详细信息

目的探讨新生大鼠心telocytes(TCs)的形态学特征并验证其是否表达神经细胞、神经胶质细胞的特异性标记。方法酶消化法培养新生大鼠原代细胞,免疫细胞化学、扫描电子显微镜鉴定TCs,免疫荧光技术检测TCs的神经细胞和神经胶质细胞的蛋白表达。新生大鼠大脑组织免疫组织化学染色作为阳性对照。结果免疫组织化学检测显示波形蛋白(vimentin)表达阳性,免疫荧光检测vimentin和CD34共表达,但TCs内神经元特异性烯醇化酶(NSE)、GFAP、OX42、2’3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(CNpase)表达阴性。扫描电子显微镜下TCs形态清晰典型,特征形态明显。结论大鼠心TCs虽然具有与神经细胞类似的形态,但其并不具有神经细胞的特性。

关键词： Telocyte 神经细胞神经胶质细胞原代细胞培养新生大鼠

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