检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学杂志 2024年第5期47卷 385-388页

作者：柏梦如徐佩雯巩赫喆车继超王丹田香勤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:探索大鼠肺成纤维细胞(PFs)快速分离培养方法,为肺纤维化体外研究提供更为科学便利的技术支持。方法:取新生SD大鼠肺组织,采用Ⅱ型胶原酶/胰酶混合酶消化法,应用显微镜对每次组织消化细胞悬液及沉淀进行观察分析,选择性收集细胞悬... 详细信息

目的:探索大鼠肺成纤维细胞(PFs)快速分离培养方法,为肺纤维化体外研究提供更为科学便利的技术支持。方法:取新生SD大鼠肺组织,采用Ⅱ型胶原酶/胰酶混合酶消化法,应用显微镜对每次组织消化细胞悬液及沉淀进行观察分析,选择性收集细胞悬液,同时对细胞差速贴壁时间进行梯度分组,优化最佳细胞贴壁时间节点,应用考马斯亮蓝染色观察细胞形态的均一性,应用波形蛋白标记鉴定PFs的纯度,应用α-平滑肌肌动蛋白标记鉴定细胞的分化能力,绘制细胞生长曲线检测细胞生长活性。结果:新生SD大鼠肺组织经前2次8 min消化,细胞悬液中主要为血细胞成分,沉淀多为血凝块和实质性组织成分;第3~6次消化后的细胞悬液主要为有核细胞成分,消化液沉淀多为胶原、黏连蛋白等基质团块。选择第3~6次消化细胞悬液进行差速贴壁分离细胞,综合细胞数量和细胞纯度分析,35 min差速贴壁最为理想,细胞活性较好,第1~4代细胞24 h达到对数生长期。结论:采用分次酶消化组织,有目的性地选取细胞悬液,35 min差速贴壁分离PFs,培养效果较好。

关键词：肺纤维化成纤维细胞细胞培养大鼠

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慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞

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解剖学报 2017年第1期48卷 43-47页

作者：朱占占侯宾孙雯雯院慧芳张永春蔡新华新乡医学院医用组织再生重点实验室河南新乡453003 河南省平顶山市第二人民医院心内科河南平顶山467000 新乡医学院第一附属医院感染科河南卫辉453003 新乡医学院第一附属医院心内科河南卫辉453003

目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP... 详细信息

目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P>0.05)。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白。

关键词：心肌成纤维细胞慢病毒-基质细胞衍生因子-1α绿色荧光蛋白载体转染斑点印迹法乳大鼠

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黄连素对H9c2心肌细胞缺氧性损伤大鼠巨噬细胞功能的影响

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医学新知 2019年第3期29卷 256-257,265页

作者：王鹏郭志坤新乡医学院/河南省医用组织再生重点实验室河南新乡476000

目的探讨黄连素(BBR)对H9c2心肌细胞缺氧损伤大鼠巨噬细胞功能的调控修复效果。方法单独培养大鼠骨髓性巨噬细胞(BMDM)、联合培养(BMDM +大鼠H9c2心肌细胞)均经BBR处理24 h,分别测定两组细胞中毒性;同时,BBR处理大鼠巨噬细胞24 h后测定B... 详细信息

目的探讨黄连素(BBR)对H9c2心肌细胞缺氧损伤大鼠巨噬细胞功能的调控修复效果。方法单独培养大鼠骨髓性巨噬细胞(BMDM)、联合培养(BMDM +大鼠H9c2心肌细胞)均经BBR处理24 h,分别测定两组细胞中毒性;同时,BBR处理大鼠巨噬细胞24 h后测定BMDM的巨噬细胞高迁移率族蛋白(HMGB1)与炎性因子IL-6、IL-1β。结果单独培养、联合培养经10μmol/L BBR处理均无毒性作用,可显著降低HMGB1与炎性因子水平;联合培养中,10 μmol/L BBR处理后,可调控巨噬细胞而降低缺氧细胞凋亡。结论H9c2心肌细胞缺氧损伤大鼠用黄连素处理可调控巨噬细胞与促炎症功能,进而达到修复缺损心肌细胞的作用。

关键词：黄连素巨噬细胞 H9c2心肌细胞缺氧损伤功能调控

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CK19和PCNA在肝纤维化大鼠部分肝切除后再生肝中的表达

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中国临床解剖学杂志 2012年第5期30卷 552-555页

作者：方方刘前进岳学强李娜娜刘恒兴新乡医学院人体解剖学教研室新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 永城市人民医院商丘476600

目的检测肝纤维化大鼠部分肝切除后不同时点CK19及PCNA的表达,了解胆管再生情况。方法雄性SD大鼠,对照组和实验组各42只,实验组腹腔注射CCl4制备肝纤维化模型,两组均进行部分肝切除术,在不同时点取材后利用HE、免疫组化及免疫荧光双标... 详细信息

目的检测肝纤维化大鼠部分肝切除后不同时点CK19及PCNA的表达,了解胆管再生情况。方法雄性SD大鼠,对照组和实验组各42只,实验组腹腔注射CCl4制备肝纤维化模型,两组均进行部分肝切除术,在不同时点取材后利用HE、免疫组化及免疫荧光双标染色等方法检测CK19和PCNA的表达情况。结果实验组和对照组术后随时间延长CK19表达均呈增强趋势,且实验组术后各时间点CK19的表达均高于对照组同时间点。两组PCNA的表达量都随时间推移逐步升高,但实验组大鼠明显上升缓慢,持续时间延长,表达高峰晚于对照组出现。结论 (1)肝纤维化大鼠部分肝切除能刺激肝卵圆细胞增殖和向胆管细胞的分化,而正常大鼠部分肝切除后再生肝中的胆管上皮细胞主要来源于原有细胞的代偿性增生。(2)术前肝纤维化大鼠的肝脏细胞就出现了增殖修复,术后由于肝纤维化大鼠本身肝脏受到伤害,因此肝脏的有效再生细胞数低于正常肝脏。

关键词：大鼠肝纤维化胆管 CK19 PCNA

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心肌脂肪酸代谢和心肌脂毒性损伤研究进展

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新乡医学院学报 2018年第7期35卷 646-650页

作者：孙晓鹏李辞霞郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

健康成年人50%~70%的心肌三磷腺苷来自于长链脂肪酸的β氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。正常心肌脂肪酸的摄取和氧化维持在一... 详细信息

健康成年人50%~70%的心肌三磷腺苷来自于长链脂肪酸的β氧化,获取的脂肪酸除供线粒体氧化功能外多余的部分以三酰甘油的形式储存于心肌细胞的脂滴中,并在需要时由三酰甘油酯酶水解为脂肪酸和甘油。正常心肌脂肪酸的摄取和氧化维持在一个动态平衡,过多的脂质在心肌内聚集会造成心肌脂毒性,心肌脂毒性可以造成心肌胰岛素抵抗、心肌细胞凋亡和心脏收缩功能障碍,实验和临床数据表明,减少毒性脂质可以改善心肌代谢和功能。目前临床上对心肌的脂毒性损伤尚未引起足够重视。本文查阅近年来国内外文献,就心肌脂肪酸代谢途径和心肌脂毒性、潜在性的脂毒性物质以及与临床的关系进行综述。

关键词：脂肪酸脂质代谢脂毒性心肌

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铁死亡在心血管疾病中的作用及研究进展

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解剖学杂志 2023年第6期46卷 530-533页

作者：李鹏达王峰郭志坤常玉巧新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

铁死亡是近年来发现的一种调节性细胞死亡方式,其特征为铁过载、脂质过氧化和活性氧积累等。铁死亡受铁代谢、脂质代谢和氨基酸代谢等多种代谢途径调控。在急性心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤、心力衰竭和动脉粥样硬化等心血管疾病中,铁... 详细信息

铁死亡是近年来发现的一种调节性细胞死亡方式,其特征为铁过载、脂质过氧化和活性氧积累等。铁死亡受铁代谢、脂质代谢和氨基酸代谢等多种代谢途径调控。在急性心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤、心力衰竭和动脉粥样硬化等心血管疾病中,铁死亡发挥重要作用,与心肌细胞损伤密切相关。探讨铁死亡在心血管疾病中的作用及研究进展,以期为治疗心血管疾病提供新的靶点。

关键词：铁死亡铁代谢心肌细胞心血管疾病

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CD73对骨髓间充质干细胞增殖与衰老的影响

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解剖学报 2017年第6期48卷 669-674页

作者：王琰李琼张三林郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 中国人民解放军第371医院心血管内科河南新乡453003

目的探讨CD73对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与衰老的影响。方法培养小鼠BMSCs,构建慢病毒CD73过表达载体和CD73 RNAi干扰载体,分别转染BMSCs,实验分组:CD73过表达组(OE组)、CD73RNAi干扰组(RNAi组)和对照组(CON组)。衰老相关β-半乳糖... 详细信息

目的探讨CD73对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖与衰老的影响。方法培养小鼠BMSCs,构建慢病毒CD73过表达载体和CD73 RNAi干扰载体,分别转染BMSCs,实验分组:CD73过表达组(OE组)、CD73RNAi干扰组(RNAi组)和对照组(CON组)。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞的衰老情况;MTT法检测细胞增殖能力变化;流式细胞术检测细胞周期变化;透射电子显微镜观测转染后细胞的超微结构;非损伤细胞功能分析仪检测细胞生长曲线。结果慢病毒转染BMSCs后72 h和168 h,衰老细胞数量RNAi组>CON组>OE组(P<0.05);转染后3~4d BMSCs的增殖能力为OE组较RNAi组和CON组细胞增殖速度快(P<0.05);转染后3d各组细胞周期的变化是:OE组、RNAi组和CON组的G1期细胞所占比例分别为25.9%、44.1%和51.7%;S期细胞所占比例分别为48.8%、30.9%和26.9%;G2期细胞所占比例分别为25.2%、25.0%和21.4%;透射电子显微镜观察结果显示,OE组细胞质内粗面内质网和核糖体增多;细胞生长曲线显示OE组高于CON组和RNAi组。结论 CD73促进BMSCs增殖且抑制BMSCs衰老。

关键词： CD73 增殖衰老骨髓间充质干细胞超微结构流式细胞术小鼠

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小鼠冠状动脉粥样硬化区域炎性因子对干细胞迁移的调控作用

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解剖学报 2024年第5期55卷 565-572页

作者：杨云孙攀文许亚平郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 郑州市第七人民医院河南省心脏重构与移植重点实验室郑州453000 USM-ALPS Laboratory for Heart Research Advanced Medicaland Dental InstituteUniversiti Sains MalaysiaBertamPenangMalaysia

目的探讨冠状动脉粥样硬化(AS)区域肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)炎性因子对干细胞抗原-1(Scal-1)和Nanog阳性细胞迁移的调控作用。方法取动脉粥样硬化模型小鼠和正常小鼠各10只,取出两组新鲜心脏,OCT包埋,冷冻切片,分别进... 详细信息

目的探讨冠状动脉粥样硬化(AS)区域肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)炎性因子对干细胞抗原-1(Scal-1)和Nanog阳性细胞迁移的调控作用。方法取动脉粥样硬化模型小鼠和正常小鼠各10只,取出两组新鲜心脏,OCT包埋,冷冻切片,分别进行HE染色和油红O染色,观察冠状动脉病理变化;免疫组织化学染色,光学显微镜观察TNF-α、IL-6、Scal-1和Nanog在冠状动脉壁的表达变化。取20只出生1周小鼠的心室组织,利用密度梯度离心法提取原代Scal-1和Nanog阳性细胞,并纯化、培养,免疫荧光技术鉴定Scal-1和Nanog阳性细胞纯度。取第1代(P1)细胞进行Transwell迁移实验,观察不同浓度的炎症因子对Scal-1和Nanog阳性细胞迁移的影响。结果血脂检测证明,模型小鼠总胆固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白胆固醇均明显高于正常对照组;组织学染色证明,所用小鼠模型均存在明显的冠状动脉粥样硬化。免疫组织化学结果显示,动脉粥样硬化区域炎症因子TNF-α和IL-6呈强阳性表达;同时,动脉粥样硬化斑块处Scal-1、Nanog阳性细胞较正常组增多。P1细胞中Scal-1的阳性率为80%,Nanog阳性率为91%。Transwell实验显示,低浓度IL-6对细胞迁移无作用,高浓度IL-6有抑制其迁移的作用;低浓度TNF-α促进细胞迁移,0.5μg/L TNF-α对细胞迁移影响最明显,在高浓度时起抑制迁移作用。结论TNF-α、IL-6和Scal-1、Nanog阳性细胞均参与AS的发生和发展,适当浓度的炎症因子可以增强干细胞向冠状动脉粥样硬化区域迁移。

关键词：干细胞抗原-1 Nanog 炎症因子动脉粥样硬化免疫组织化学免疫荧光细胞迁移实验小鼠

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CRISPR-Cas9基因编辑技术在眼科疾病中的应用

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眼科新进展 2018年第9期38卷 801-803,814页

作者：管丽红林俊堂新乡医学院生命科学技术学院干细胞中心河南省医用组织再生重点实验室河南省新乡市453003 新乡医学院生物医学工程学院河南省新乡市453003

规律成簇间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR)及相关核酸内切酶9(CRISPR associated protein,Cas9)技术是一种由RNA指导核酸内切酶的基因编辑技术。该技术以其操作简便、基因敲除效率高、靶向精准、周期短等特点迅速被用于多个物种的基因组编辑及疾病基因治疗中。本文旨在对CRISPR-Cas9技术在构建眼科疾病模型和治疗眼科疾病中的应用进展进行综述。

关键词： CRISPR-Cas9 基因组编辑基因治疗眼科疾病

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Pax3和Pax7在胚胎发育早期及神经嵴形成中的作用

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生物学杂志 2021年第2期38卷 100-104页

作者：李云晓杨慈清林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省干细胞与治疗工程研究中心新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

配对盒(Paired box,Pax)基因是一个高度保守的转录因子基因家族,在胚胎模式化和器官发生中起关键作用。Pax3和Pax7具有相似的蛋白质结构和生物学功能,同属于Pax基因第三亚家族,在中枢神经系统、神经嵴和骨骼肌的发育过程中表达。研究表... 详细信息

配对盒(Paired box,Pax)基因是一个高度保守的转录因子基因家族,在胚胎模式化和器官发生中起关键作用。Pax3和Pax7具有相似的蛋白质结构和生物学功能,同属于Pax基因第三亚家族,在中枢神经系统、神经嵴和骨骼肌的发育过程中表达。研究表明,Pax3和Pax7通过整合来自Wnts、骨形成蛋白(BMPs)和成纤维细胞生长因子(FGFs)的信号联合调控神经嵴的发生发育。对不同的脊椎动物发育模型的研究共同阐明了神经嵴基因调控网络(NC-GRN)中涉及Pax3和Pax7基因的分子机制。针对Pax3和Pax7基因的生物学特性及其在胚胎发育早期的功能,特别是二者对神经嵴发生发育的调控机制的最新研究进展作简要概述,为Pax3和Pax7相关研究提供理论基础,也为神经嵴异常相关疾病提供新的研究方向。

关键词： Pax3 Pax7 神经发育神经嵴 NC-GRN

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