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中国病理生理杂志 2002年第11期18卷 1317-1323页

作者：黄幼田董子明赵明耀杨洪艳张义国郑智敏马俊芬汤黎明陈宁郑州大学基础医学院病理生理学教研室河南郑州450052

目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制... 详细信息

目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制备DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗 ;同时制备CT2 6(hCEA+ ) ;采用RT -PCR检测DCs(pCDNA3 -hCEA)中CEAmRNA的表达 ,采用放射免疫法检测DCs(pCDNA3 -hCEA)培养上清中CEA的含量 ;使用DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗体外诱导小鼠同种异体T淋巴细胞靶向性杀伤。采用DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗预防免疫BALB/c小鼠 ,观察其对于荷临界致瘤量CT2 6(hCEA+ )小鼠的抗肿瘤效应。结果 :经G41 8筛选 ,DCs(pCDNA3 -hCEA)有 1 4 %的获得率 ;RT -PCR检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)内CEAmRNA呈阳性表达 ;放射免疫法检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)能微量表达人CEA ;DCs(pCDNA3 -hCEA)能够有效诱导CEA靶向免疫杀伤。DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗延长荷CT2 6(hCEA+ )瘤小鼠生存期 1周至 4周。结论 :编码肿瘤抗原基因的真核表达质粒转染的树突状细胞。

关键词：小鼠骨髓树突状细胞 pcDNA3-hCEA 癌胚抗原肿瘤免疫效应真核表达质粒

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肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 139-143页

作者：陈小兵赵明耀杨洪艳黄幼田郑智敏马俊芬汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室

目的 :观察肺腺癌A5 4 9细胞培养上清液 (TSN)对人单核细胞衍生树突状细胞 (MoDC)的表型、增殖和抗肿瘤A5 4 9免疫应答的影响。方法 :制备人肺腺癌A5 4 9细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原 ;人MoDC培养按照不同培养条件组合分为 7组 ,分别... 详细信息

目的 :观察肺腺癌A5 4 9细胞培养上清液 (TSN)对人单核细胞衍生树突状细胞 (MoDC)的表型、增殖和抗肿瘤A5 4 9免疫应答的影响。方法 :制备人肺腺癌A5 4 9细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原 ;人MoDC培养按照不同培养条件组合分为 7组 ,分别于培养全程或晚期 (第 7d)加入TSN或第 4d加入冻融抗原冲击致敏 ,制备MoDC瘤苗 ,第 9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应 (MLR)、MoDC诱导的细胞毒性T细胞 (CTL)抑瘤活性、培养上清液中IL 12含量。结果 :培养全程加TSN的MoDC ,相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原 (HLA DR)明显下调 ,凋亡率明显升高 ,同时 ,激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL 12的量均显著低于正常培养组 ;培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC ,均无上述影响 ;脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗 ,表型明显上调、各项免疫指标明显升高 ,诱导出了高效的抗A5 4 9免疫应答。结论 :TSN能干扰MoDC成熟过程 ,下调其表型表达 ,诱导其凋亡发生 ,抑制其介导的抗肿瘤免疫应答 ;而脱离TSN影响。

关键词：树突状细胞单核细胞肺腺癌A549细胞细胞凋亡白细胞介素-12 培养上清液

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不同还原性巯基氨基酸对人脐静脉内皮细胞的损伤作用研究

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华西医科大学学报 2002年第3期33卷 372-374页

作者：杨志梅王玉芳张霁顾玲王树人四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室成都610041 四川大学华西基础医学与法医医学院物证教研室

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)... 详细信息

目的　探讨三种还原性巯基氨基酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应。方法　将人脐静脉内皮细胞暴露于三种还原性巯基氨基酸 2 4小时后 ,测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果　 1同型半胱氨酸 (Hcy)不仅促进脂质过氧化 ,而且可诱导细胞凋亡并可致细胞坏死。 2谷胱甘肽(GSH)呈还原性 ,对细胞有全面的保护作用。 3Hcy的氧化性最强 ,GSH则呈现出完全的还原性 ,半胱氨酸 (Cys)可能处于二者之间。结论　同型半胱氨酸可能是通过特异的抑制谷光甘肽过氧化物酶并减弱了细胞内的还原缓冲能力等机制 ,发挥与 Cys和 GSH不同的生物学效应 ,从而导致内皮细胞出现坏死和凋亡等损伤性的改变。

关键词：同型半胱氨酸半胱氨酸谷胱甘肽内皮细胞脐静脉

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小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 136-138页

作者：赵明耀黄幼田杨洪艳郑智敏陈宁汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :观察巨噬细胞 (Mφ)与树突状细胞 (dendriticcell,DC)对H2 2肝细胞瘤、CT2 6结肠腺癌小鼠协同抗肿瘤免疫作用。方法 :腹腔荷H2 2 (1× 10 6)昆明鼠随机均分成 :①H2 2组、②H2 2 +Mφ组、③H2 2 +DC组、④H2 2 +Mφ +DC组 ,... 详细信息

目的 :观察巨噬细胞 (Mφ)与树突状细胞 (dendriticcell,DC)对H2 2肝细胞瘤、CT2 6结肠腺癌小鼠协同抗肿瘤免疫作用。方法 :腹腔荷H2 2 (1× 10 6)昆明鼠随机均分成 :①H2 2组、②H2 2 +Mφ组、③H2 2 +DC组、④H2 2 +Mφ +DC组 ,按组别腹腔分别注入Mφ和 (或 )H2 2脉冲致敏DC ;腹腔荷CT2 6 (1× 10 4)BALB/C小鼠以双向有序二因素检测 (9格方格表 )设计 ,治疗鼠同时注射相应数量的Mφ和CT2 6脉冲致敏DC ,每鼠的Mφ和DC呈不同组合。 1周后均强化 1次 ,所注入数量同第 1次。结果 :H2 2组小鼠 38d内均死亡 ,死亡的中位时间为 2 9d ;而H2 2 +Mφ组和H2 2 +DC组均死亡 3只 ,死亡的中位时间分别为 37d ,36d ;H2 2 +Mφ +DC组在实验观察 6 0d内 ,未出现腹水 ,无一死亡 ;荷瘤一段时间后 ,前 3组小鼠静脉血粒细胞 /淋巴细胞比值进行性增大 ,免疫细胞数量减少。荷CT2 6小鼠生存时间行免疫治疗比未免疫治疗延长 ,单用DC或Mφ呈疗效剂量依赖性 ,高剂量Mφ和DC合用与DC或Mφ单用疗效差异无显著性。结论 :DC、Mφ细胞均能提高机体抗瘤能力和生存期 ,有明确的量效关系 ;DC抗原递呈功能明显大于Mφ ;DC。

关键词：树突状细胞巨噬细胞 H22肝细胞癌 CT26结肠腺癌肿瘤免疫小鼠

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小鼠内源性抗原提呈树突状细胞疫苗的抗瘤作用

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 133-136页

作者：黄幼田赵明耀杨洪艳郑智敏马俊芬汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :将pcDNA3 hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC) ,观察内源性抗原提呈DC疫苗诱导BALB/C小鼠对CT2 6 hCEA+ 的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用细胞因子rmGM CSF和rmIL 4诱导培养法制备小鼠... 详细信息

目的 :将pcDNA3 hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞 (dendriticcell,DC) ,观察内源性抗原提呈DC疫苗诱导BALB/C小鼠对CT2 6 hCEA+ 的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用细胞因子rmGM CSF和rmIL 4诱导培养法制备小鼠骨髓DC ,利用Lipofectamine将pcDNA3 hCEA和肿瘤来源的RNA分别转染DC ,制备能够内源性表达CEA的DC疫苗。使用DC疫苗预防免疫BALB/C小鼠 ,观察其对于荷CT2 6 hCEA+ 小鼠的抗肿瘤效应。结果 :内源性抗原提呈DC疫苗明显延长荷CT2 6 hCEA+ 瘤小鼠生存期 ;与其他方法制备的DC疫苗相比 ,有较强的针对性抗肿瘤免疫效应和较长的持续效应。结论 :对于免疫逃逸的肿瘤。

关键词：小鼠内源性抗原树突状细胞疫苗抗瘤作用免疫逃逸

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小鼠一体多瘤模型复制与S180脉冲致敏树突状细胞抗瘤特异性观察

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 147-150页

作者：赵明耀杨洪艳黄幼田郑智敏陈宁汤黎明董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :复制一种新的荷瘤动物模型 ,同一小鼠皮下 ,不同部位荷 3种不同类型肿瘤 (S180、H2 2、EAC瘤株 ) ,继之以一种肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激的树突状细胞 (DC)免疫治疗 ,观察其效应。方法 :昆明小鼠随机分为 5组 ,6只 /组 ,1... 详细信息

目的 :复制一种新的荷瘤动物模型 ,同一小鼠皮下 ,不同部位荷 3种不同类型肿瘤 (S180、H2 2、EAC瘤株 ) ,继之以一种肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激的树突状细胞 (DC)免疫治疗 ,观察其效应。方法 :昆明小鼠随机分为 5组 ,6只 /组 ,1、2、3组分别荷单一瘤株S180、H2 2和EAC瘤细胞 ;4、5组荷以上 3种瘤株 ;所接种的 3种瘤细胞数均为 6× 10 6,接种部位二侧后腿腋下和背部 ,分别交替接种 3种瘤细胞株 ,其中每 2只接种部位相同 ,第 5组另接受肿瘤抗原 (冻融S180细胞 )脉冲刺激DC行免疫治疗。观察接种后瘤体大小和特异的淋巴细胞毒杀伤活性(CTL)。结果 :1～ 4组组间相比 ,单一荷瘤与复合荷瘤的相同瘤株在肿瘤生长速度上基本相同 (P >0 .0 5 ) ,4组荷瘤鼠生存期相近 (P >0 .0 5 )。与 1～ 4组荷同一瘤株鼠比较 ,脉冲DC免疫治疗鼠 (第 5组 ) ,S180、H2 2和EAC瘤株的增生速度明显减缓 ,荷瘤第 3周时 ,S180、H2 2增生减缓更为明显 (P <0 .0 1) ;EAC瘤株亦呈同样变化趋势 ,但幅度较小。CTL结果显示 ,T淋巴细胞对S180和H2 2瘤细胞株均有很强杀伤活性 (78% ,72 % ) ,而对EAC瘤株杀伤活性较弱 (34% )。结论 :同一小鼠体内同时荷 3种移植瘤株即一体多瘤动物模型可行 ;

关键词：树突状细胞 S180骨肉瘤 H22肝细胞癌 Ehrlich腹水癌肿瘤免疫治疗小鼠

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树突状细胞对去脾小鼠荷S180瘤的治疗效果

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 150-152页

作者：赵明耀杨洪艳黄幼田郑智敏董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :观察在无脾状态下小鼠荷S180骨肉瘤时 ,对脉冲树突状细胞 (dendriticcell,DC)的治疗反应 ,初步探讨脾脏与DC在抗肿瘤免疫中的关系。方法 :33只昆明小鼠 ,分为手术对照组、去脾组、去脾 +DC治疗组 3个大组 ,每大组内 5只皮下荷瘤 ,... 详细信息

目的 :观察在无脾状态下小鼠荷S180骨肉瘤时 ,对脉冲树突状细胞 (dendriticcell,DC)的治疗反应 ,初步探讨脾脏与DC在抗肿瘤免疫中的关系。方法 :33只昆明小鼠 ,分为手术对照组、去脾组、去脾 +DC治疗组 3个大组 ,每大组内 5只皮下荷瘤 ,6只腹腔荷瘤。实验开始 8周后 ,每只皮下荷瘤鼠均于右后腿腋下注射S180 2× 10 6,腹腔荷瘤鼠每只腹腔注射S180 1× 10 6。用冻融S180细胞冲击致敏DC后 ,腹腔注射脉冲致敏的DC每只 4× 10 4,1周后重复 1次。检测皮下瘤体大小和称重。结果 :DC对去脾腹腔荷S180小鼠的免疫治疗效果显示 ,3组间肿瘤腹水增长速度和死亡时间接近 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;DC对去脾皮下荷S180小鼠的免疫治疗效果显示 ,去脾组肿瘤发生率与手术对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但多数鼠 (4/ 5 )死亡时间短于对照组 ;去脾 +DC治疗组鼠荷瘤生存期明显延长 ,80 % (4/ 5 )荷瘤生存时间超过 6 0d ,而手术对照组和去脾组鼠分别为 4 0 % (2 / 5 )和 2 0 % (1/ 5 )。结论 :去脾小鼠荷瘤生存时间缩短 ;DC对去脾后一定时间内的皮下荷S180小鼠可介导抗肿瘤免疫反应。

关键词：树突状细胞脾脏 S180骨肉瘤免疫治疗动物实验

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同池分隔培养NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞的影响

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 144-147页

作者：赵明耀杨洪艳郑智敏黄幼田陈小兵马俊芬董子明郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :观察同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞 (DC)的影响。方法 :用不同孔径微小池分隔法 ,同池培养骨髓瘤NS1与骨髓DC。分别设为①无微小池DC孔 ,② 3μm微小池DC孔 ,③ 3μm微小池DC +NS1孔 ,④ 8μm微小池DC孔 ,⑤ 8μm微... 详细信息

目的 :观察同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞对树突状细胞 (DC)的影响。方法 :用不同孔径微小池分隔法 ,同池培养骨髓瘤NS1与骨髓DC。分别设为①无微小池DC孔 ,② 3μm微小池DC孔 ,③ 3μm微小池DC +NS1孔 ,④ 8μm微小池DC孔 ,⑤ 8μm微小池DC +NS1孔各 3孔。每个培养孔底均有生长 3周的DC ,铺满孔底 ,每孔5× 10 5,仅③、⑤孔微小池内加入NS11× 10 4,每 2d换 1次培养液 ,同池共育 4 0d ,观测DC数目和形态改变 ;共育 7d时 ,做体外细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性检测。结果 :与NS1骨髓瘤细胞同一孔池中培养的DC的数目减少 ,形态改变 ,抗原递呈功能下降。结论 :同一孔池中培养 ,NS1骨髓瘤细胞抑制DC的增殖和功能。

关键词：树突状细胞 NS1骨髓瘤细胞肿瘤免疫同池分隔培养细胞增殖

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新生大鼠脑缺氧缺血对脑组织谷氨酸及环核苷酸的影响

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实用儿科临床杂志 2002年第1期17卷 12-13页

作者：崔景斌陈正跃王俊萍赵卫星白浩郑州大学医学院生物化学教研室 450052 新乡医学院病理生理学教研室

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)时谷氨酸 (Glu)和环核苷酸 (cAMP和cGMP)的代谢改变及意义。方法　选 7日龄Wistar新生大鼠 ,随机分为对照组和缺氧缺血组。采取结扎左侧颈总动脉并吸入低氧的混合气体制作HIBD动物模型。用氨... 详细信息

目的　研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)时谷氨酸 (Glu)和环核苷酸 (cAMP和cGMP)的代谢改变及意义。方法　选 7日龄Wistar新生大鼠 ,随机分为对照组和缺氧缺血组。采取结扎左侧颈总动脉并吸入低氧的混合气体制作HIBD动物模型。用氨基酸自动分析仪与放免法测定不同时间脑组织Glu、cAMP和cGMP含量。结果　脑缺氧缺血后即刻Glu(17.5 6± 5 .32mol/g　P <0 .0 1)和cAMP(15 .0 1± 3.80nmol/g　P<0 .0 5 )较对照组显著升高 ,随后逐渐下降 ,于 6 0～ 180min降至正常 ,cGMP则显著升高 (0 .88± 0 .19nmol/ g　P <0 .0 5 )。结论　新生大鼠HIBD时脑组织Glu、cAMP、cGMP含量发生变化。

关键词：缺氧缺血性脑损伤谷氨酸环核苷酸兴奋毒性新生儿窒息动物实验

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大鼠脑缺血再灌注损伤后兴奋性氨基酸、NOS和NO的含量变化

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郑州大学学报（医学版） 2002年第2期37卷 169-171页

作者：崔景斌王俊萍鄢文海赵卫星白浩郑州大学基础医学院生物化学教研室郑州450052 郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450052

目的 :通过测定大鼠脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸 (EAA)、一氧化氮合酶 (NOS)和一氧化氮 (NO)含量的变化 ,探讨脑缺血再灌注损伤的发生机制。方法 :将动物分为假手术组和缺血 30min后再灌注组 ,通过高效液相色谱或分光光度法测定再灌注... 详细信息

目的 :通过测定大鼠脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸 (EAA)、一氧化氮合酶 (NOS)和一氧化氮 (NO)含量的变化 ,探讨脑缺血再灌注损伤的发生机制。方法 :将动物分为假手术组和缺血 30min后再灌注组 ,通过高效液相色谱或分光光度法测定再灌注后不同时间 (1h、6h、2 4h、4 8h和 72h)脑组织EAA、NOS和NO的含量。结果 :再灌注后 1hEAA水平较假手术组显著增高 ,以谷氨酸最为明显 ,随后逐渐下降 ,2 4h达正常水平。NOS和NO于再灌注后1h即升高 (P <0 .0 5 ) ,2 4h达最高水平 (P <0 .0 1) ,72h降至正常。结论 :脑缺血再灌注后EAA、NOS和NO含量发生变化。

关键词：再灌注损伤兴奋性氨基酸一氧化氮合酶一氧化氮大鼠脑缺血

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