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以问题为中心的教学法在神经生物教学中的应用

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新乡医学院学报 2010年第5期27卷 539-540页

作者：卢娜侯软玲李东亮新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

为了顺应新时期培养高素质应用型人才的理念,将以问题为中心(PBL)的教学法引入神经生物学教学改革。通过与传统教学模式比较,结果显示PBL教学法在培养学生思维方法、发挥学生学习的主动性、提高学生综合能力等方面均具有突出的优势。

关键词：以问题为中心的教学法神经生物学教育

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腺病毒载体影响大鼠催乳素细胞增殖功能的机制初探

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中国医科大学学报 2010年第10期39卷 785-789页

作者：王振华刘云会薛一雪中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001 中国医科大学附属盛京医院神经外科沈阳110004 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

目的探讨转染腺病毒载体对大鼠催乳素细胞增殖功能的影响及作用机制。方法应用BrdU标记法检测转染腺病毒载体后大鼠垂体催乳素细胞的增殖功能,免疫荧光方法和荧光素酶报告基因分别检测转染腺病毒载体的催乳素细胞中磷酸化cAMP反应元件... 详细信息

目的探讨转染腺病毒载体对大鼠催乳素细胞增殖功能的影响及作用机制。方法应用BrdU标记法检测转染腺病毒载体后大鼠垂体催乳素细胞的增殖功能,免疫荧光方法和荧光素酶报告基因分别检测转染腺病毒载体的催乳素细胞中磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)和cAMP反应元件(CRE)的表达。Westernblot方法检测腺病毒载体对垂体前叶细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。结果转染腺病毒载体的催乳素细胞组较未转染组增殖功能明显增强(P<0.01),pCREB蛋白和CRE元件的表达均明显增加(P<0.01),PCNA蛋白的表达亦明显增强(P<0.01)。结论应用腺病毒载体转移基因将增加大鼠催乳素细胞的增殖功能,其细胞内信号转导机制可能与腺病毒载体诱导pCREB、PCNA蛋白的表达增强有关。

关键词：腺病毒载体催乳素细胞磷酸化cAMP反应元件结合蛋白增殖细胞核抗原

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葛根黄酮对大鼠颈动脉粥样硬化斑块中MMP-2和TIMP-2干预治疗

葛根黄酮对大鼠颈动脉粥样硬化斑块中MMP-2和TIMP-2干预治疗

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：邵坤万光瑞新乡医学院生理学与神经生物学教研室

目的:研究富含葛根黄酮的心脉佳针对大鼠动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-2(matrix metallopro-teinase-2,MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP-2)的动态干预,以揭示其对动脉粥样硬化发生、... 详细信息

目的:研究富含葛根黄酮的心脉佳针对大鼠动脉粥样硬化斑块中基质金属蛋白酶-2(matrix metallopro-teinase-2,MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP-2)的动态干预,以揭示其对动脉粥样硬化发生、发展中的作用。方法:健康雄性SD大鼠50只,体质量150-170 g随机分为5组,即正常对照组、单纯高脂组和心脉佳高、中、低剂量干预组,分别在实验第2、6、10周检测血脂称量体重,并于10周末处死,应用免疫组化的方法,RT-PCR的方法,观察MMP-2/TIMP-2 mRNA在各组颈动脉中的变化。结果:(1)血清指标:心脉佳干预组血清中TG、CHO、LDL-C、HDL-C水平比高脂饮食组降低,并于第10周末各指标水平差异达到统计学意义(P<0.01)。(2)肉眼观:比较血管壁正常组大鼠的左颈总动脉颜色均匀光滑富有弹性;而钳夹高脂组的动脉颜色发白,粗细不均,管壁增厚,有明显的斑块;心脉佳中剂量和高剂量组血管内膜增厚不明显。(3)免疫组织化学染色:钳夹高脂组大量泡沫细胞中含有被染色的MMP-2颗粒,而药物干预组颗粒明显减少。(4)RT-PCR结果:MMP-2在动脉粥样硬化斑块中表达增强,而富含葛根黄酮的心脉佳对MMP-2表达有抑制作用(P<0.01)。结论:富含葛根黄酮的心脉佳可能通过抑制MMP-2的表达,增强动脉粥样硬化斑块中TIMP-2表达,发挥抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用。

关键词：动脉粥样硬化钳夹高脂大鼠葛根黄酮基质金属蛋白酶-2 金属蛋白酶组织抑制剂-2

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孕酮对氧糖剥夺PC12细胞的作用

孕酮对氧糖剥夺PC12细胞的作用

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中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会

作者：侯志慧吴春平李东亮新乡医学院生理学与神经生物学教研室

目的:探讨大鼠肾上腺嗜铬细胞（rat pheochromocytoma cell line,PC12）氧糖剥夺（oxygen-glucosedeprivation,OGD）后葡萄糖转运体（glucose transporter 3,GLUT3）基因和蛋白的表达情况以及孕酮（progesterone）对其影响。方法:培养PC12细胞,用含50ng/mL神经生长因子的DMEM培养基诱导5天,取生长状态及诱导分化良好的PC12细胞,随机分为三组:（1）正常对照组:PC12在37℃、5%CO培养箱中正常培养;（2）氧糖剥夺组:用缺氧液置换正常培养液,将培养板置于95%N和5%CO持续通气的密闭容器中（37℃）30min造成缺氧,用复氧液置换缺氧液,放入培养箱中培养24 h;（3）孕酮（PROG）组:处理方式同氧糖剥夺组,在缺氧液和复氧液加入终浓度为10nmol/L孕酮。观察氧糖剥夺24h后PC12细胞的活性,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting检测GLUT3 mRNA和GLUT3蛋白的表达情况。结果:OGD组PC12细胞活力OD值（0.600±0.050）明显低于正常对照组（0.986±0.060）(P<0.01),PROG组细胞活力（0.766±0.031）显著高于OGD组（P<0.01）。与正常对照组（0.602±0.024）相比,OGD组GLUT3 mRNA（0.852±0.07）的表达增加（P<0.01）;与OGD组相比,孕酮组GLUT3 mRNA（1.057±0.089）的表达明显增加（P<0.05）。与正常对照组（0.027±0.0006）相比,OGD组GLUT3蛋白（0.417±0.0006）表达增加（P<0.01）;PROG组GLUT3蛋白（0.056±0.001）表达量明显高于OGD组（P<0.01）。结论:孕酮可能通过上调GLUT3的表达以增加细胞内葡萄糖的转运,提高氧糖剥夺后神经元的能量利用,起到神经保护的作用。

关键词：孕酮 PC12细胞神经元氧糖剥夺 GLUT3

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脑缺血再灌注损伤大鼠全血内源性一氧化碳含量及海马组织中血红素加氧酶1活性的变化

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新乡医学院学报 2010年第5期27卷 441-443页

作者：包巍杨建华郭继强李炳新乡医学院组织学与胚胎学教研室河南新乡453003 新乡医学院机能学实验室河南新乡453003 新乡医学院免疫学教研室河南新乡453003 新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后内源性一氧化碳含量及海马血红素加氧酶1(HO-1)的变化。方法 80只雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组。模型组通过栓塞大鼠大脑中动脉并于1h后再灌注制备局灶性缺血再灌注损伤模型,假手术组仅施行颈部... 详细信息

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后内源性一氧化碳含量及海马血红素加氧酶1(HO-1)的变化。方法 80只雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组。模型组通过栓塞大鼠大脑中动脉并于1h后再灌注制备局灶性缺血再灌注损伤模型,假手术组仅施行颈部切开及游离右颈总动脉,不结扎,亦不予栓塞。以生物化学法检测2组大鼠全血碳氧血红蛋白(COHb)的含量以及海马组织中HO-1的活性。结果脑缺血再灌注损伤后,模型组全血COHb含量和海马组织中HO-1的活性在各时间点均高于假手术组(P<0.05),并均在再灌注24h达到高峰。结论大鼠脑缺血再灌注损伤后可引起全血COHb含量的升高和海马中HO-1的活性升高。

关键词：脑缺血再灌注损伤碳氧血红蛋白血红素加氧酶1

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玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞活化及增殖的影响

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新乡医学院学报 2010年第3期27卷 244-247页

作者：王璐邱培勇王亚莉陈正跃新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院药物研究室河南新乡453003

目的研究玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞增殖及活化的影响。方法分别制备玉屏风散水煎液、玉屏风散蒸馏水超声提取液、玉屏风散无水乙醇超声提取液和玉屏风散乙酸乙酯超声提取液。分离健康昆明种小鼠原代腹腔巨噬细胞进行体外培养,... 详细信息

目的研究玉屏风散提取液对小鼠腹腔巨噬细胞增殖及活化的影响。方法分别制备玉屏风散水煎液、玉屏风散蒸馏水超声提取液、玉屏风散无水乙醇超声提取液和玉屏风散乙酸乙酯超声提取液。分离健康昆明种小鼠原代腹腔巨噬细胞进行体外培养,培养基中分别加入不同剂量上述药液使终末浓度达到1.67、3.33、8.33、16.67 g·L^(-1)(折合生药)进行细胞培养,以0 g·L^(-1)作为空白对照组。培养24、72 h后,分别加入中性红、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8),用酶标法检测4种玉屏风散提取液对腹腔巨噬细胞活化及增殖的影响。结果与空白对照组相比,4种不同浓度的玉屏风散提取液均可促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力及增殖(P<0.01)。与同剂量玉屏风散水煎液相比,除玉屏风散无水乙醇超声提取液(3.33 g·L^(-1))、玉屏风散乙酸乙酯超声提取液(3.33 g·L^(-1))可促进巨噬细胞吞噬中性红能力(P<0.05,P<0.01),玉屏风散乙酸乙酯超声提取液(16.67 g·L^(-1))可促进腹腔巨噬细胞增殖(P<0.01),其余剂量的玉屏风散超声提取液的效果都不如同剂量组的玉屏风散水煎液。结论玉屏风散提取液可促进小鼠腹腔巨噬细胞活化吞噬能力及增殖,但玉屏风散的超声提取条件需进一步探索。

关键词：玉屏风散腹腔巨噬细胞增殖吞噬

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牛磺酸对弥漫性脑损伤大鼠脑皮层基质金属蛋白酶3表达的影响

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新乡医学院学报 2010年第2期27卷 123-126页

作者：李雪姣李新强李新娟尚飞郭帅李中星李东亮新乡医学院基础医学院 2007级河南新乡453003 新乡医学院病理学教研室河南新乡453003 新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术系 2006级河南新乡453003

目的探讨牛磺酸对弥漫性脑损伤大鼠脑皮层基质金属蛋白酶3(MMP-3)表达的影响。方法雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、脑损伤组和牛磺酸组,实验第1天至第7天,牛磺酸组用50 g.L-1牛磺酸生理盐水溶液按200 ***-1灌胃,每日1次;假手术组和... 详细信息

目的探讨牛磺酸对弥漫性脑损伤大鼠脑皮层基质金属蛋白酶3(MMP-3)表达的影响。方法雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、脑损伤组和牛磺酸组,实验第1天至第7天,牛磺酸组用50 g.L-1牛磺酸生理盐水溶液按200 ***-1灌胃,每日1次;假手术组和脑损伤组用4 ***-1生理盐水灌胃,每日1次。实验第8天建立大鼠弥漫性颅脑损伤模型,24 h后处死大鼠,免疫组织化学检测脑皮层中MMP-3的表达情况。结果脑损伤组大脑皮层MMP-3阳性表达平均光密度值高于假手术组(P<0.01),牛磺酸组大脑皮层MMP-3阳性表达平均光密度值低于脑损伤组(P<0.05)。结论牛磺酸可通过下调弥漫性脑损伤大鼠脑皮层MMP-3的表达发挥对弥漫性脑损伤的保护作用。

关键词：牛磺酸脑损伤基质金属蛋白酶3

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稳定表达EGFRvIII的U87MG细胞株的建立与鉴定

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数理医药学杂志 2010年第5期23卷 516-518页

作者：陈明孙红宇文荣朝余政梁吴巧琪夏许可张兴梅高天明南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515 南方医科大学基础医学院生理学教研室

目的:构建稳定表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的U87MG细胞株。方法:采用电转染方法将pcD-NA4/TO-EGFRvⅢ质粒导入U87MG细胞,加入zeocin筛选,进一步将细胞有限稀释并克隆化培养以建立稳定的转染细胞株。应用RT-PCR、Western b... 详细信息

目的:构建稳定表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)的U87MG细胞株。方法:采用电转染方法将pcD-NA4/TO-EGFRvⅢ质粒导入U87MG细胞,加入zeocin筛选,进一步将细胞有限稀释并克隆化培养以建立稳定的转染细胞株。应用RT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光染色方法鉴定稳定表达EGFRvⅢ基因的细胞株。结果:经RT-PCR鉴定发现V6号和V24号单克隆细胞株EGFRvⅢ基因mRNA水平高表达,进一步Western blot及细胞免疫荧光染色方法鉴定发现V6号细胞株EGFRvⅢ蛋白水平高表达。结论:成功建立了稳定表达EGFRvⅢ的U87MG细胞株,为进一步的抗肿瘤治疗及其机制研究提供基础。

关键词： EGFRvⅢ U87MG细胞基因表达

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银杏叶提取物对糖尿病大鼠学习记忆障碍的影响

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新乡医学院学报 2010年第3期27卷 250-252页

作者：侯软玲董献红李新强刘林林军新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院病理学教研室河南新乡453003 广西医科大学药学院广西南宁530021

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠学习记忆障碍的影响。方法利用STZ(48 mg·kg^(-1))制备大鼠糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、胰岛素组(胰岛素10 U·kg^(-1)皮下注射)、EGb高剂量组(EGb 10... 详细信息

目的探讨银杏叶提取物(EGb)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠学习记忆障碍的影响。方法利用STZ(48 mg·kg^(-1))制备大鼠糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、胰岛素组(胰岛素10 U·kg^(-1)皮下注射)、EGb高剂量组(EGb 100 mg·kg^(-1)灌胃给药)和低剂量组(EGb 50 mg·kg^(-1)灌胃给药),另取大鼠腹腔注射pH 4.4柠檬酸缓冲液作为对照组,每组15只。给药3个月后,Morris水迷宫观察各组大鼠行为学差别。结果 Morris水迷宫结果表明,与对照组相比,糖尿病大鼠在训练后前6日平均值及第7天第1次穿越目标区域的时间延长、穿越目标区域的次数明显减少、在第1象限的时间和路程也明显缩短(P<0.01);与模型组大鼠相比,胰岛素组和EGb高、低剂量组大鼠第1次穿越目标区域的时间明显缩短、穿越目标区域的次数明显增多、在第1象限的时间和路程明显延长(P<0.01);EGb高、低剂量组大鼠在第7天第1次穿越目标区域的时间明显长于胰岛素组(P<0.05);其余指标间比较无统计学差别(P>0.05)。结论银杏叶提取物对糖尿病大鼠学习记忆障碍有明显改善作用。

关键词：银杏叶提取物糖尿病行为学学习和记忆 Morris水迷宫

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人对氧磷酶1基因重组腺相关病毒载体的构建及表达

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广州医学院学报 2010年第5期38卷 57-62页

作者：王峰田晶薛金凤赵霏宋柳江谭孟群中南大学湘雅医学院生理学系血液生理研究室湖南长沙410078 新乡医学院生理学与神经生物学教研室河南新乡453003 深圳湘雅生物医药研究院广东深圳518057

目的：构建带有人对氧磷酶1（hPONI）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体，并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）后hPON1的表达。方法：提取流产胎儿肝脏的总RNA，RT-PCR获得cDNA，设计引物通过PCR获得PON!基因片段，将其与pGEM—TEas... 详细信息

目的：构建带有人对氧磷酶1（hPONI）基因的重组腺相关病毒（rAAV）载体，并检测其转染大鼠骨髓内皮祖细胞（EPCs）后hPON1的表达。方法：提取流产胎儿肝脏的总RNA，RT-PCR获得cDNA，设计引物通过PCR获得PON!基因片段，将其与pGEM—TEasy载体连接，将PON1基因片段切下，插入到质粒pAAV—IRES—GFP的多克隆位点，获得质粒pAAV—PON1-IRES—GFP，经酶切和测序鉴定。包装的病毒rAAV—PON1用斑点杂交检测滴度，并用其转染EPCs检测hPON1在mRNA水平的表达。结果：pAAV—PON1-IRES-GFP酶切和测序结果完全正确。斑点杂交检测病毒的滴度为1．7×10^10g／mL，RT—PCR结果显示病毒转染EPCs后存在hPON1的表达。结论：成功构建了pAAV—PON1-IRES—GFP质粒，包装出较高滴度的rAAV—PON1，并且转染EPCs后可以检测到hPON1表达。

关键词：腺相关病毒动脉粥样硬化对氧磷酶1 内皮祖细胞

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