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Ferrostatin-1通过抑制铁死亡延缓D-gal诱导的心肌细胞衰老的研究

天津医药 2023年第1期51卷 19-23页

作者：熊喜成王一平王刚张甜包雅丽迪娜·艾尼瓦尔孙湛新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室 830000 新疆地方病分子生物学重点实验室

目的探讨D-半乳糖(D-gal)诱导的心肌细胞衰老是否存在铁死亡及铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)能否延缓心肌细胞衰老。方法通过不同水平(0、5、10、20、40、80、100 g/L)D-gal诱导H9C2心肌细胞损伤从而制备心脏衰老模型,采用MTT法... 详细信息

目的探讨D-半乳糖(D-gal)诱导的心肌细胞衰老是否存在铁死亡及铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)能否延缓心肌细胞衰老。方法通过不同水平(0、5、10、20、40、80、100 g/L)D-gal诱导H9C2心肌细胞损伤从而制备心脏衰老模型,采用MTT法检测细胞活力,确定后续实验采用的D-gal质量浓度。将细胞分为Control组、D-gal组和Fer-1组。MTT法检测细胞活力;DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)水平;微板法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量;硫代巴比妥酸法检测细胞内丙二醛(MDA)含量;Western blot检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx4)、P53蛋白表达水平;微量法检测细胞内β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性。结果 MTT法结果显示,细胞活力随D-gal质量浓度升高而降低(P<0.05),后续实验采用D-gal质量浓度为20 g/L。与D-gal组相比,Fer-1组细胞活力增加(P<0.05);与Control组相比,D-gal组中ROS、MDA含量、P53蛋白表达水平、β-GAL活性增强,GSH含量、SLC7A11、GPx4蛋白表达水平降低(P<0.05);与D-gal组相比,Fer-1组中ROS、MDA含量、P53蛋白表达水平、β-GAL活性降低,GSH、SLC7A11、GPx4蛋白表达升高(P<0.05)。结论 D-gal诱导的心肌细胞衰老过程中发生了铁死亡,Ferrostatin-1可抑制铁死亡,从而延缓心肌细胞衰老。

关键词：肌细胞,心脏细胞衰老半乳糖铁死亡 D-gal Ferrostatin-1

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基于H3K27me3修饰探讨砷对肝癌细胞凋亡的影响及作用机制

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中国老年学杂志 2024年第16期44卷 3982-3986页

作者：何航谢汝佳梁猜王君丽张应万张家媛杨勤韩冰贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室、贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室贵州贵阳550000

目的探讨砷剂是否通过调控组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)的表达,进而影响肝癌HepG2细胞凋亡的发生。方法体外培养人HepG2细胞,分为对照组、亚砷酸钠(NaAsO_(2))组。采用细胞计数法(CCK-8)检测不同NaAsO_(2)浓度、作用时间对He... 详细信息

目的探讨砷剂是否通过调控组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3)的表达,进而影响肝癌HepG2细胞凋亡的发生。方法体外培养人HepG2细胞,分为对照组、亚砷酸钠(NaAsO_(2))组。采用细胞计数法(CCK-8)检测不同NaAsO_(2)浓度、作用时间对HepG2细胞活力的影响,确定培养环境中NaAsO_(2)的最适作用浓度和时间;流式细胞术检测各组HepG2细胞凋亡变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组HepG2细胞中组蛋白甲基转移酶(HMT)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的水平表达变化;Western印迹检测各组细胞中H3K27me3、Jumonji结构域JMJD3(H3K27me3特异性去甲基化酶)、Zeste基因增强子同源物(EZH)2(H3K27me3甲基转移酶)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞凋亡相关基因天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)3蛋白表达变化。结果与对照组比较,NaAsO_(2)组细胞随NaAsO_(2)浓度的增加,细胞增殖率逐渐下降,根据培养细胞基本增殖要求和实验惯例,选定培养基质中40μmol/L浓度的NaAsO_(2)作用24 h,为NaAsO_(2)抑制HepG2细胞生长的最适条件;与对照组相比,NaAsO_(2)组HepG2细胞的凋亡率显著升高,EZH2、Bax、Caspase3蛋白表达及H3K27me3修饰水平、HMT、SAM表达明显增加,而JMJD3、Bcl-2蛋白表达明显下降(均P<0.05)。结论砷通过调控H3K27me3表达,进而加速肝癌细胞凋亡的发生,砷具有潜在的肿瘤药物治疗价值。

关键词：肝癌砷组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化(H3K27me3) 细胞凋亡

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SDF-1在小鼠毛囊周期中的表达及调控作用研究

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南通大学学报（医学版） 2022年第4期42卷 302-306,F0003页

作者：曹贵媛严君萍顾未凡祝宁侠桂林医学院基础医学院病理生理学教研室桂林541199

目的:探讨间质细胞趋化因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)在小鼠毛囊周期中的表达模式及调控作用。方法:HE染色观察小鼠毛囊正常形态,实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测SDF-1的表达;小鼠脱毛后注射磷酸缓冲盐溶液和SDF-1蛋白,定期取材,HE染色观察毛囊形态,Real-time PCR和Western Blot检测Wnt通路关键因子转录因子3(transcription factor 3,TCF-3)、β-catenin、Wnt3a的表达,免疫荧光确认上述因子表达定位。结果:HE染色发现在脱毛后0 d,皮肤组织中未见明显的毛囊结构,毛囊处于休止期;脱毛后3 d可见较多的囊泡样结构,毛囊处于生长期初期;脱毛后5 d可见明显的毛囊结构,毛囊处于生长期中期;脱毛后12 d毛囊处于生长期后期;脱毛后18 d可见毛囊退化,毛囊处于退行期,SDF-1在生长期初期和后期表达水平较高(P<0.001);与对照组相比,SDF-1注射组在第18天毛囊仍处于生长期,Wnt信号通路关键因子mRNA和蛋白表达水平较高,β-catenin表达水平明显升高(P<0.01),Wnt3a和TCF-3有上调的趋势(P>0.05),主要表达部位为毛囊,定位在外根鞘、内根鞘和毛囊基质。结论:SDF-1在毛囊周期中显示特征性表达模式,SDF-1能够上调Wnt/β-catenin信号通路关键因子水平,延长毛囊生长期,可能为临床上脱发性疾病的治疗提供一定的思路。

关键词：毛囊间质细胞趋化因子-1 Wnt/β-catenin信号通路小鼠

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血清反应因子N端片段对鼻咽癌细胞增殖及迁移能力的影响

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中国病理生理杂志 2022年第3期38卷 535-542页

作者：袁建玲邵钟铭邹园伍彩霞郑阿秀邢敬慈白建荣揭伟申志华广东医科大学基础医学院病理生理学教研室广东湛江524023 海南医学院急救与创伤研究教育部重点实验室海南海口571199 北京大学深圳医院病理科广东深圳518036

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-N(1~254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检... 详细信息

目的:探讨血清反应因子N端剪切片段(SRF-N)对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-N(1~254 aa)及阴性对照(NC)慢病毒颗粒感染人NPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的表达获得单克隆细胞株,CCK-8实验分析细胞活力的改变,划痕损伤修复实验和Transwell实验分析细胞迁移能力,细胞-基质黏附实验分析细胞黏附能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)和上皮-间充质转化(EMT)相关指标的表达,双萤光素酶报告基因实验检测SRF-Full和SRF-N对Snail1启动子的调节效应。结果:成功用SRF-Full、SRF-N及NC慢病毒感染6-10B细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合Flag标签蛋白的表达获得相应的单克隆细胞株,分别标记为6-10B^(SRF-Full)、6-10B^(SRF-N)和6-10B^(NC)。与6-10B^(NC)细胞相比,6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力和与基质的黏附能力均显著增强(P<0.01),而6-10B^(SRF-N)细胞较6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力及黏附能力均显著下降(P<0.01)。6-10B^(SRF-Full)细胞中波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(N-cadherin)和Snail1的表达水平较6-10B^(NC)细胞显著升高(P<0.01),上皮钙黏素(Ecadherin)表达水平显著下降(P<0.01);而6-10B^(SRF-N)细胞中vimentin、N-cadherin和Snail1的表达水平较6-10B^(SRF-Full)细胞显著下降(P<0.05),E-cadherin表达水平显著上升(P<0.05)。双萤光素酶活性实验结果表明,与NC相比,SRFFull显著激活Snail1启动子(P<0.001);与SRF-Full相比,SRF-N显著抑制Snail1启动子活性(P<0.01)。结论:SRF-Full促进而SRF-N抑制NPC细胞的增殖和迁移;SRF-N抑制Snail1启动子活性而介导NPC的EMT;SRF-N具有潜在的抗NPC作用。

关键词：鼻咽癌血清反应因子N端片段细胞增殖细胞迁移上皮-间充质转化

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BLOC-3介导Rab32线粒体定位改变对肝癌细胞生长的作用研究

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中国癌症防治杂志 2023年第2期15卷 129-137页

作者：刘小丽廖达文王星琛许小君魏元元王楠张志刚孙夏承黄启超季乐乐空军军医大学基础医学院生理与病理生理学教研室西安710000 陕西中医药大学第二临床医学院西安710000 延安大学基础医学院生理与病理生理学教研室西安710000 空军军医大学基础医学院教学实验中心西安710000

目的观察溶酶体相关细胞器生物发生复合体-3(biogenesis of lysosome-related organelles complex-3,BLOC-3)亚基Hps1和Hps4对肝癌细胞中Rab32线粒体定位的影响及在肝癌细胞生长中的作用。方法通过公共数据库GenDoma,String和InBio Discover分析Hps1和Hps4与Rab32的相互作用情况。体外培养人肝癌细胞系SNU-739和Hep-3B,利用脂质体转染方法分别转染Hps1和Hps4相关的siRNAs和质粒,采用免疫荧光和Western blot观察Hps1和Hps4对Rab32线粒体定位的影响,细胞划痕、克隆形成、EdU、MTS及Transwell侵袭实验检测Hps1和Hps4调控Rab32线粒体定位后肝癌细胞迁移、增殖和侵袭的变化情况。通过公共数据库UALCAN中的数据集CPTAC分析Rab32蛋白在肝癌和正常肝脏组织中的表达差异。结果数据库分析结果显示,Hps1和Hps4均可以与Rab32相互作用;与正常肝脏组织相比,Rab32蛋白在肝癌组织中的表达显著降低(P<0.001)。在肝癌细胞系SNU-739中干涉Hps1或Hps4或同时干涉Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位均减少(均P<0.01),细胞线粒体Rab32蛋白表达均降低(均P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力增强(均P<0.05);在肝癌细胞系Hep-3B中过表达Hps1和Hps4后,Rab32线粒体定位增多(P<0.01),细胞线粒体Rab32蛋白表达增加(P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力均受抑制(均P<0.01),而单独过表达Hps1或Hps4时无显著抑制作用(均P>0.05)。结论BLOC-3亚基Hps1和Hps4均可与Rab32相互作用并增加Rab32线粒体定位,进而抑制肝癌细胞生长。

关键词：肝癌 BLOC-3 Rab32 线粒体迁移侵袭

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病理生理学探索性实验教学改革与实践

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科教导刊 2024年第1期 49-51页

作者：邓冯媛岳晓阳陈宁园广西医科大学基础医学院病理生理学教研室广西南宁530021

探索性实验是病理生理学课程体系中重要的组成部分,通过探索性实验可以加深学生对理论知识的理解,拓展其思维能力,训练其动手操作能力,培养科研设计、论文书写的技能,提高科研思维和创新能力。文章结合广西医科大学基础医学院的具体情况... 详细信息

探索性实验是病理生理学课程体系中重要的组成部分,通过探索性实验可以加深学生对理论知识的理解,拓展其思维能力,训练其动手操作能力,培养科研设计、论文书写的技能,提高科研思维和创新能力。文章结合广西医科大学基础医学院的具体情况,对探索性实验的现状展开分析和探讨,基于问题提出对策,为完善病理生理学探索性实验教学提供一定参考。

关键词：实验教学探索性实验病理生理学教学改革

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肠道菌群及其代谢物短链脂肪酸与肠黏膜免疫关系的研究进展

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微生物学免疫学进展 2023年第6期51卷 67-73页

作者：李莹莹(综述) 纪巧荣(审校) 徐州医科大学基础医学院病理生理学教研室江苏徐州221009

肠道菌群(intestinal microbiota)寄居于肠道,其功能代谢改变可影响疾病的发生和发展。研究表明,多种疾病的发病过程涉及肠道菌群的改变。肠道黏膜免疫(mucosal immunity)作为机体抵御有害菌群的第一道防线,可使肠道在病原体侵袭时维持... 详细信息

肠道菌群(intestinal microbiota)寄居于肠道,其功能代谢改变可影响疾病的发生和发展。研究表明,多种疾病的发病过程涉及肠道菌群的改变。肠道黏膜免疫(mucosal immunity)作为机体抵御有害菌群的第一道防线,可使肠道在病原体侵袭时维持稳定状态。同时,在有益菌的调节作用下,肠道黏膜免疫也会作出相应的反应以增强肠道免疫功能。近年来,肠道菌群及其代谢与疾病的关系成为国内外研究的热点。众多研究表明,菌群与肠道黏膜免疫改变在调节机体免疫、代谢等疾病中具有重要作用。短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFA)是肠道菌群发酵纤维和抗性淀粉的主要产物,与肠道黏膜免疫的关系十分密切。现将肠道菌群及其代谢物SCFA对肠道黏膜免疫的调节及与疾病的关系作一概述。

关键词：黏膜免疫肠道菌群短链脂肪酸肠道炎症益生菌

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广西红水河流域长寿群体Smyca基因多态性分布及其对代谢危险因素的影响

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广西医科大学学报 2023年第6期40卷 1042-1047页

作者：崔晨曦陈宁园黄玲张义炜张书铭彭均华潘尚领广西医科大学基础医学院病理生理学教研室南宁530021

目的:探究广西红水河流域长寿人群Smyca基因多态性的分布情况及其对衰老相关代谢指标的影响。方法:使用PCRSanger测序法对广西红水河流域长寿老人95例(长寿组,年龄≥90岁)及当地普通健康老人94例(对照组,年龄60~75岁)的Smyca基因进行多... 详细信息

目的:探究广西红水河流域长寿人群Smyca基因多态性的分布情况及其对衰老相关代谢指标的影响。方法:使用PCRSanger测序法对广西红水河流域长寿老人95例(长寿组,年龄≥90岁)及当地普通健康老人94例(对照组,年龄60~75岁)的Smyca基因进行多态性检测,使用Haploview分析单倍型的连锁不平衡(LD),并采用Pearson相关性分析方法来分析单倍体携带情况及长寿风险评估。结果:在Smyca基因中共检测出9个多态,其中长寿组rs2594713 AA基因型及等位基因A的频率显著低于对照组,CC基因型及等位基因C的频率则高于对照组(均P<0.05),其他基因型与等位基因频率在两组间的分布无明显差异(P>0.05)。3个单核苷酸多态性(SNPs);rs2594713、rs7255672和rs62122064位点之间存在较高的LD;长寿组ATA单倍型频率低于对照组(P<0.05);在长寿人群中,rs2594713、rs7255672和rs62122064位点的野生纯合型携带者甘油三酯(TG)及载脂蛋白B(ApoB)水平均低于突变型携带者(均P<0.05),其他代谢指标在野生纯合型及突变型之间无显著差异(P>0.05)。结论:Smyca某些多态位点的基因型与代谢相关指标存在明显关联,并且Smyca基因的3个SNPs位点之间存在着有遗传意义的单倍型和LD关系,并且单倍型ATA可能会降低长寿的概率。

关键词：长寿衰老基因多态性代谢相关指标

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CCNB1在肝癌中的表达及沉默CCNB1对肝癌细胞的影响

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广西医科大学学报 2023年第5期40卷 792-798页

作者：王雪轩张书铭杨英张义炜潘尚领彭均华广西医科大学基础医学院病理生理学教研室南宁530021

目的:探讨细胞周期蛋白B1(CCNB1)在肝癌(HCC)中的表达及沉默CCNB1基因对肝癌细胞的影响。方法:利用Gene Expression Omnibus(GEO)和Genotype-Tissue Expression(GTEx)数据库中的HCC测序数据,对CCNB1 mRNA的表达水平及其与预后的相关性进行综合分析。在Huh7、SK两种HCC细胞系中沉默CCNB1(sh-CCNB1)检测其对HCC细胞生长、迁移、侵袭和细胞周期的影响。结果:测序数据分析发现,与正常组织比较,CCNB1 mRNA表达水平在多种肿瘤组织中显著升高,在HCC组织中也显著升高(SMD=1.69,95%CI:1.36~2.02,I2=96.2%)。在Huh7、SK细胞系中下调CCNB1表达结果发现,相对于对照组(sh-NC组),sh-CCNB1组细胞增殖受到明显抑制,细胞迁移和侵袭能力均显著下降;与sh-NC组相比,sh-CCNB1使Huh7细胞G0/G1期占比增加(P<0.05),S期减少(P<0.05);使SK细胞S期占比减少(P<0.000 1)、G2/M期占比显著增多(P<0.01)。结论:CCNB1在HCC中高表达,且沉默CCNB1抑制肝癌细胞的生长。

关键词：肝细胞癌细胞周期蛋白B1 基因表达细胞增殖

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基于TCGA数据库构建雌激素受体阳性乳腺癌患者的预后风险模型

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武汉大学学报（医学版） 2022年第2期43卷 243-249页

作者：杨燕贺鑫龚鹏举宋文静魏蕾张京伟武汉大学中南医院甲状腺乳腺外科湖北武汉430071 武汉大学基础医学院病理与病理生理学教研室湖北武汉430071

目的:构建微小RNA(miRNA)表达的预测雌激素受体(ER)阳性乳腺癌患者预后的风险模型。方法:分析了TCGA数据库下载的ER阳性乳腺癌患者的miRNA表达数据和临床资料,筛选出与ER阳性乳腺癌特异性相关的miRNA并构建了miRNA-临床的预测ER阳性乳... 详细信息

目的:构建微小RNA(miRNA)表达的预测雌激素受体(ER)阳性乳腺癌患者预后的风险模型。方法:分析了TCGA数据库下载的ER阳性乳腺癌患者的miRNA表达数据和临床资料,筛选出与ER阳性乳腺癌特异性相关的miRNA并构建了miRNA-临床的预测ER阳性乳腺癌患者3年和5年生存率的预测模型。受试者工作曲线(ROC)和校准曲线用于评估列线图的预测能力和准确性。最后分析了miRNA在他莫昔芬治疗复发组与未复发组的表达情况。使用DAVID工具进行miRNA靶基因的GO功能富集和KEGG信号通路富集。结果:Lasso回归分析最终得到与预后相关的4个miRNA(miR-331、miR-615、miR-653、miR-887)并计算风险评分,风险评分可以有效地区分低风险患者和高风险患者。随后,我们构建了包含风险评分和临床特征的预后模型。曲线下面积(AUC)显示,该模型具有较好的预测能力和准确性(3年AUC=0.768,5年AUC=0.849)。GSE37405数据集中miRNA表达分析显示miR-331在他莫昔芬治疗复发组的表达明显高于他莫昔芬治疗未复发组(P=0.018)。GO功能富集分析和KEGG信号通路分析表明,miR-331的靶基因主要参与蛋白质结合、转录调控和mRNA监视途径。结论:我们构建了miRNA-临床的预后模型,该模型可有效预测ER阳性乳腺癌患者的3年和5年生存率,并有利于制定个体化治疗决策。

关键词：雌激素受体阳性乳腺癌 miRNA TCGA 列线图

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