检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床解剖学杂志 2023年第3期41卷 310-317,323页

作者：于露罗杰斯任毅赵艳杨文强杨新霞杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001

目的探讨肌肽对缺糖缺氧/复糖复氧(OGD/R)引起星形胶质细胞(astrocyte,AS)损伤的保护作用,并阐明其机制。方法分离新生24 h SD大鼠大脑皮质,培养并纯化AS后,随机分为对照组、模型组、OGD/R+肌肽组(1、3、9 mmol/L)。倒置显微镜观察细胞... 详细信息

目的探讨肌肽对缺糖缺氧/复糖复氧(OGD/R)引起星形胶质细胞(astrocyte,AS)损伤的保护作用,并阐明其机制。方法分离新生24 h SD大鼠大脑皮质,培养并纯化AS后,随机分为对照组、模型组、OGD/R+肌肽组(1、3、9 mmol/L)。倒置显微镜观察细胞形态;免疫荧光GFAP染色法测定细胞纯度;噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量;免疫荧光检测Phospho-Nrf2(S40)的入核水平;Western blotting法检测Nrf2总蛋白以及Phospho-Nrf2(S40)蛋白表达;qPCR法检测HO-1、NQO1 mRNA含量。结果与对照组相比,模型组细胞活力明显降低(P<0.01),LDH漏出及细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞内ROS生成明显增加(P<0.01),AS核内Phospho-Nrf2(S40)含量及其下游产物HO-1、NQO1 mRNA表达量下调(P<0.01)。与模型组相比,OGD/R+肌肽组(1、3、9 mmol/L)细胞活力明显升高(P<0.01),LDH漏出及细胞凋亡率降低(P<0.01),细胞内ROS生成不同程度减低(P<0.01),AS核内Phospho-Nrf2(S40)含量及其下游产物HO-1、NQO1 mRNA表达量上调(P<0.01)。结论肌肽可通过抑制OGD/R诱导ROS释放,激活Nrf2-ARE通路,进而增强其下游抗氧化酶HO-1、NQO1 mRNA的表达,对AS发挥保护作用。

关键词：肌肽缺糖缺氧/复糖复氧星形胶质细胞氧化应激 Nrf2

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人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原表位区预测及其小鼠多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第4期39卷 363-370页

作者：王金丽张新展高义沙周莉莉孙达权贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的优化人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原后制备小鼠抗多克隆抗体,并鉴定抗体特异性.方法利用生物信息学方法预测SHISAL1蛋白的抗原表位区,选取SHISAL1蛋白第28~97位氨基酸残基组成的多肽作为抗原,并命名为(SHISAL1-N);利用分子克隆技术,... 详细信息

目的优化人Shisa样蛋白1(SHISAL1)抗原后制备小鼠抗多克隆抗体,并鉴定抗体特异性.方法利用生物信息学方法预测SHISAL1蛋白的抗原表位区,选取SHISAL1蛋白第28~97位氨基酸残基组成的多肽作为抗原,并命名为(SHISAL1-N);利用分子克隆技术,将其编码序列克隆后插入pET-28a载体中构建重组质粒pET28a-SHISAL1-N.然后将pET28a-SHISAL1-N和已构建的pET28a-SHISAL1全长重组质粒转化BL21(DE3),用异丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.两种蛋白纯化后分别免疫雌性昆明小鼠,Western blot法、免疫沉淀及免疫荧光细胞化学染色法观察两种抗体的特异性与灵敏性.结果成功构建pET28a-SHISAL1-N重组质粒,诱导两种融合蛋白表达,获得两种类型的SHISAL1小鼠多克隆抗体.Western blot结果表明以SHISAL1为免疫原所制备的抗体特异性和灵敏性较差,而以SHISAL1-N免疫原所制备的抗体能特异性识别不同的细胞内源性的SHISAL1蛋白;免疫沉淀结果表明SHISAL1-N抗体可以结合肝癌细胞中的SHIISAL1蛋白;免疫荧光细胞化学染色结果证明SHISAL1-N抗体与细胞质中的SHISAL1蛋白特异性结合.结论成功优化SHISAL1抗原并制备了小鼠抗人SHISAL1多克隆抗体,可应用于Western blot实验、免疫沉淀和免疫荧光细胞化学染色.

关键词： Shisa样蛋白1(SHISAL1) 抗原表位多肽原核表达多克隆抗体

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铁死亡中的溶酶体降解系统:质量调控与能量代谢

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中国病理生理杂志 2023年第9期39卷 1691-1696页

作者：刘师佐杨欢汤蓉王延蛟新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学第二临床医学院新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830017

铁死亡(ferroptosis)是近年来新发现的一种细胞死亡方式,其特征是胞内游离铁和脂质过氧化物的积累[1]。巨自噬(macroautophagy;下文简称自噬,au⁃tophagy)是隔离膜将胞质内底物包裹,并在溶酶体内降解为小分子以维持细胞发育和环境稳态的... 详细信息

铁死亡(ferroptosis)是近年来新发现的一种细胞死亡方式,其特征是胞内游离铁和脂质过氧化物的积累[1]。巨自噬(macroautophagy;下文简称自噬,au⁃tophagy)是隔离膜将胞质内底物包裹,并在溶酶体内降解为小分子以维持细胞发育和环境稳态的过程。自噬的质量调控和能量代谢对铁死亡的发生有重要意义。铁死亡中的质量调控由泛素系统和自噬-溶酶体系统构成,主要参与铁死亡相关蛋白的降解。

关键词：铁死亡自噬溶酶体

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生长阻滞特异性转录因子5剪接变异体GAS5_O1增强慢性髓系白血病细胞对伊马替尼的敏感性

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第3期40卷 348-361页

作者：张斯玮 Gwyn T.Williams 西安医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室西安710021 西安医学院西安市病原微生物与肿瘤免疫重点实验室西安710021 School of Life Sciences Keele UniversityStaffordshireUK

在多种肿瘤中,生长阻滞特异性转录因子5(growth-arrest specific transcript 5,GAS5)高表达与患者的良好生存期相关。GAS5存在多种剪接变异体,本研究探讨GAS5部分剪接变异体在髓系白血病细胞系中的表达模式。并基于对凋亡诱导敏感的慢... 详细信息

在多种肿瘤中,生长阻滞特异性转录因子5(growth-arrest specific transcript 5,GAS5)高表达与患者的良好生存期相关。GAS5存在多种剪接变异体,本研究探讨GAS5部分剪接变异体在髓系白血病细胞系中的表达模式。并基于对凋亡诱导敏感的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562,研究GAS5部分剪接变异体对K562细胞自身增殖、凋亡以及对靶向药物伊马替尼(imatinib,IM)的敏感性的影响。反转录PCR结果显示,GAS5剪接模式在髓系白血病细胞系HL-60、K562、NB4和KASUMI-1之间未见明显差异。相较于指数增长期,GAS5_AE表达水平在细胞密度引起的生长停滞期有一定程度的累积。通过核转染,将GAS5剪接变异体(pcDNA3-GAS5_1B、-GAS5_2B、-GAS5_3A、-GAS5_4A、-GAS5_O1或-GAS5_AE)转入K562细胞的单克隆株中。通过台盼蓝染色、吖啶橙染色后进行细胞计数,克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,瞬时转染GAS5剪接变异体并无抑制细胞的基础增殖或增强细胞对药物的敏感性。建立GAS5_O1的稳定转染株,延长培养时程并计算倍增时间,发现GAS5_O1的表达水平和倍增时间成正比(R^(2)=0.5692)。在稳转株O1-C8中观察到GAS5_O1可促进IM引起的细胞生长抑制(56.94%±2.84%vs.36.07%±2.32%,P<0.05)和凋亡(29.33%±1.30%vs.52.00%±2.52%,P<0.05)。上述结果表明,GAS5_O1的上调可能增加CML细胞的倍增时间,并使CML细胞对IM处理敏感。

关键词：生长阻滞特异性转录因子5 剪接变异体慢性髓系白血病凋亡

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玉米须多糖对D-半乳糖致衰老小鼠肾脏线粒体ATP合成的影响及机制

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中华老年医学杂志 2023年第1期42卷 86-91页

作者：高润泽翁诗雅姜雨竹黄睿王胜告于春艳董志恒曲萌北华大学基础医学院病理学教研室吉林132013 北华大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室吉林132013 北华大学基础医学院解剖学教研室吉林132013 吉林省肿瘤医院长春130012

目的探讨玉米须多糖(SMPS)对D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠肾脏线粒体ATP合成的影响,并阐明其可能的作用机制。方法采用颈背部皮下注射D-gal溶液的方法建立衰老小鼠模型。将48只SPF级雄性小鼠随机分为正常对照组(Control组)、D-gal模型组(D... 详细信息

目的探讨玉米须多糖(SMPS)对D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠肾脏线粒体ATP合成的影响,并阐明其可能的作用机制。方法采用颈背部皮下注射D-gal溶液的方法建立衰老小鼠模型。将48只SPF级雄性小鼠随机分为正常对照组(Control组)、D-gal模型组(D-gal组)、玉米须多糖低剂量组(30 mg/kg,SMPS-L组)、玉米须多糖高剂量组(60 mg/kg,SMPS-H组),每组12只。干预42 d后全麻下眼球取血,检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛;取肾脏组织,荧光素酶法检测各组小鼠肾组织中ATP的含量;实时荧光定量PCR法检测各组小鼠肾组织中线粒体氧化呼吸链中复合体Ⅱ的琥珀酸脱氢酶(SDH)、复合体Ⅲ的细胞色素C还原酶(Cycs)、复合体Ⅳ(COXⅣ)及ATP合酶中的ATP5b mRNA表达水平;Western blot法检测各组小鼠肾组织中线粒体融合蛋白2(MFN2)、动力相关蛋白1(DRP1)和线粒体自噬相关蛋白(P62)的表达水平。结果与Control组比较,D-gal组小鼠肾组织中ATP含量(178±4)×10-4μmol下降(P<0.01),SDH、Cycs、COXⅣmRNA表达水平无明显改变,ATP5b mRNA表达水平(0.67±0.01)下调(P<0.01),MFN2蛋白表达水平(0.29±0.02)降低(P<0.01),DRP1和P62蛋白表达水平(0.31±0.02、0.21±0.01)上升(P<0.01);与D-gal组比较,SMPS干预组小鼠肾组织中ATP含量(193±1)10-4μmol升高(P<0.01),ATP5b mRNA表达和MFN2蛋白表达(0.87±0.05、0.71±0.08)上升(均P<0.01),DRP1和P62蛋白表达(0.20±0.01、0.10±0.01)下调(均P<0.01)。结论SMPS可通过增加抗氧化酶的活性及上调ATP5b mRNA和MFN2蛋白的表达,下调DRP1和P62蛋白表达,改善衰老小鼠肾脏线粒体动态平衡紊乱,促进D-gal致衰老小鼠肾组织线粒体ATP的生成。

关键词：玉米须多糖衰老肾脏线粒体功能 ATP生成

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芦荟苷可抑制胃癌细胞的增殖和迁移:基于下调STAT3/HMGB1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第5期43卷 702-709页

作者：葛菲万梦琪程振宇陈雪雷陈芊伊戚之琳皖南医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002 皖南医学院药学院安徽芜湖241002 皖南医学院临床学院安徽芜湖241002

目的通过体内外实验探讨芦荟苷抑制胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法胃癌MGC-803细胞分为对照组、不同浓度芦荟苷(100、200和300μg/mL)处理组。CCK-8、EdU和Transwell实验分别检测细胞活力、细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测HMGB1 m... 详细信息

目的通过体内外实验探讨芦荟苷抑制胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法胃癌MGC-803细胞分为对照组、不同浓度芦荟苷(100、200和300μg/mL)处理组。CCK-8、EdU和Transwell实验分别检测细胞活力、细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA的表达水平;Western blot检测HMGB1,Cyclin B1/E1,E-cadherin,MMP-2/9的表达以及STAT3的磷酸化。JASPAR数据库预测STAT3与HMGB1启动子的结合。MGC-803细胞(2×106/只)注射于BALB/c-Nu小鼠腋下进行皮下植瘤,裸鼠随机分为对照组和芦荟苷组(n=5)。实验组使用芦荟苷50 mg/kg/d腹腔注射,对照组注射等量PBS。每日测量瘤体大小和小鼠质量;提取肿瘤组织蛋白,Western blot检测HMGB1,Cyclin B1/E1,E-cadherin,MMP-2/9和p-STAT3的表达。HE染色检测肝、肺组织中肿瘤转移情况。结果芦荟苷能够浓度依赖性的抑制胃癌细胞活力(P<0.05),不同浓度芦荟苷处理组EdU阳性染色细胞与对照组相比显著减少(P<0.01),芦荟苷处理的胃癌细胞转移能力明显较对照组减弱(P<0.01)。芦荟苷能够浓度依赖性的下调HMGB1 mRNA和蛋白表达(P<0.01),下调Cyclin B1,E1,MMP-2/9,上调E-cadherin,明显抑制p-STAT3。JASPAR数据库预测STAT3能够与HMGB1启动子区域相结合。芦荟苷处理组瘤体大小和质量明显低于对照组(P<0.01)。芦荟苷处理组Cyclin B1/E1,MMP-2/9,HMGB1和p-STAT3的表达与对照组相比明显降低,E-cadherin的表达则显著增强(P<0.01)。结论芦荟苷通过抑制p-STAT3/HMGB1信号途径,抑制胃癌细胞的增殖和迁移。

关键词：芦荟苷高迁移族盒蛋白1 胃癌增殖迁移

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蛋白酶体20S亚基β8调控丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶通路对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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中国医学科学院学报 2024年第5期46卷 641-652页

作者：郝宇菲石宇郑锦秀赵雪婷刘盛露杨利军山西医科大学基础医学院药理学教研室太原030001 山西医科大学基础医学院肿瘤免疫与靶向药物研发山西省高校重点实验室太原030001 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PS... 详细信息

目的探究蛋白酶体20S亚基β8(PSMB8)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以及是否通过调控丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路发挥其作用。方法采用癌症基因组图谱数据库分析ccRCC与正常组织PSMB8 mRNA的表达水平,并通过实时荧光定量PCR、Western blot和免疫组织化学染色等方法进一步检测PSMB8在ccRCC组织和细胞中的表达情况。构建稳定过表达和敲减PSMB8的细胞株,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭的能力。对PSMB8共表达基因进行京都基因与基因组百科全书通路富集分析,Western blot检测MEK/ERK通路相关蛋白的磷酸化水平,并加用ERK激动剂C16-PAF处理进行细胞功能学挽救实验。结果与正常组织比较,PSMB8 mRNA和蛋白在ccRCC组织中呈高表达(P均<0.001),且与临床患者的TNM分期显著相关(P<0.001);与阴性对照组比较,过表达PSMB8可以促进786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.021,P=0.039)、迁移和侵袭(P均<0.001),敲减PSMB8可以抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.022,P=0.005)、迁移和侵袭(P均<0.001);PSMB8共表达基因通路富集分析提示其可能与丝裂原活化蛋白激酶通路相关(P<0.001);敲减PSMB8后786-O和ACHN细胞MEK1/2(P=0.017,P=0.016)、ERK1/2(P=0.010,P=0.040)蛋白磷酸化水平及ERK下游因子c-Myc(P=0.043,P=0.038)、c-Fos(P=0.025,P=0.008)和CyclinD1(P=0.006,P=0.047)转录水平均下调;与ERK激动剂C16-PAF处理组比较,敲减PSMB8+C16-PAF组明显抑制786-O、ACHN细胞的增殖(P=0.003,P=0.002)、迁移和侵袭能力(P均<0.001)。结论PSMB8通过激活MEK/ERK信号通路从而促进ccRCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

关键词：肾透明细胞癌蛋白酶体20S亚基β8 丝裂原活化蛋白激酶激酶/细胞外信号调节激酶信号通路

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液⁃液相分离与神经系统退行性疾病

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中国生物化学与分子生物学报 2023年第3期39卷 364-374页

作者：胡俊杰姚真真海军军医大学基础医学院学员5大队上海200433 海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

细胞区室化(compartmentation)有助于分隔不同的生化反应,使其相互不产生干扰。有膜细胞器是通过生物膜把细胞内不同的空间分隔,进而实现细胞区室化。研究发现,细胞区室化也会通过细胞中无膜细胞器实现,但核仁等无膜区室的形成机制一直... 详细信息

细胞区室化(compartmentation)有助于分隔不同的生化反应,使其相互不产生干扰。有膜细胞器是通过生物膜把细胞内不同的空间分隔,进而实现细胞区室化。研究发现,细胞区室化也会通过细胞中无膜细胞器实现,但核仁等无膜区室的形成机制一直未得到明确。“液-液相分离”(liquid-liquid phase separation,LLPS)机制的发现,为解开无膜区室的谜题提供了全新的思路。现在认为,多种蛋白质和RNA也是通过LLPS机制形成局部的高浓度冷凝物,发挥更强或独特的基因表达调控、细胞信号转导等功能。LLPS的形成主要依赖于蛋白质和/或核酸之间的多价态非共价键相互作用,主要包括由低复杂序列区域介导的相分离及由多个重复结构域间特异性作用介导的相分离。组分浓度、pH和翻译后修饰等条件均能改变分子多价相互作用的强度,从而调节相分离和相变过程。蛋白质相分离的失调与肌萎缩性侧索硬化症、阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈症和帕金森病等多种神经退行性疾病的发生有关。在这些退行性疾病中,已发现TDP-43、FUS、Ataxin-2、Tau蛋白等致病基因的突变,以及修饰会导致LLPS异常而形成病理特征性的聚集体。但这些聚集体是否是神经退行性致病的直接致病因素尚未明确。

关键词：液-液相分离神经系统退行性疾病相变生物分子凝集体

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miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

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安徽医科大学学报 2024年第3期59卷 418-423页

作者：司马学琴苏延停曾智湖北科技学院医学部基础医学院组胚教研室咸宁437100 湖北科技学院医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室咸宁437100 咸宁市中心医院病理科咸宁437100

目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blo... 详细信息

目的探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠癌组织中低表达(P<0.05);TargetScan预测软件和双荧光素酶报告基因实验表明miR-27a靶向调控SFRP1;与NC组相比,miR-27a mimic组miR-27a表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,SFRP1蛋白表达降低,Wnt4和β-catenin蛋白表达增加(P<0.05);与miR-27a mimic组相比,miR-27a inhibitor组细胞内miR-27a表达下降,细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,SFRP1蛋白表达增加,Wnt4和β-catenin蛋白表达降低(P<0.05)。结论miR-27a能够靶向调控SFRP1,通过上调SFRP1,阻断下游的Wnt/β-catenin信号通路,抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移等生物学过程,从而发挥抑癌作用。为临床治疗提供了新方向。

关键词： miR-27a SFRP1 结直肠癌 Wnt4 β-catenin

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基于AKT/mTOR通路探讨齐墩果酸调控自噬对IL-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用

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中药药理与临床 2024年第5期40卷 57-62页

作者：赵欣敏卢金莹王高赵艳杨菁高秀秋锦州医科大学附属第二医院锦州121001 锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室锦州121001

目的:探讨齐墩果酸对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的保护作用及机制。方法:培养软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法及COLⅡ免疫荧光染色对软骨细胞进行纯度鉴定。将合格细胞随机分为空白对照组、模型对照组及齐墩果酸0.125、0.25、... 详细信息

目的:探讨齐墩果酸对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞损伤的保护作用及机制。方法:培养软骨细胞,利用甲苯胺蓝染色法及COLⅡ免疫荧光染色对软骨细胞进行纯度鉴定。将合格细胞随机分为空白对照组、模型对照组及齐墩果酸0.125、0.25、0.5μmol/L组。空白对照组用常规培养液培养;造模组用含10 ng/mL IL-1β常规培养液培养24 h建立损伤模型;齐墩果酸各浓度组以常规培养液预处理2 h后,再用IL-1β继续培养24 h。采用MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)含量;Western blot法检测细胞中MMP-13、COLⅡ、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR和β-actin的蛋白表达;免疫荧光法检测LC3在软骨细胞中的表达;加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)探究自噬在其中作用。结果:与空白对照组相比,模型对照组细胞存活率降低至50.95%,凋亡率、ROS水平、MMP-13、P62的表达及p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的比值均显著增加(P<0.01),COLⅡ的表达及LC3 II/I的比值均显著降低(P<0.01);与模型对照组相比,齐墩果酸0.125、0.25、0.5μmol/L组存活率显著升高,凋亡率显著降低,ROS水平、MMP-13、P62的表达及p-AKT/AKT和p-mTOR/mTOR的比值均显著降低,COLⅡ表达及LC3 II/I的比值均显著升高(P<0.01),免疫荧光可见LC3荧光强度随着齐墩果酸浓度增加逐渐增强;与齐墩果酸组相比,3-MA+齐墩果酸组细胞存活率降低至47.03%,COL II表达与LC3Ⅱ/Ⅰ的比值均降低,MMP-13、P62的表达均上调(P<0.01)。结论:齐墩果酸对IL-1β引起的软骨细胞损伤具有保护作用,其作用机制与抑制AKT/mTOR信号通路及改善自噬有关。

关键词：齐墩果酸软骨细胞白细胞介素-1β 自噬 AKT/mTOR信号通路

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