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中国生物化学与分子生物学报 2022年第5期38卷 595-602页

作者：贾蔓吕金晶向远彩西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室四川泸州646000 第三军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400038

核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多... 详细信息

核因子E2相关因子1(nuclear factor-erythroid 2 related factor 1,Nrf1/Nfe2l1)在个体正常生长发育过程中具有维持细胞内稳态和器官完整性的作用。其功能缺失会产生严重的氧化应激和基因组不稳定等,继而导致肝癌、神经退行性疾病等多种疾病。近年研究发现,Nrf1存在多种具有不同程度活化活性甚至相反活性的亚型,这些亚型的分布可能在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。为了更好地了解Nrf1在组织细胞中所发挥的功能,本文简要介绍Nrf1的发现历程,并从选择性剪切加工、内部选择性翻译起始、翻译后剪切加工等方面阐述Nrf1亚型的产生机制,同时详细阐明“跨膜动态加工”、“位点特异性剪切加工”、“泛素依赖性剪切加工”3种翻译后加工模型的差异。最后,介绍Nrf1各亚型的生物学功能及其产生过程出现异常时在疾病中的作用。本文着重对Nrf1各亚型产生机制及其在疾病中的作用进行综述,力求为寻找肿瘤治疗的新策略提供新的方向。

关键词：核因子E2相关因子1 RNA剪切翻译后修饰加工肿瘤治疗

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一种改良的DNA去甲基化慢病毒工具

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空军军医大学学报 2025年

作者：魏仁吉张翔贾林涛空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的改良一种DNA 5-甲基胞嘧啶去甲基化工具，实现对高甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）位点密集区域的去甲基化。方法基于CRISPR/Cas9系统以及SunTag系统原理，将现有质粒模板82559的不同功能元件拆分，重新整合为两个慢病毒质粒... 详细信息

目的改良一种DNA 5-甲基胞嘧啶去甲基化工具，实现对高甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸（CpG）位点密集区域的去甲基化。方法基于CRISPR/Cas9系统以及SunTag系统原理，将现有质粒模板82559的不同功能元件拆分，重新整合为两个慢病毒质粒，使用U251和PC-9细胞系建立双慢病毒感染的稳转系，从而提高表达效率；选择雷诺丁受体2（RYR2）基因启动子高甲基化CpG岛作为靶向区域，针对该区域设计单链向导RNA（sgRNA）并导入前述稳转系细胞中，通过比较对照组与实验组RYR2启动子区甲基化水平及基因表达水平，比较各处理组去甲基化程度。结果与转染82559质粒组相比，U251及PC-9双慢病毒稳转系表达dCas9和TET1CD的水平显著上升（P<0.001）；U251及PC-9双慢病毒稳转系转染RYR2-sgRNA后，其RYR2启动子区域去甲基化比例显著上升（P<0.01），RYR2基因表达水平相较于对照组及转染82559质粒组均明显上升（P<0.05、P<0.000 1）。结论改良后的慢病毒工具能有效提高dCas9及TET1CD的表达效率，并发挥去甲基化作用进而诱导目的基因表达，相较于原质粒82559具有明显的优效性，是一种有效的表观遗传编辑工具。

关键词： DNA甲基化去甲基化慢病毒质粒 CRISPR/Cas9系统表观遗传学

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脱氧核酶催化放大效应在微RNA传感中的研究与应用

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第7期40卷 889-896页

作者：王树急曹汝菲段晓雷遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563000 遵义医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州遵义563000

微RNA(microRNAs,miRNAs)是一种与肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关的短序列非编码RNA,其具有丰度低、序列同源性高和易降解等特点,因此,miRNAs的高灵敏、高特异检测面临巨大挑战。具有RNA切割活性的脱氧核酶是新兴的一类功能性单链DN... 详细信息

微RNA(microRNAs,miRNAs)是一种与肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关的短序列非编码RNA,其具有丰度低、序列同源性高和易降解等特点,因此,miRNAs的高灵敏、高特异检测面临巨大挑战。具有RNA切割活性的脱氧核酶是新兴的一类功能性单链DNA分子,此类酶能在金属离子的辅助下对核酸底物特异性切割,释放miRNA进行循环再利用,实现信号放大。目前,基于脱氧核酶催化放大检测miRNA的新方法研究是近年来科研人员的重点关注方向之一。本文根据脱氧核酶结合不同的生物传感新技术和新材料,对近年来发展出的基于脱氧核酶催化放大检测miRNAs的新方法进行分类与回顾,归纳为脱氧核酶DNA自组装、脱氧核酶偶联等温扩增以及脱氧核酶结合新型纳米材料的3类方向,并逐一阐述各个方向的基本原理及其在生物传感领域、医学检测方向的最新研究进展与应用实例,旨在为进一步的精准灵敏检测miRNAs新策略研究提供参考。

关键词：微RNA 脱氧核酶 DNA纳米自组装等温扩增纳米材料

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靶向HER2的通用型CAR-T细胞来源的细胞外囊泡的制备及功能鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第2期40卷 121-128页

作者：蒙若彤王鹏举赵晓娟郑瑞梁思辛张依婷董昊韩玉洁杨安钢白占涛阎博路凡延安大学生命科学学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 新乡医学院医学检验学院河南新乡453003

目的利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2^(+)肿瘤细胞的杀伤能力。方法采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文... 详细信息

目的利用可持续传代的T淋巴细胞系,制备携带靶向人表皮生长因子受体2(HER2)蛋白的嵌合抗原受体(CAR)的细胞外囊泡(EV),并检测其对HER2^(+)肿瘤细胞的杀伤能力。方法采用分子克隆技术构建重组慢病毒质粒。利用成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(Cas9)技术和慢病毒感染的方法构建底盘Jurkat细胞。流式细胞术检测底盘Jurkat细胞、嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞和CAR-Jurkat细胞的构建。通过聚乙二醇6000(PEG6000)浓缩方法和细胞挤压方法制备EV;微粒子追踪分析(NTA)和Western blot法鉴定EV。萤光素酶报告基因系统检测细胞和EV对肿瘤细胞的杀伤作用。荧光显微镜观察免疫细胞对EV的吞噬作用。结果酶切鉴定和基因测序结果表明重组质粒构建成功。流式细胞术结果显示底盘Jurkat细胞、 CAR-T细胞和CAR-Jurkat细胞顺利制备。NTA结果显示制备的EV大小正确。萤光素酶报告基因系统证明CAR-T细胞、 CAR-Jurkat细胞、 CAR-T EV和CAR-Jurkat EV对HER2+肿瘤细胞均具有靶向杀伤能力。荧光显微镜观察表明,提高CD47分子的表达水平能够减弱免疫细胞对通用型CAR-Jurkat EV的吞噬作用。结论通用型CAR-T细胞来源EV能够靶向杀伤HER2+肿瘤细胞。

关键词：嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞同种异体底盘细胞细胞外囊泡

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基于专业视角探索医学生物化学课程建设

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基础医学教育 2025年第1期27卷 33-37页

作者：王淑静黄冬梅屈小亚厦门医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室厦门361023

生物化学是临床医学专业重要的专业基础课。其课程建设是以专业培养目标为依据,遵循临床医学专业发展和课程本身知识体系内容特点。文章基于专业、教师、学生三个主体,知识、技能、素养三个目标,课前、课中、课后三个时段,实验、科研、... 详细信息

生物化学是临床医学专业重要的专业基础课。其课程建设是以专业培养目标为依据,遵循临床医学专业发展和课程本身知识体系内容特点。文章基于专业、教师、学生三个主体,知识、技能、素养三个目标,课前、课中、课后三个时段,实验、科研、临床三个环节,形成性评价、终结性评价、思政性评价三个体系,对生物化学课程教学目标、教学内容、教学方法、教学模式系统谋划,多角度、多渠道、全方位构建课程教育体系,有助于实现临床医学专业人才培养。

关键词：生物化学教学改革专业建设课程建设临床医学人才培养

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葡萄糖饥饿促进hnRNPA2B1细胞质转位并激活AKT维持前列腺癌细胞存活

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陆军军医大学学报 2024年第20期46卷 2284-2290页

作者：孙梁博贺梦刘冬何凤田连继勤杨明珍陆军军医大学(第三军医大学)药学与检验医学系临床生物化学教研室重庆1400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆1400038

目的探讨葡萄糖饥饿后介导核不均一核糖核蛋白A2B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1,hnRNPA2B1)向细胞质转位的分子机制及hnRNPA2B1细胞质转位增加对前列腺癌PC3细胞存活的影响。方法前列腺癌PC3细胞株在含葡萄糖的正常1... 详细信息

目的探讨葡萄糖饥饿后介导核不均一核糖核蛋白A2B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1,hnRNPA2B1)向细胞质转位的分子机制及hnRNPA2B1细胞质转位增加对前列腺癌PC3细胞存活的影响。方法前列腺癌PC3细胞株在含葡萄糖的正常1640培养基中常规培养(正常组),在不含葡萄糖的1640培养基中培养构建葡萄糖饥饿模型(饥饿组)。2组分别进行不同处理:去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)联合尼克酰胺(nicotinamide,NAM)处理(TSA/NAM组)、AKT抑制剂BEZ235处理、si-NC转染和si-hnRNPA2B1转染。采用细胞质和细胞核蛋白分离技术、免疫沉淀联合Western blot实验检测hnRNPA2B1乙酰化(acetylation,Ac)水平、AKT总蛋白及其磷酸化水平、细胞质和细胞核中hnRNPA2B1的表达水平;采用CCK-8检测各组细胞存活情况。结果与正常组比较,在葡萄糖饥饿处理3~5 h后,PC3细胞hnRNPA2B1蛋白乙酰化降低(P<0.01),其细胞质转位增加(P<0.01),AKT磷酸化增强促进AKT信号通路的激活;与饥饿组比较,使用TSA/NAM、BEZ235和转染si-hnRNPA2B1处理后hnRNPA2B1乙酰化水平明显上调(P<0.01),能够抑制葡萄糖饥饿介导的hnRNPA2B1细胞质转位、抑制AKT磷酸化,同时导致葡萄糖饥饿处理后的细胞存活率进一步降低(P<0.01)。结论葡萄糖饥饿环境通过诱导Ac-hnRNPA2B1-AKT信号通路激活,从而维持PC3细胞存活。

关键词：葡萄糖饥饿前列腺癌核不均一核糖核蛋白A2B1 乙酰化 AKT信号

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白藜芦醇减少肥胖小鼠肝细胞焦亡的初步探讨

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营养学报 2022年第2期44卷 194-199页

作者：龙月明徐冬梅曹琼琼虞芳梅鲁云霞安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)减少肥胖小鼠细胞焦亡致肝损伤的机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为标准(SCD)、高脂(HFD)及高脂+白藜芦醇(HFD+RES)饮食3组,标准或高脂饮食喂养,HFD+RES小鼠在高脂饮食的同时胃饲白藜芦醇(400 mg... 详细信息

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)减少肥胖小鼠细胞焦亡致肝损伤的机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机分为标准(SCD)、高脂(HFD)及高脂+白藜芦醇(HFD+RES)饮食3组,标准或高脂饮食喂养,HFD+RES小鼠在高脂饮食的同时胃饲白藜芦醇(400 mg/(kg·d)),持续22 w。测定体重,分析血脂和interleukin-1 beta (IL-1β)、interleukin-18(IL-18)水平,HE染色检测肝脏组织的形态学变化,免疫组化检测去乙酰化酶sirtuin-1(SIRT1)、P66SHC、NLR family pyrin domain containing 3 (NLRP3)的定位和表达,实时荧光定量RT-PCR和Western blot分析SIRT1、P66SHC(66ku Src homology 2 domain-containing protein)、NLRP3、cysteinyl aspartate specific proteinase-1(caspase-1)、gasdermin-D (GSDMD)、interleukin-1 beta (IL-1β)、interleukin-18 (IL-18)等的表达。结果体重、血液指标和HE染色结果均显示饮食诱导肥胖小鼠的炎症损伤模型构建成功;SIRT1表达量明显减少,P66SHC、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达均显著增加。与HFD小鼠相比,HFD+RES小鼠的体重、血脂指标和肝脏脂质沉积均显著减少,SIRT1表达量明显增加,P66SHC、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18表达均显著降低,且具有统计学意义。结论白藜芦醇有明显的抑制P66SHC-NLRP3炎性小体介导的GSDMD活化和细胞焦亡的效应,其机制可能与增加肥胖小鼠肝脏组织SIRT1的表达有关。[营养学报,2022,44(2):194-199]

关键词：白藜芦醇 SIRT1 肥胖肝脏 NLRP3炎性小体焦亡

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医学专业课课程思政元素的挖掘与实践

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全科医学临床与教育 2024年第2期22卷 97-99,106页

作者：童红梅程亚青郭敏柴连明李多福武洋甘肃医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室甘肃平凉744000

习近平总书记在全国高校思想政治工作会议上指出,要坚持把立德树人作为中心环节,把思想政治工作贯穿教育教学全过程,实现全程育人、全方位育人[1]。医学是生物与人文交叉的学科,医务工作者从事的是“健康所系、性命相托”的职业,工作的... 详细信息

习近平总书记在全国高校思想政治工作会议上指出,要坚持把立德树人作为中心环节,把思想政治工作贯穿教育教学全过程,实现全程育人、全方位育人[1]。医学是生物与人文交叉的学科,医务工作者从事的是“健康所系、性命相托”的职业,工作的对象是“人”,工作的内容是人的生命健康,育人更是医学院校需要回答的根本问题[2]。课程思政教育是将思想道德教育融入课程的新教育形式,可促进专业课程与思想政治理论互相结合、互相协调。

关键词：课程思政思想政治理论思想政治工作全方位育人立德树人思想道德教育全程育人人的生命

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高糖抑制蛋白KIAA0753和CCSAP表达并通过钙信号阻断小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的成骨分化

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中国药理学通报 2025年第3期41卷 456-465页

作者：王吉春钱正霞李梦雪汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院麻醉科重庆400016

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blo... 详细信息

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blot检测KIAA0753和CCSAP蛋白表达情况;转染过表达质粒进入人胚肾细胞(HEK-293T),免疫共沉淀检测蛋白KIAA0753和CCSAP相互作用;利用成骨培养基分别在不同葡萄糖浓度和不同诱导时间处理MC3T3-E1细胞,试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blot检测KIAA0753、CCSAP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)等蛋白的表达情况,然后再设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-CCSAP组MC3T3-E1细胞,依次检测KIAA0753、OCN、OPN蛋白的表达情况以及ALP活性;利用高通量基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中糖尿病鼠模型数据集筛选差异基因进行生物信息学分析;对MC3T3-E1细胞分别设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-KIAA0753组,Western blot检测钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡbeta,CAMK2B)、受磷蛋白(phospholamban,PLN)蛋白的表达。结果与5.5 mmol·L^(-1)组相比,25 mmol·L^(-1)抑制成骨细胞中KIAA0753和CCSAP蛋白表达,且蛋白KIAA0753和CCSAP存在相互作用。同时25 mmol·L^(-1)也抑制成骨细胞ALP、OPN、OCN蛋白表达,在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达CCSAP上调KIAA0753、OCN、OPN、ALP的表达。糖尿病鼠模型的差异基因主要富集在“信号受体、信号调控”等方面。25 mmol·L^(-1)葡萄糖抑制成骨细胞中CAMK2B、PLN蛋白的表达,且在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达KIAA0753上调CAMK2B、PLN蛋白的表达。结论高糖抑制KIAA0753和CCSAP蛋白表达,抑制小鼠胚胎成骨细胞前体细胞成骨分化和钙信号传导,过表达CCSAP挽救高糖对成骨分化的抑制作用以及过表达KIAA0753逆转高糖对钙信号通路的抑制作用。

关键词：糖尿病 KIAA0753 CCSAP 蛋白相互作用成骨分化钙信号

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苯丙氨酰-tRNA合成酶β亚基基因在肝癌中的表达及预后价值

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中华老年医学杂志 2022年第10期41卷 1191-1196页

作者：池刚裴晋红栗学清长治医学院基础医学部生物化学与分子生物学教研室长治046000

目的研究苯丙氨酰-tRNA合成酶β亚基(FARSB)基因在肝细胞癌中的表达、临床病理特征和预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载肝细胞癌和癌旁组织数据集,用R及Perl软件对下载数据进行整理分析。采用Cox回归和Kaplan-Meier分... 详细信息

目的研究苯丙氨酰-tRNA合成酶β亚基(FARSB)基因在肝细胞癌中的表达、临床病理特征和预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载肝细胞癌和癌旁组织数据集,用R及Perl软件对下载数据进行整理分析。采用Cox回归和Kaplan-Meier分析肝细胞癌患者临床病理特征与总生存期的关系。采用基因富集分析预测FARSB调控的信号通路。采用qPCR和Western blot检测FARSB在肝细胞癌及癌旁组织中的表达。结果FARSB在肝细胞癌组织中高表达,与临床病理分期显著相关。FARSB高表达的肝细胞癌患者预后较差。临床病理分期、T分期、M分期和FARSB基因与总体生存率显著相关,FARSB基因是独立预后因子。结论FARSB基因在肝细胞癌患者中高表达,导致肝细胞癌患者总体生存率下降,可作为肝细胞癌不良预后标志物。

关键词：肝肿瘤苯丙氨酸tRNA连接酶基因表达

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