检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2024年第5期55卷 612-618页

作者：陈钧钧周立苏田王现伟张海龙王志勇新乡医学院人体解剖学与组织学胚胎学系河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 河南大学基础医学院河南开封475000

目的探讨多巴胺受体D3~D5在不同物种小肠的分布和定位。方法应用免疫组织化学和免疫印迹法,分别检测D3~D5在小鼠、大鼠和恒河猴小肠的分布及表达水平,通过免疫荧光双标技术观察小肠固有层(LP)免疫球蛋白A阳性浆细胞(IgA^(+)PC)中D3~D5... 详细信息

目的探讨多巴胺受体D3~D5在不同物种小肠的分布和定位。方法应用免疫组织化学和免疫印迹法,分别检测D3~D5在小鼠、大鼠和恒河猴小肠的分布及表达水平,通过免疫荧光双标技术观察小肠固有层(LP)免疫球蛋白A阳性浆细胞(IgA^(+)PC)中D3~D5的表达。结果D3和D5在小鼠、大鼠和恒河猴小肠的上皮层、LP、黏膜下神经丛(SMP)和肌间神经丛(MP)内广泛分布;D4在小鼠和恒河猴小肠的分布与D3和D5一致,但在大鼠小肠仅分布于上皮层和LP。小鼠和大鼠LP内的IgA^(+)PC均表达D3和D5,不表达D4。结论D3和D5在小鼠、大鼠和恒河猴小肠具有相似的分布和定位模式,D4则存在物种差异。多巴胺可能参与调节IgA^(+)PC的功能。

关键词：多巴胺受体小肠免疫球蛋白A阳性浆细胞免疫印迹法免疫荧光小鼠大鼠恒河猴

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整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化

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解剖学报 2013年第4期44卷 525-529页

作者：穆灵敏王文锋郭志坤张光谋新乡医学院形态学实验室新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化。方法利用免疫组织化学和RT-PCR方法,检测胚胎18d(E18d)、生后5d(P5d)、P19d、P40d及生后1年(P1y)大鼠心肌组织的CD11a、CD11b和CD11c的基因和蛋白表达。结果免疫组织化... 详细信息

目的探讨整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化。方法利用免疫组织化学和RT-PCR方法,检测胚胎18d(E18d)、生后5d(P5d)、P19d、P40d及生后1年(P1y)大鼠心肌组织的CD11a、CD11b和CD11c的基因和蛋白表达。结果免疫组织化学结果显示,大鼠心肌组织CD11a、CD11b和CD11c表达部位在心肌细胞质内;从E18d到P1y大鼠心肌组织CD11a、CD11b和CD11c的表达逐渐减弱。RT-PCR显示,CD11a、CD11b、CD11c各组均呈阳性表达。其中CD11a在P5d和P40d间,P5d和P19d间比较(P>0.05)差异无统计学意义,其他各组间比较差异均有统计学意义;CD11b在E18d、P5d、P19d和P40d分别比较(P>0.05)差异无统计学意义,其他各组差异均有统计学意义;CD11c各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心肌的发育过程中出现表达量的变化,不同结构的整合素分子在心脏发育过程表现出相似的表达规律,它们可能对心肌细胞的发育起重要的调控作用。

关键词：心脏整合素CD 免疫组织化学反转录一聚合酶链反应大鼠

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CRISPR-Cas9系统在疾病模型中的应用

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中国生物工程杂志 2016年第10期36卷 79-85页

作者：朱少义管丽红林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)及相关核酸内切酶(Cas)系统是最近发现的一种关于RNA指导核酸内切酶的基因编辑技术,这一技术的发现促进了生物学和医学研究的发展。CRISPR-Cas9系统的简便性使其广泛应用于细胞基因组编辑、动物模型的构... 详细信息

规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)及相关核酸内切酶(Cas)系统是最近发现的一种关于RNA指导核酸内切酶的基因编辑技术,这一技术的发现促进了生物学和医学研究的发展。CRISPR-Cas9系统的简便性使其广泛应用于细胞基因组编辑、动物模型的构建及疾病模型的基因治疗。现就CRISPR-Cas9系统的结构特点、作用机制及应用进行了综述。

关键词： CRISPR-Cas9 基因编辑动物模型基因治疗

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鸡胚培养及活体电转基因方法的建立

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解剖学报 2012年第4期43卷 564-568页

作者：杨慈清毛会丽林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流6... 详细信息

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流60mA、间隔90ms和电脉冲6次(60ms/次)的条件下进行定时定位活体电转基因。结果带壳和去壳培养样本数分别为20个和10个,成活率分别是85%和80%,胚胎发育至2～3 d和5～6 d在脊髓和视顶部位转染样本数分别为11个和10个,阳性表达率为54.5%和60%。结论成功建立和优化了鸡胚培养和活体定时定位电转基因的方法。

关键词：发育培养活体电转鸡胚

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金葡菌类肠毒素K原核表达载体构建及其生物学活性分析

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中国生物工程杂志 2015年第12期35卷 45-50页

作者：刘彦礼牛荣成杨芬朱文慧林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:金葡菌类肠毒素K(SElK)原核表达载体构建及其生物学活性初步分析。方法:通过常规分子生物学技术将SElK基因片段插入载体p ET-28a中,阳性单菌落扩大培养,诱导目的基因表达后通过Ni+亲和层析纯化SElK重组蛋白;小鼠脾淋巴细胞增殖实... 详细信息

目的:金葡菌类肠毒素K(SElK)原核表达载体构建及其生物学活性初步分析。方法:通过常规分子生物学技术将SElK基因片段插入载体p ET-28a中,阳性单菌落扩大培养,诱导目的基因表达后通过Ni+亲和层析纯化SElK重组蛋白;小鼠脾淋巴细胞增殖实验及尾静脉注射后血常规检测SElK超抗原活性;进一步通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性及尿素(Urea)和肌酐(CR)含量来评价SElK潜在肠毒性。结果:成功构建SElK原核表达载体,并通过Ni^+亲和层析获得高纯度SElK重组蛋白(>95%);随后的超抗原活性检测发现SElK能够在体外刺激小鼠脾淋巴细胞显著增殖,尾静脉注射后能够有效地刺激血液中淋巴细胞增殖;最终的肠毒性检测结果发现SElK能够显著增加血清中AST活性及Urea含量。结论:成功构建并纯化获得高纯度SElK重组蛋白,并对其超抗原活性及潜在肠毒性进行初步分析,为开发更优的抗肿瘤制剂提供备选药物。

关键词：超抗原金葡菌类肠毒素 T淋巴细胞血常规肠毒性

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鸡胚活体原位电转基因技术报告基因绿色荧光蛋白质量评估

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解剖学报 2012年第4期43卷 468-472页

作者：杨慈清毛会丽郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒... 详细信息

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒转入带壳培养第3天和第3天去壳培养至第5天的鸡胚,在电转基因24h后荧光体视显微镜观察,选择对照组和阳性表达胚胎,每组各5个胚胎,冷冻切片后进行荧光免疫组织化学检测α-SMA和NF分别在脊髓和视顶部位的表达状况。结果在脊髓和视顶不同发育阶段和转染的不同时间,实验组、对照组及GFP阳性表达区域和正常区域内α-SMA、NF两种蛋白表达不存在差异,胚胎形态结构也不存在差异。结论原位电转GFP在鸡胚发育早期过程中不影响正常基因的表达及鸡胚胎发育形态结构的变化,可以作为报告基因。

关键词：胚胎绿色荧光蛋白 α-平滑肌肌动蛋白神经丝蛋白活体电转鸡

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基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞相关基因功能方法的建立

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解剖学报 2016年第3期47卷 415-420页

作者：于亚楠刘彦礼杨慈清张必超徐振平林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞（NSCs）相关基因功能的方法。方法 RT-PCR检测鸡胚发育不同时期脊髓NSCs表面标志物;在鸡胚胚龄（E）E2.5~E3时,利用活体电转基因技术将p CAGGSGFP质粒转染到鸡胚脊髓,E6时体视荧光显微... 详细信息

目的建立一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞（NSCs）相关基因功能的方法。方法 RT-PCR检测鸡胚发育不同时期脊髓NSCs表面标志物;在鸡胚胚龄（E）E2.5~E3时,利用活体电转基因技术将p CAGGSGFP质粒转染到鸡胚脊髓,E6时体视荧光显微镜下筛选绿色荧光蛋白（GFP）阳性胚胎,每组至少取材5个;通过脊髓横切及open-book技术观察神经纤维投射情况;普通光学显微镜下剥离出3~5条脊髓,经胰蛋白酶消化、离心后,无血清NSCs培养基重悬获得细胞铺板,于37℃、5%CO_2细胞培养箱内培养,定时观察GFP阳性脊髓NSCs的形态变化。结果 RT-PCR结果表明,鸡胚脊髓中阳性表达NSCs表面标志物;随后的脊髓横切及open-book结果表明,GFP阳性转染侧的神经纤维能穿过底板,投射到脊髓对侧;而脊髓NSCs体外培养结果显示,GFP标记的脊髓细胞具有典型的NSCs形态,继续培养后有明显突起产生。结论本实验成功建立了一种基于鸡胚电转技术研究脊髓神经干细胞相关基因功能的方法。

关键词：脊髓神经干细胞基因功能活体电转鸡胚

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低温保存脂肪间充质干细胞的生物学特性评价

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解剖学报 2013年第5期44卷 646-650页

作者：李琼杨慈清郭志坤左红波李慈霞李和新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡医学院护理学院河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430030

目的探讨低温保存对小鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)体外培养的生物学特性和分化潜能的影响。方法分离、培养小鼠ADMSCs,取第3代细胞置于液氮深低温(-196℃)冻存12个月后复苏。MTT法测定ADMSCs的增殖活性;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检... 详细信息

目的探讨低温保存对小鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)体外培养的生物学特性和分化潜能的影响。方法分离、培养小鼠ADMSCs,取第3代细胞置于液氮深低温(-196℃)冻存12个月后复苏。MTT法测定ADMSCs的增殖活性;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老;免疫细胞化学方法检测细胞表面分子CD73、CD90和CD105;条件培养基诱导后,免疫荧光法检测心肌特异性肌钙蛋白(cTnT),茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色检测成骨、成脂诱导分化潜能,Real time-PCR检测cTnT、Gata4、Ost和Runx2。未经低温保存的第3代ADMSCs为对照。结果低温保存的ADMSCs其增殖活性、衰老率与未冻存细胞比较差异无显著性(P>0.05)。诱导后ADMSCs的cTnT阳性表达、茜素红、碱性磷酸酶和油红O染色呈阳性反应,冻存组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论低温保存对ADMSCs体外生长特性和成心肌、成脂肪细胞、成骨细胞的分化潜能差异无显著性。

关键词：脂肪间充质干细胞细胞分化细胞增殖细胞衰老低温保存免疫荧光实时定量PCR

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高龄大鼠心室肌间质弹性纤维和胶原纤维的结构分布特征及其机制

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解剖学报 2023年第6期54卷 716-721页

作者：许亚平余悦欣陈金福王柯柯郭志坤郑州市第七人民医院河南省心脏重构与移植重点实验室郑州450000 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨高龄大鼠心室肌间质弹性纤维和胶原纤维的结构分布特征及其机制。方法青年SD大鼠(24周)和高龄SD大鼠(104周)各5只,小动物超声检测心功能,采用改良Weigert弹力纤维染色、免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting,分别检测心室... 详细信息

目的探讨高龄大鼠心室肌间质弹性纤维和胶原纤维的结构分布特征及其机制。方法青年SD大鼠(24周)和高龄SD大鼠(104周)各5只,小动物超声检测心功能,采用改良Weigert弹力纤维染色、免疫组织化学、免疫荧光和Western blotting,分别检测心室肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维及蛋白、弹性纤维及蛋白、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达变化。结果高龄大鼠心室肌间质Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白丰富,包绕心肌细胞周围,与青年大鼠相比,高龄大鼠心室肌间质胶原蛋白含量明显增多(P<0.05)。高龄大鼠心室肌间质弹性纤维分布广泛,与青年大鼠比较,高龄大鼠心室肌间质弹性纤维数量和弹性蛋白水平均明显减少(P<0.05)。高龄大鼠心室肌MMP-2和MMP-9水平增高,且与弹性蛋白水平呈相互消长关系。高龄大鼠心室肌TIMP-2水平随年龄增加而降低。结论高龄大鼠心室肌间质胶原纤维数量和弹性纤维数量存在相互消长的关系。随年龄的增长大鼠心室肌间质TIMP-2和弹性纤维含量减少,同时胶原纤维与弹性纤维比例失调。

关键词：基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶9 基质金属蛋白酶抑制剂2 胶原纤维弹性纤维心室肌免疫荧光免疫印迹法大鼠

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C1型尼曼-匹克症小鼠脊髓胶质细胞的活性变化

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解剖学报 2017年第3期48卷 260-265页

作者：杨恩慧乔梁林俊堂闫欣新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的通过观察C1型尼曼-匹克症小鼠不同脊髓节段星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化,探讨Npc1基因突变对脊髓发育的影响。方法 Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生Npc^(1-/-)(n=3)和Npc1^(+/+)小鼠(n=3),PCR检测新生小鼠的基因型;选取35日龄的N... 详细信息

目的通过观察C1型尼曼-匹克症小鼠不同脊髓节段星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化,探讨Npc1基因突变对脊髓发育的影响。方法 Npc1^(+/-)小鼠交配繁殖产生Npc^(1-/-)(n=3)和Npc1^(+/+)小鼠(n=3),PCR检测新生小鼠的基因型;选取35日龄的Npc1^(-/-)和Npc1^(+/+)小鼠,采用免疫荧光方法观察对比脊髓不同节段(颈、胸、腰、骶)星形胶质细胞和小胶质细胞的活性变化。采用免疫双染色检测胶质细胞中炎性因子的表达情况,采用免疫印迹方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、SMI31和磷酸化的tau蛋白表达情况。结果在35日龄Npc1^(-/-)小鼠脊髓的各个节段,其背角和腹角的星形胶质细胞和小胶质细胞的活性均明显增强(P<0.05),并伴随细胞炎性因子IL-1β表达量的显著增加;同时,脊髓神经丝蛋白和骨架蛋白tau蛋白发生超磷酸化。结论 Npc1基因突变引起脊髓神经胶质细胞发生病理性变化,可能是脊髓神经元病理性损伤的重要原因。

关键词： C1型尼曼-匹克症脊髓星形胶质细胞小胶质细胞免疫印迹法小鼠

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