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大鼠冠状动脉粥样硬化钙化组织与c-kit^(+)和sca-1^(+)细胞的关系研究

中国临床解剖学杂志 2023年第4期41卷 453-458页

作者：孙攀文郭永龙贾阳阳孙昌业郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院心内科河南新乡453003

目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆... 详细信息

目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆固醇饲料喂养和维生素D3腹腔注射方法制备模型。模型制备成功后,通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察sca-1、c-kit在模型组与正常组的大鼠冠状动脉组织中的表达变化。利用免疫荧光双标技术证明sca-1与α-SMA的共定位表达。利用western blotting技术检测模型组与正常组的冠状动脉组织c-kit、sca-1蛋白的表达差异。结果造模12周,大鼠冠状动脉管壁明显增厚,内膜明显增生,平滑肌纤维排列显著紊乱,坏死物质沉积、脂质沉积和钙结节沉淀。免疫组化和免疫荧光结果显示sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞在动脉粥样硬化钙化区域的冠状动脉内膜、中膜、外膜中数量明显高于正常对照。病变区域的部分细胞存在sca-1与α-SMA的共表达。Western blotting结果显示动脉粥样硬化和钙化区域的c-kit、sca-1蛋白的表达量高于正常对照组。结论sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞有向冠状动脉粥样硬化钙化区域迁移的倾向,其机制尚需研究。

关键词： sca-1 c-kit 动脉粥样硬化钙化免疫组织化学大鼠心脏

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一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射研究方法的建立

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解剖学报 2014年第5期45卷 724-728页

作者：胡阿珍杨慈清付苏雷贾阳阳李晗郭志坤林俊堂河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003

目的建立一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。方法采用鸡胚带壳开窗培养技术,在鸡胚胚龄3d(E3),通过活体电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到脊髓腔进行定时定位活体电转,转染后3d在... 详细信息

目的建立一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。方法采用鸡胚带壳开窗培养技术,在鸡胚胚龄3d(E3),通过活体电转基因技术将携带有报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的质粒(pCAGGS-GFP)准确注射到脊髓腔进行定时定位活体电转,转染后3d在体视荧光显微镜下进行观察;取出GFP阳性表达的胚胎,剥离出脊髓,从顶板处破开之后将脊髓展开,用4%多聚甲醛固定1h后,对神经钙黏蛋白(N-cadherin)进行免疫荧光染色,用4’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染细胞核;封片后在荧光显微镜下观察神经纤维投射情况。结果对比横向切片和脊髓展开标本,两者均观察到GFP阳性转染侧的神经元纤维穿过底板沿对侧脊髓白质区边缘投射到神经结节,在脊髓展开标本中还可观察到神经纤维穿过底板再纵向向脑部投射;而N-cadherin免疫荧光染色结果表明,GFP基因的转染对机体正常的发育无明显影响。结论本实验建立了一种鸡胚发育过程脊髓神经纤维投射的研究方法。

关键词：脊髓神经纤维投射活体电转鸡胚

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睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为及海马神经元脑源性神经营养因子表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2012年第6期21卷 481-483页

作者：徐辉罗欢欢朱金富 453003新乡新乡医学院心理学系河南省医用组织再生重点实验室

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法... 详细信息

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法对剥夺组进行连续24h的全睡眠剥夺，剥夺干预后随即对各组大鼠进行敞箱实验；免疫组织化学和逆转录聚合链式反应法测海马神经元BDNF表达水平。结果第6，12，18，24天四次行为测试得分显示，剥夺组大鼠的探索行为得分呈现先降低后升高趋势，第24天探索行为得分与抑郁组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化结果显示，与抑郁组[积分光密度：108．53±4．45，阳性面积比：0．0747±0．0262]相比，剥夺组[积分光密度：116．00±5．61，阳性面积比：0．2034±0．0352]大鼠海马神经元BDNF蛋白表达明显增高（尸〈0．05），而与正常组[积分光密度：117．27±10．66，阳性面积比：0．2252±0．1143]相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR结果和免疫组化结果相符。结论睡眠剥夺能改善抑郁模型大鼠的探索行为能力，其机制可能与提高海马组织BDNF的含量有关。

关键词：抑郁症海马脑源性神经营养因子探索行为

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肥胖小鼠脂肪组织中炎症因子的表达

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解剖学报 2020年第3期51卷 425-430页

作者：宋莹张晗思李茜茜马梦雪王帅林俊堂乔梁闫欣河南省干细胞与生物治疗工程研究中心新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨肥胖对小鼠脂肪中炎症因子分泌的影响及其作用的分子机制。方法随机选取20只Lepob/ob肥胖小鼠作为研究对象,同窝野生型C57BL/6 J小鼠作为对照组。测定小鼠体重、脂肪重量、血糖、葡萄糖耐量和胰岛素耐量;HE染色观察白色和褐色... 详细信息

目的探讨肥胖对小鼠脂肪中炎症因子分泌的影响及其作用的分子机制。方法随机选取20只Lepob/ob肥胖小鼠作为研究对象,同窝野生型C57BL/6 J小鼠作为对照组。测定小鼠体重、脂肪重量、血糖、葡萄糖耐量和胰岛素耐量;HE染色观察白色和褐色脂肪细胞的状态,并对脂肪细胞直径进行统计学分析;Western blotting检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子κB(NF-κB)、蛋白激酶B(Akt)和p-Akt的蛋白表达;Real-time PCR分析白色和褐色脂肪中CC-趋化因子配体2(CCL2)、CD44、集落刺激因子2(CSF2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Iba1、白细胞介素(IL)-1α、IL-6、IL-7、JUN和S100βmRNA的表达。结果与对照组相比,Lepob/ob小鼠的体重随年龄的增长而显著增加(P<0.001),白色脂肪重量、皮下脂肪重量及血糖显著升高(P<0.01,P<0.01,P<0.01),葡萄糖耐量较低(P<0.001)并产生胰岛素抵抗(P<0.001);脂肪细胞直径显著增大,且各个脂肪组织均有巨噬细胞浸润灶出现;脂肪细胞内Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、p-JAK2、iNOS、NF-κB、Akt和p-Akt蛋白表达均显著升高(P<0.05);CCL2、CD44、IL-1α、IL-6、IL-7、JUN和S100βmRNA表达均显著升高。结论肥胖诱导小鼠脂肪组织中炎症因子显著表达,促使细胞分泌传导紊乱,导致炎症级联发生。

关键词：肥胖症脂肪组织炎症免疫印迹法实时定量聚合酶链反应 Lepob/ob小鼠

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新生大鼠心肌telocytes在体外培养状态下的分裂方式

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解剖学报 2015年第5期46卷 629-633页

作者：常玉巧李辞霞郭志坤李和甘黎牛艳菲新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 华中科技大学同济医学院人体解剖学与组织学胚胎学系武汉430030

目的探讨体外培养新生大鼠心肌telocytes的分裂方式。方法采用0.1%胶原酶I/0.125%胰蛋白酶联合消化法分离培养新生大鼠心肌telocytes,活细胞工作站动态捕捉和苏木素染色检测telocytes的分裂方式。结果酶联合消化法培养新生大鼠心肌teloc... 详细信息

目的探讨体外培养新生大鼠心肌telocytes的分裂方式。方法采用0.1%胶原酶I/0.125%胰蛋白酶联合消化法分离培养新生大鼠心肌telocytes,活细胞工作站动态捕捉和苏木素染色检测telocytes的分裂方式。结果酶联合消化法培养新生大鼠心肌telocytes纯度高、活力好,增殖迅速。无丝分裂时,胞核变大,以出芽方式生长,形成哑铃状细胞核,核芽逐渐拉伸并与母细胞分离。有丝分裂前中期,染色质缩短变粗为染色体,整齐地排列在赤道板处;分裂末期,染色体到达两极,子核已初步形成;胞质分裂期,胞质逐步拉开,形成两个子细胞。在有丝分裂不同时期,心肌telocytes均保持其原有的形态特征。结论体外培养心肌telocytes增殖时有丝分裂和无丝分裂两种方式并存。

关键词：无丝分裂有丝分裂 Telocytes 酶联合消化法新生大鼠

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大鼠心室重构中c-kit与microRNA-21基因表达的研究

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临床心血管病杂志 2016年第3期32卷 287-290页

作者：刘振李硕刘玲玲郭志坤王鹏飞新乡市中心医院河南新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室

目的:研究c-kit与microRNA-21基因在大鼠左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常对照组和心衰模型组。心衰模型制作:4 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周1次,共6周。正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。在... 详细信息

目的:研究c-kit与microRNA-21基因在大鼠左室重构中的动态表达,探讨其内在联系和作用机制。方法:SD雄性大鼠随机分为正常对照组和心衰模型组。心衰模型制作:4 mg/kg阿霉素腹腔注射,每周1次,共6周。正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液。在8周时对大鼠进行心功能检测,证明心衰形成。取心脏组织,冰冻切片,利用免疫组织化学、免疫荧光显色、RT-PCR等技术检测心肌组织中microRNA-21和c-kit的基因表达变化。结果:HE染色示:各个时间点呈现不同的病理学变化;对照组未出现心肌梗死表现。免疫组织化学和免疫荧光显示:在正常和心衰心肌中microRNA-21阳性细胞主要表达于血管内皮,少量心肌细胞和干细胞,而在心衰心肌组织中的表达量明显减少;c-kit阳性细胞常成群分布,主要聚集于心外膜及其附近,心衰后表达量较正常心肌明显减少。在两组心肌组织中均有少数细胞存在microRNA-21和c-kit共表达。RT-PCR结果显示:心衰模型组c-kit和microRNA-21表达比正常对照组明显减少(P<0.05)。结论:阿霉素致大鼠左室重构的心肌内c-kit和microRNA-21阳性干细胞减少,其表达异常与左室重构具有高度的相关性且存在一定的内在联系。

关键词： c-kit microRNA-21 免疫组织化学免疫荧光心室重构

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Wnt/β-catenin信号通路对孤独症模型大鼠重复呆板样行为的影响

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中国临床解剖学杂志 2015年第4期33卷 430-433,442页

作者：张应花贾云杰张天然崔卫刚王中平文小军新乡医学院基础医学院解剖学教研室河南新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院图书馆河南新乡453003 复旦大学上海医学院人体解剖与组织胚胎学系上海200032

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对孤独症发生过程中重复呆板样行为的影响。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)孤独症动物模型,检测了经典Wnt信号通路关键信号分子β-catenin及其负性调节因子GSK-3β在孤独症模型大鼠小脑脑区的表达变... 详细信息

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路对孤独症发生过程中重复呆板样行为的影响。方法利用丙戊酸(valproic acid,VPA)孤独症动物模型,检测了经典Wnt信号通路关键信号分子β-catenin及其负性调节因子GSK-3β在孤独症模型大鼠小脑脑区的表达变化;同时检测孤独症模型大鼠重复呆板样行为变化。Western blotting法检测GSK-3β、β-catenin总蛋白及磷酸化蛋白表达,运用旷场实验检测重复呆板样行为持续的时间、次数。结果与对照组相比,在小脑脑区模型组GSK-3β磷酸化蛋白表达增加,β-catenin磷酸化蛋白表达减少;重复呆板样行为持续的时间、次数均增加。结论孤独症大鼠小脑脑区经典wnt信号通路活性增加,运动亢进,提示经典Wnt信号通路活性增加可能导致重复呆板样行为变化,进而导致对孤独症的易感性增加。

关键词：孤独症 Wnt/β-catenin通路丙戊酸重复呆板样行为

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6-羟多巴损伤黑质导致迷走神经背核乙酰胆碱转移酶和酪氨酸羟化酶表达变化

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第三军医大学学报 2012年第17期34卷 1754-1757页

作者：连辉蔡青青王志勇新乡医学院基础医学院人体解剖学教研室河南新乡453003 新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的观察6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损伤大鼠黑质后迷走神经背核(dorsal motor nucleus ofthe vagus,10N)中乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化。方法 16只SD大鼠根据随机数字表分为6-OHDA大鼠组和对照组。6-OHDA大鼠组双侧黑质(substantia nigra,SN)内注射6-OHDA,对照组双侧SN内注射等体积的生理盐水。6周后断头取脑,Nissl染色观察SN和10N中的Nissl小体,免疫荧光和免疫印迹检测SN内TH和10N内ChAT与TH的表达。结果与对照组比较,6-OHDA大鼠组SN内TH阳性细胞数量从(54±5)个减少至(13±2)个(P<0.05),蛋白表达水平从0.62±0.13降低至0.34±0.11(P<0.05),10N中ChAT阳性细胞数量从(37±3)个减少到(26±5)个(P<0.05),TH阳性细胞数量从(6±3)个增加到(13±2)个(P<0.05),背侧延髓内ChAT的蛋白表达水平从0.07±0.02下降至0.05±0.02(P<0.05),TH蛋白表达水平从0.08±0.05增高到0.13±0.04(P<0.05)。结论 6-OHDA大鼠10N中ChAT和TH表达变化可能与帕金森病患者的胃排空障碍存在一定的联系。

关键词： 6-羟多巴迷走神经背核乙酰胆碱转移酶酪氨酸羟化酶

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三种经典钙黏蛋白分子在鸡胚脊髓发育过程中的表达模式

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解剖学杂志 2015年第3期38卷 261-264,F0003页

作者：李晗杨慈清乔梁张必超于亚楠林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的：揭示神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。方法：取鸡胚正常发育过程 E3、E4、E5、E6、E8和 E10各时期的脊髓,原位杂交法检测神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空... 详细信息

目的：揭示神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。方法：取鸡胚正常发育过程 E3、E4、E5、E6、E8和 E10各时期的脊髓,原位杂交法检测神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。结果：在 E3~E6时期,神经钙黏蛋白主要在神经上皮层、生皮节、脊索、顶板、底板以及背根神经节区域表达,E8~E10时期,其 mRNA 信号主要在灰质区和背根神经节；在 E3~E5时期,钙黏蛋白6主要在生皮节、顶板和底板表达,之后在顶板和底板的表达均减弱,主要在侧运动柱表达；E3~E6时期,钙黏蛋白7主要在生皮节、底板、基板背部、运动柱、背根和腹根强烈表达,E8之后其表达主要集中在灰质区和腹根。结论：神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7不同的表达模式预示着它们在脊髓及其周围组织发育过程中扮演不同角色。

关键词：神经钙黏蛋白钙黏蛋白6 钙黏蛋白7 原位杂交表达模式

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不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系

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广东医学 2017年第z2期38卷 13-16页

作者：胡春阳殷国田余悦欣新乡医学院第三附属医院心内科河南新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系。方法 SD大鼠共30只,分为幼年组(20~25日龄)、青年组(3~5月龄)和老年组(13~15月龄),每组10只,采用左冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死模型,Visual Sonic小动物超声成... 详细信息

目的探讨不同年龄大鼠急性心肌梗死后早期胶原纤维变化与心功能的关系。方法 SD大鼠共30只,分为幼年组(20~25日龄)、青年组(3~5月龄)和老年组(13~15月龄),每组10只,采用左冠状动脉结扎法制备急性心肌梗死模型,Visual Sonic小动物超声成像系统测定术后1周左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)和左室舒张/收缩末期内径(LVIDd,LVIDs)。石蜡切片行Masson染色,免疫组织化学检测梗死区Ⅰ型胶原纤维(COLⅠ)、Ⅲ型胶原纤维(COLⅢ)表达。结果随着年龄增长,梗死区域COLⅠ、COLⅢ表达逐渐增多,其间的心肌细胞逐渐减少;梗死后1周LVEF幼年组(59.63±3.21)%、青年组(41.46±4.16)%和老年组(39.38±2.60)%(P<0.01)。结论急性心肌梗死后早期心功能的降低与梗死区胶原纤维的增多有关,且年龄越大越显著。

关键词：心肌梗死心功能 Ⅰ型胶原纤维 Ⅲ型胶原纤维大鼠

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