检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2012年第8期28卷 718-721页

作者：杨慈清石晓卫胡阿珍贾阳阳郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术系新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每... 详细信息

目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每次脉冲60 ms,间隔100 ms,电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6小时开始到10天,分别收集胚胎,甲醛固定冰冻切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化。结果:电转后6小时便可以观察到GFP的表达,24小时后可以看到GFP标记细胞纤维的投射,3天可以清晰的观察到转入GFP一侧脊髓的运动神经元纤维束投射到另外一侧脊髓。结论:电转GFP成功标记运动神经元纤维在脊髓左右两侧的投射。

关键词：鸡胚胚胎发育活体电转纤维投射

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不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化

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解剖学报 2012年第3期43卷 366-371页

作者：齐立杰李琼郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430000

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组... 详细信息

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化。结果两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致。SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2～7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)%、(4.21±1.22)%、(9.00±0.98)%、(11.20±1.24)%、(9.50±2.19)%和(13.20±2.93)%;24月组分别为(8.67±1.05)%、(10.23±0.98)%、(12.80±0.78)%、(17.10±1.13)%、(19.80±1.59)%和(24.70±1.86)%。PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2～7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11.3±1.63)%;24月组4～7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%。结论老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化。

关键词：脂肪间充质干细胞衰老坏死免疫荧光细胞培养小鼠

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鸡胚培养及活体电转基因方法的建立

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解剖学报 2012年第4期43卷 564-568页

作者：杨慈清毛会丽林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流6... 详细信息

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流60mA、间隔90ms和电脉冲6次(60ms/次)的条件下进行定时定位活体电转基因。结果带壳和去壳培养样本数分别为20个和10个,成活率分别是85%和80%,胚胎发育至2～3 d和5～6 d在脊髓和视顶部位转染样本数分别为11个和10个,阳性表达率为54.5%和60%。结论成功建立和优化了鸡胚培养和活体定时定位电转基因的方法。

关键词：发育培养活体电转鸡胚

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鸡胚活体原位电转基因技术报告基因绿色荧光蛋白质量评估

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解剖学报 2012年第4期43卷 468-472页

作者：杨慈清毛会丽郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒... 详细信息

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒转入带壳培养第3天和第3天去壳培养至第5天的鸡胚,在电转基因24h后荧光体视显微镜观察,选择对照组和阳性表达胚胎,每组各5个胚胎,冷冻切片后进行荧光免疫组织化学检测α-SMA和NF分别在脊髓和视顶部位的表达状况。结果在脊髓和视顶不同发育阶段和转染的不同时间,实验组、对照组及GFP阳性表达区域和正常区域内α-SMA、NF两种蛋白表达不存在差异,胚胎形态结构也不存在差异。结论原位电转GFP在鸡胚发育早期过程中不影响正常基因的表达及鸡胚胎发育形态结构的变化,可以作为报告基因。

关键词：胚胎绿色荧光蛋白 α-平滑肌肌动蛋白神经丝蛋白活体电转鸡

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Bax、NOS在NMDA诱导的兴奋性神经毒中的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2012年第6期30卷 675-677页

作者：宋海岩李娜娜付升旗任铭新新乡医学院人体解剖学教研室、河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神... 详细信息

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神经元细胞随机分为正常组、NMDA组、NG-Nitro-L-arginine Methyl Este(r L-NAME)组,分别采用NO浓度测定、ELISA及Weastern blotting检测各组细胞中NO浓度、NOS的表达及Bax的表达。结果免疫荧光大多数细胞为NSE阳性细胞,L-NAME组中NO浓度、NOS及Bax的表达均高于正常组而低于NMDA组。结论 NO毒性在NMDA诱导的神经细胞凋亡中起重要的作用,其可能是通过上调Bax的表达发挥作用。

关键词：兴奋性神经毒一氧化氮合酶 Bax

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睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为及海马神经元脑源性神经营养因子表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2012年第6期21卷 481-483页

作者：徐辉罗欢欢朱金富 453003新乡新乡医学院心理学系河南省医用组织再生重点实验室

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法... 详细信息

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法对剥夺组进行连续24h的全睡眠剥夺，剥夺干预后随即对各组大鼠进行敞箱实验；免疫组织化学和逆转录聚合链式反应法测海马神经元BDNF表达水平。结果第6，12，18，24天四次行为测试得分显示，剥夺组大鼠的探索行为得分呈现先降低后升高趋势，第24天探索行为得分与抑郁组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化结果显示，与抑郁组[积分光密度：108．53±4．45，阳性面积比：0．0747±0．0262]相比，剥夺组[积分光密度：116．00±5．61，阳性面积比：0．2034±0．0352]大鼠海马神经元BDNF蛋白表达明显增高（尸〈0．05），而与正常组[积分光密度：117．27±10．66，阳性面积比：0．2252±0．1143]相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR结果和免疫组化结果相符。结论睡眠剥夺能改善抑郁模型大鼠的探索行为能力，其机制可能与提高海马组织BDNF的含量有关。

关键词：抑郁症海马脑源性神经营养因子探索行为

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6-羟多巴损伤黑质导致迷走神经背核乙酰胆碱转移酶和酪氨酸羟化酶表达变化

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第三军医大学学报 2012年第17期34卷 1754-1757页

作者：连辉蔡青青王志勇新乡医学院基础医学院人体解剖学教研室河南新乡453003 新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的观察6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损伤大鼠黑质后迷走神经背核(dorsal motor nucleus ofthe vagus,10N)中乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)和酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)含量的变化。方法 16只SD大鼠根据随机数字表分为6-OHDA大鼠组和对照组。6-OHDA大鼠组双侧黑质(substantia nigra,SN)内注射6-OHDA,对照组双侧SN内注射等体积的生理盐水。6周后断头取脑,Nissl染色观察SN和10N中的Nissl小体,免疫荧光和免疫印迹检测SN内TH和10N内ChAT与TH的表达。结果与对照组比较,6-OHDA大鼠组SN内TH阳性细胞数量从(54±5)个减少至(13±2)个(P<0.05),蛋白表达水平从0.62±0.13降低至0.34±0.11(P<0.05),10N中ChAT阳性细胞数量从(37±3)个减少到(26±5)个(P<0.05),TH阳性细胞数量从(6±3)个增加到(13±2)个(P<0.05),背侧延髓内ChAT的蛋白表达水平从0.07±0.02下降至0.05±0.02(P<0.05),TH蛋白表达水平从0.08±0.05增高到0.13±0.04(P<0.05)。结论 6-OHDA大鼠10N中ChAT和TH表达变化可能与帕金森病患者的胃排空障碍存在一定的联系。

关键词： 6-羟多巴迷走神经背核乙酰胆碱转移酶酪氨酸羟化酶

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CK19和PCNA在肝纤维化大鼠部分肝切除后再生肝中的表达

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中国临床解剖学杂志 2012年第5期30卷 552-555页

作者：方方刘前进岳学强李娜娜刘恒兴新乡医学院人体解剖学教研室新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 永城市人民医院商丘476600

目的检测肝纤维化大鼠部分肝切除后不同时点CK19及PCNA的表达,了解胆管再生情况。方法雄性SD大鼠,对照组和实验组各42只,实验组腹腔注射CCl4制备肝纤维化模型,两组均进行部分肝切除术,在不同时点取材后利用HE、免疫组化及免疫荧光双标... 详细信息

目的检测肝纤维化大鼠部分肝切除后不同时点CK19及PCNA的表达,了解胆管再生情况。方法雄性SD大鼠,对照组和实验组各42只,实验组腹腔注射CCl4制备肝纤维化模型,两组均进行部分肝切除术,在不同时点取材后利用HE、免疫组化及免疫荧光双标染色等方法检测CK19和PCNA的表达情况。结果实验组和对照组术后随时间延长CK19表达均呈增强趋势,且实验组术后各时间点CK19的表达均高于对照组同时间点。两组PCNA的表达量都随时间推移逐步升高,但实验组大鼠明显上升缓慢,持续时间延长,表达高峰晚于对照组出现。结论 (1)肝纤维化大鼠部分肝切除能刺激肝卵圆细胞增殖和向胆管细胞的分化,而正常大鼠部分肝切除后再生肝中的胆管上皮细胞主要来源于原有细胞的代偿性增生。(2)术前肝纤维化大鼠的肝脏细胞就出现了增殖修复,术后由于肝纤维化大鼠本身肝脏受到伤害,因此肝脏的有效再生细胞数低于正常肝脏。

关键词：大鼠肝纤维化胆管 CK19 PCNA

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高浓度甲状腺素对软骨细胞聚集体(pellets)体外形成软骨组织的作用

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中国美容医学 2012年第8期21卷 1324-1327页

作者：刘瑾春康宁肖苒刘霞曹谊林中国医学科学院整形外科医院研究中心北京100144 新乡医学院基础医学院河南省医用组织再生重点实验室

目的：药物浓度（100nM）甲状腺素对组织工程软骨形成的作用。方法：将软骨细胞聚集体分为常规培养组（DMED＋10％FBS）和100nM甲状腺素组（DMED＋10％FBS＋100nM甲状腺素），体外培养1、2和3周取材进行大体形态、组织学、二型胶原和十... 详细信息

目的：药物浓度（100nM）甲状腺素对组织工程软骨形成的作用。方法：将软骨细胞聚集体分为常规培养组（DMED＋10％FBS）和100nM甲状腺素组（DMED＋10％FBS＋100nM甲状腺素），体外培养1、2和3周取材进行大体形态、组织学、二型胶原和十型胶原免疫组化染色和软骨特异基因PCR分析。结果：100nM甲状腺素组形成的软骨细胞聚集体的体积和湿重均明显低于常规培养组，甲苯胺兰、二型胶原（C01II）染色较常规培养组弱，软骨细胞特异基因的表达水平与常规培养组相似，软骨细胞肥大相关基因十型胶原（ColX）及基质金属蛋白酶13（MMP13）的表达较对照组减弱，成骨方向分化相关基因（ColI，Runx2）的表达与常规培养组相似。结论：高浓度甲状腺素能够抑制软骨细胞肥大，但同时也抑制了软骨细胞增殖和软骨细胞基质分泌。

关键词：甲状腺素软骨组织工程软骨细胞细胞外基质细胞聚集体

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胰岛素铁硒传递蛋白促进组织工程软骨形成的作用

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新乡医学院学报 2012年第9期29卷 649-652页

作者：刘瑾春康宁肖苒刘霞曹谊林中国医学科学院整形外科医院研究中心北京100144 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的研究胰岛素铁硒传递蛋白(ITS)对组织工程软骨形成的影响。方法第2代猪关节软骨细胞单层培养或离心形成细胞聚集体,根据培养液不同分为2组:常规培养组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10%胎牛血清)和ITS组(达尔伯克改良伊格尔培养... 详细信息

目的研究胰岛素铁硒传递蛋白(ITS)对组织工程软骨形成的影响。方法第2代猪关节软骨细胞单层培养或离心形成细胞聚集体,根据培养液不同分为2组:常规培养组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10%胎牛血清)和ITS组(达尔伯克改良伊格尔培养基+体积分数10%胎牛血清+体积分数1%ITS),噻唑蓝(MTT)法评估2组软骨细胞增殖;细胞聚集体培养1、2、3、4周后取材,比较2组细胞聚集体大体形态、湿质量、组织学、Ⅱ型胶原(ColⅡ)免疫组织化学染色和软骨特异基因表达。结果 MTT检测显示第5、6、7天ITS组光密度值显著高于常规培养组(P<0.01);ITS组软骨细胞聚集体体积在培养3周和4周时明显大于常规培养组;ITS组湿质量培养4周时为(7.91±1.49)mg,明显高于常规培养组的(5.37±1.31)mg(P<0.05)。ITS组细胞聚集体甲苯胺蓝染色和ColⅡ免疫组织化学染色明显强于常规培养组;2组软骨特异基因SRY相关高迁移组盒子基因9、ColⅡ表达相当,ITS组Ⅹ型胶原表达减弱,核心蛋白和Ⅰ型胶原表达增强。结论 ITS通过促进软骨细胞增殖和细胞外基质分泌可更好地促进组织工程软骨形成。

关键词：胰岛素铁硒传递蛋白软骨组织工程软骨细胞细胞外基质

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