检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2019年第4期35卷 361-370页

作者：史磊郭艳兵申远新乡医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院药学院中药学教研室河南新乡453003

microRNA(miRNA)作为一类内源性的短链非编码RNA,广泛存在于真核细胞中,主要通过对转录本剪切和抑制翻译等方式,参与转录后基因的表达调控。近年来研究表明,多种药用植物中鉴定出大量的miRNA。这些miRNA对药用植物的生长发育和次生代谢... 详细信息

microRNA(miRNA)作为一类内源性的短链非编码RNA,广泛存在于真核细胞中,主要通过对转录本剪切和抑制翻译等方式,参与转录后基因的表达调控。近年来研究表明,多种药用植物中鉴定出大量的miRNA。这些miRNA对药用植物的生长发育和次生代谢产物合成具有调控功能。次生代谢产物是药用植物的主要有效成分,研究miRNA对药用植物次生代谢过程的调控作用具有十分重要的意义。本文综述了miRNA在植物中的产生途径、作用方式和体内功能,在此基础上重点介绍了miRNA对药用植物生长发育和次生代谢产物生物合成的调控作用,并对药用植物miRNA的研究进行了展望,以期为提高药用植物产量,高效获得药用植物有效成分以及临床应用开拓新的思路。

关键词：微RNA 药用植物调控作用生长发育次生代谢

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神经元蛋白质磷酸化修饰分析方法的初步研究

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四川大学学报（医学版） 2004年第5期35卷 715-718页

作者：何涛李洪李蓉晖段承刚甘淋李娟宋杰泸州医学院基础医学院分子生物学实验室泸州646000 泸州医学院基础医学院生物化学教研室四川大学基础医学与法医学院生物化学教研室

目的　建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法　培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L... 详细信息

目的　建立一种对神经细胞中的磷酸化蛋白质进行分离分析的方法。方法　培养新生乳小鼠神经细胞 ,加入 32 P- Na H2 PO4 2 .78× 10 6 Bq/ ml,37℃孵育 1.5 h。刺激组分别加入表皮生长因子 (EGF) 2 0 ng/ m l或胰岛素10 0 nm ol/ L,对照组加入等量的培养基 ,作用不同时间后液氮终止反应。裂解细胞 ,用 Bio- Rad DC Protein Assaykit测定细胞蛋白质含量 ,双向电泳分离细胞蛋白。放射自显影。结果　 1双向电泳自显影图谱显示近数十个蛋白质斑点 ,绝大部分集中于 p H偏酸性和中性区域 ,p H4 .6～ 6 .5 ,其相对分子质量主要介于 2 0× 10 3～ 130× 10 3之间。2 EGF、胰岛素刺激不同时间后虽出现有磷酸化蛋白质斑点的增加或消失 ,但更多表现为某些磷酸化蛋白质斑点灰度的增强或减弱。 3对比分析发现 ,放射自显影图谱中只有少数斑点出现在双向电泳 Coom assie Brilliant BlueR- 2 5 0染色图谱中 ,提示神经细胞中的大多数磷酸化蛋白质为低丰度蛋白。结论　采用本研究建立的双向电泳和放射自显影技术可对神经细胞中的蛋白质可逆磷酸化修饰状态进行较为全面、动态的分析 ,方法灵敏、特异性强。

关键词：磷酸化修饰双向电泳放射自显影蛋白质组

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单细胞显微注射技术在原生动物草履虫研究中的应用

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第12期36卷 1508-1513页

作者：史磊申香玉申远新乡医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院药学院中药学教研室河南新乡453003

对大多数单细胞原生动物的分子遗传学研究,目前还缺乏行之有效的转基因手段。针对这种情况,本研究以第四双小核草履虫为对象,将包含自身调控序列的草履虫纤毛内运输蛋白(intraflagellar transport,IFT)基因IFT43或IFT46插入表达载体Pzz0... 详细信息

对大多数单细胞原生动物的分子遗传学研究,目前还缺乏行之有效的转基因手段。针对这种情况,本研究以第四双小核草履虫为对象,将包含自身调控序列的草履虫纤毛内运输蛋白(intraflagellar transport,IFT)基因IFT43或IFT46插入表达载体Pzz02-GFP中,用单细胞显微注射术将重组质粒注入到第四双小核草履虫营养大核内。蛋白质免疫印记结果显示,与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标签偶联的IFT43或IFT46在草履虫细胞中表达,利用荧光显微镜或激光共聚焦成像系统观察,IFT43-GFP与IFT46-GFP融合蛋白显示出相似的纤毛定位,同时它们在草履虫多纤毛内的运输过程被动态记录。本研究表明,显微注射方法能够在草履虫细胞中实现外源基因转入和表达,在对单细胞模式生物的研究中具有广泛的应用前景。

关键词：显微注射技术草履虫单细胞模型外源基因表达

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人AFP全长基因编码序列的克隆及表达

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四川大学学报（医学版） 2004年第5期35卷 612-614,633页

作者：邓小玲蔡美英魏大鹏胡丽娟毕建虹袁暾四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室

目的　构建人 AFP全长基因编码序列的真核表达质粒 ,并在 CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法　从人胎肝组织中提取 AFP基因 ,以全长基因序列为目的基因片段 ,真核表达质粒 pc DNA3.1(+)为载体 ,构建AFP重组质粒 ph AFP,经酶切分析和 DNA测... 详细信息

目的　构建人 AFP全长基因编码序列的真核表达质粒 ,并在 CHO及小鼠肌肉组织中表达。方法　从人胎肝组织中提取 AFP基因 ,以全长基因序列为目的基因片段 ,真核表达质粒 pc DNA3.1(+)为载体 ,构建AFP重组质粒 ph AFP,经酶切分析和 DNA测序对 ph AFP进行鉴定。重组质粒 ph AFP经脂质体转染真核细胞CHO以及直接注射小鼠胫前肌 ,并采用免疫荧光染色及免疫组化对其表达产物进行检测。结果　获取的 AFP基因片段与 Gen Bank报道的序列一致 ,确认为人 AFP基因的全长编码序列 ,构建的重组质粒 ph AFP能在体外真核细胞 CHO、体内肌细胞中有效表达。结论　成功构建了能在真核细胞中表达的重组质粒 ph AFP,为 AFP

关键词：甲胎蛋白克隆真核表达

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流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究

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四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 409-412页

作者：李虹李华林李婉宜肖丽英蒋中华李明远汪晓东张林四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院物证学教研室

目的　观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究 Fas L 在此过程中的作用。方法　流感病毒以 2 0 m.o.i.感染 Hela、Raji、SMMC- 772 1和 SPC- A- 1等肿瘤细胞 ,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变 ,DNA琼脂糖凝... 详细信息

目的　观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究 Fas L 在此过程中的作用。方法　流感病毒以 2 0 m.o.i.感染 Hela、Raji、SMMC- 772 1和 SPC- A- 1等肿瘤细胞 ,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带 ,PI染色流式细胞仪检测细胞 DNA含量 ,Annexin- V FITC/ PI流式细胞仪进行凋亡定量分析 ,并用生物素 -亲和素 EL ISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中 s Fas L 浓度的变化。结果　经流感病毒诱导后 ,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变 ,细胞 DNA电泳出现梯状条带 ,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高 ,且显示一定的时间效应 ;在上述过程中 ,细胞培养上清中 s Fas L 浓度有明显增高。结论　流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡 ,其发生机制可能与 Fas L

关键词：流感病毒诱导肿瘤细胞细胞凋亡 PI染色流式细胞仪

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胃癌组织中ZAC与生长抑素及生长抑素受体表达的相关性

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解剖学报 2008年第5期39卷 703-707页

作者：张广政丁一刘键乐晓萍张钦宪郑州大学基础医学院法医学教研室郑州450001 郑州大学基础医学院组织学胚胎学教研室郑州450001

目的研究胃癌组织中ZAC与生长抑素及生长抑素受体表达的相关性，探讨其与胃癌临床病理学指征的关系。方法应用免疫组织化学及RT-PCR技术，检测30例胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织中ZAC、生长抑素及生长抑素受体的表达。结果胃癌、癌旁及正... 详细信息

目的研究胃癌组织中ZAC与生长抑素及生长抑素受体表达的相关性，探讨其与胃癌临床病理学指征的关系。方法应用免疫组织化学及RT-PCR技术，检测30例胃癌、癌旁和正常胃黏膜组织中ZAC、生长抑素及生长抑素受体的表达。结果胃癌、癌旁及正常胃黏膜组织中ZAC的阳性表达率分别为33.3%（10/30）、73.3%（22/30）和66.7%（20/30）；生长抑素的阳性表达率分别为36.7%（11/30）、53.3%（16/30）和73.3%（22/30）。胃癌组织中ZAC和生长抑素的表达阳性率均明显低于正常胃黏膜组织。胃癌、癌旁及相应正常胃黏膜组织中生长抑素受体5种亚型（SSTR1~SSTR5）mRNA均有表达。与正常胃黏膜组织比较，胃癌组织中SSTR3的阳性率显著降低，SSTR2和SSTR5显著增高。胃癌组织中ZAC与生长抑素的表达趋势一致；与SSTR3的表达趋势亦一致。ZAC与生长抑素的共表达与胃癌的分化程度及浸润深度明显相关，而与淋巴结转移无明显关系。ZAC与SSTR3的共表达与胃癌的分化程度明显相关。结论ZAC可能是生长抑素抑制胃癌发生的下游靶基因；生长抑素通过与其受体SSTR3结合，影响ZAC的表达，抑制肿瘤细胞的生长，促进其分化。

关键词： ZAC 生长抑素生长抑素受体胃癌免疫组织化学 RT-PCR

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卡介苗胞壁蛋白增强肺抗铜绿假单胞菌感染防御功能的研究

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四川大学学报（医学版） 2007年第3期38卷 404-407页

作者：刘小康周慧黄宁祝秉东冯云吴琦王伯瑶四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室

目的观察卡介苗胞壁蛋白组分能否提高大鼠肺组织对铜绿假单胞菌的清除率。方法密度梯度离心和分子筛方法分离卡介苗胞壁蛋白组分。用Northern杂交和RT-PCR检测卡介苗全菌体及其胞壁蛋白组分对肺上皮SPC-A-1细胞β防御素hBD-1 mRNA表达... 详细信息

目的观察卡介苗胞壁蛋白组分能否提高大鼠肺组织对铜绿假单胞菌的清除率。方法密度梯度离心和分子筛方法分离卡介苗胞壁蛋白组分。用Northern杂交和RT-PCR检测卡介苗全菌体及其胞壁蛋白组分对肺上皮SPC-A-1细胞β防御素hBD-1 mRNA表达的刺激作用;腹腔注射卡介苗胞壁蛋白组分48h后,经气管滴入铜绿假单胞菌或金黄色葡萄球菌,24h后处死大鼠,取肺组织进行菌落计数。结果卡介苗胞壁蛋白经分子筛层析后主要得到两大组分,Tricine-SDS-PAGE鉴定组分2相对分子质量约为18×103～30×103。Northern杂交显示热灭活卡介苗能提高肺上皮细胞β防御素hBD-1 mRNA表达,RT-PCR显示胞壁蛋白组分2刺激作用明显强于全菌体。经胞壁蛋白组分2治疗的大鼠肺组织铜绿假单胞菌数低于阴性对照组(P<0.01),而对金黄色葡萄球菌感染无明显抵抗作用。结论卡介苗胞壁蛋白组分可提高肺组织对铜绿假单胞菌的清除率,增强肺抗感染防御能力。

关键词：卡介苗胞壁蛋白防御素铜绿假单胞菌

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人抗菌肽FALL-39基因定点突变体的构建及其大肠杆菌表达产物的抗菌活性研究

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四川大学学报（医学版） 2003年第3期34卷 390-394页

作者：杨云霞冯云王伯瑶四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室

目的　构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法　采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆... 详细信息

目的　构建人抗菌肽 FAL L - 3 9定点突变子及研究其抗菌活性。方法　采用 PCR体外定点突变技术( PCR- SDM) ,设计两对引物 ,引入一个突变点 ,通过重叠延伸法两次 PCR扩增 ,使 FAL L - 3 9第 3 2位密码子由AAT突变为 AAG,将扩增片段克隆入 PGEXλ1T质粒中 ,转化大肠杆菌 JM10 9,并用 IPTG诱导 ,表达的 FAL L -3 9- lys3 2经纯化后与 FAL L - 3 9进行抗菌活性比较。结果　 DNA测序结果表明在预期位点发生突变 ,突变后的FAL L - 3 9- lys3 2蛋白对大肠杆菌 ML - 3 5 p的抗菌活性明显增强 ,其最低抑菌浓度 ( MIC)和最低杀菌浓度 ( MBC)分别由 FAL L - 3 9蛋白的 18.75和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 10 .94和 2 1.88μg/ m l,对绿脓杆菌ATCC2 785 3的 MIC和 MBC值分别为 FAL L - 3 9蛋白的 3 1.2 5和 3 7.5 0μg/ m l降低为 FAL L - 3 9- L ys- 3 2的 18.75和 3 1.2 5μg/ ml。两种蛋白均在含 Medium E的 L B培养基中表现出较高活性 ,在 L B培养基中抗菌活性最低 ,但在同一种培养基中 FAL L - 3 9- L ys- 3 2蛋白抗菌活性要高于 FAL L - 3 9蛋白。结论　用两步 PCR定点突变技术获得一个 FAL L - 3 9- L ys3 2突变子 ,其表达分子的抗菌活性明显增强 ,提示在 FAL L - 3 9分子中增加碱性?

关键词：人抗菌肽 FALL-39 基因定点突变大肠杆菌表达抗菌活性研究

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嗜尸性苍蝇mtDNA中COⅠ和COⅡ基因序列检测及法医学应用

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四川大学学报（医学版） 2005年第3期36卷 393-396页

作者：蔡继峰廖玍刘敏应斌武张林陶涛邓振华潘洪富邓建强廖志钢四川大学华西基础医学与法医学院法医病理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院生物医学工程研究室四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室

目的　利用线粒体DNA(m t DNA)上细胞色素氧化酶辅酶和 (CO 、CO )中2 78bp和6 35 bp基因序列对嗜尸性苍蝇及其幼虫、卵进行种属鉴定。方法　随机采集放置在呼和浩特地区室外草地兔尸体和甘肃敦煌戈壁滩猪尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、... 详细信息

目的　利用线粒体DNA(m t DNA)上细胞色素氧化酶辅酶和 (CO 、CO )中2 78bp和6 35 bp基因序列对嗜尸性苍蝇及其幼虫、卵进行种属鉴定。方法　随机采集放置在呼和浩特地区室外草地兔尸体和甘肃敦煌戈壁滩猪尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、苍蝇腹中的卵,提取苍蝇m t DNA进行PCR扩增;并进行扩增结果检测;PCR胶回收纯化、测序并进行序列分析和构建系统发育树。结果　上述嗜尸性苍蝇mt DNA上CO 和(或) CO 基因序列在双翅目嗜尸性苍蝇的种内基因差异均数小于1% ,种间差异均数大于3% ,成虫与幼虫、卵之间几乎没有明显差异,表明在嗜尸性苍蝇种内和种间序列差异均数百分比范围内无重叠,并由此根据CO 和(或) CO 序列差异判断两个个体是否同种。结论　mt DNA上CO 和(或) CO 序列分析均能有效地对嗜尸性苍蝇及其幼虫、卵进行种属鉴定,CO +CO 和CO 的检验效能要高于CO 。

关键词：嗜尸性苍蝇 mtDNA COⅠ CoⅡ 基因序列法医学线粒体DNA 细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ 细胞色素氧化酶辅酶Ⅱ

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无电流斑电击死兔的红细胞与血管内皮的扫描电镜观察

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四川大学学报（医学版） 2007年第5期38卷 859-861页

作者：王晔刘敏李凡彭雪梅张奎彭其毅廖志钢四川大学华西基础医学与法医学院法医病理学教研室

目的探讨无电流斑电击死动物的红细胞与血管内皮细胞的形态学变化。方法建立两种无明显电流斑电击死动物模型。模型A:用220 V或110 V交流电直接电击浸湿的右前肢与左后肢致死。模型B:用220 V或110 V交流电电击水中兔致死。取电击死兔血... 详细信息

目的探讨无电流斑电击死动物的红细胞与血管内皮细胞的形态学变化。方法建立两种无明显电流斑电击死动物模型。模型A:用220 V或110 V交流电直接电击浸湿的右前肢与左后肢致死。模型B:用220 V或110 V交流电电击水中兔致死。取电击死兔血液及肺动脉与主动脉,扫描电镜观察红细胞及内皮细胞形态学变化。结果两种电击死动物模型兔的红细胞与血管内皮细胞均可见穿孔,红细胞穿孔细胞指数最高,其次为肺动脉内皮细胞,主动脉穿孔细胞穿孔指数较肺动脉内皮与红细胞稍低,而对照组则未见穿孔现象。结论细胞穿孔可以作为无明显电流斑电击死的一个诊断指标。

关键词：电击死红细胞内皮细胞扫描电镜电击穿孔

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