检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2023年第1期39卷 44-50页

作者：崔古贞管玉祝刘芳王鑫鑫吴道艳洪伟向松张峥嵘张玉典陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵阳550025 贵州省病原生物学特色重点实验室贵阳550025 地方病与少数民族病教育部重点实验室&贵州省医学分子生物学重点实验室贵阳550004

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,研究6S RNA敲除后对细菌生长及细胞毒力的影响。方法以幽门螺杆菌6S RNA基因为靶基因,构建6S RNA敲除质粒;利用电转法转化幽门螺杆菌,利用同源重组机制构建6S RNA敲除菌株;分析6S RNA敲除对细菌生长及细胞毒性的影响。结果成功构建幽门螺杆菌6S RNA基因敲除菌株,与野生型菌株相比,敲除菌株的生长方式显著改变,对GES-1胃粘膜上皮细胞的毒性显著降低。结论6S RNA具有调控幽门螺杆菌生长及毒力相关因子的功能,为幽门螺杆菌生物学功能及转录调控机制研究奠定了基础。

关键词：幽门螺杆菌 6S RNA 转录调控基因敲除

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幽门螺杆菌荧光蛋白报告系统的构建

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中国病原生物学杂志 2022年第6期17卷 643-648页

作者：管玉祝王鑫鑫吴道艳洪伟向松吴晓娟张玉典崔古贞陈峥宏贵州省病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)两种报告系统。方法利用PCR方法扩增幽门螺杆菌内源组成型尿素酶基因启动子(PureA),利用重叠延伸PCR方法将PureA启动子分别与绿色荧光蛋白基因(gfp)和红... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)两种报告系统。方法利用PCR方法扩增幽门螺杆菌内源组成型尿素酶基因启动子(PureA),利用重叠延伸PCR方法将PureA启动子分别与绿色荧光蛋白基因(gfp)和红色荧光蛋白基因(rfp)连接,构建两类荧光蛋白基因表达盒PureA-gfp和PureA-rfp。利用无缝组装技术将PureA-gfp和PureA-rfp表达盒分别与EcoRI单切的自杀质粒载体pSD连接,构建两类荧光蛋白基因表达报告质粒pSD-GFP和pSD-RFP。将上述两类荧光蛋白报告质粒分别转化幽门螺杆菌26695,涂布卡那霉素抗性平板,利用同源重组方法构建两类荧光蛋白基因工程菌株Hp::gfp和Hp::rfp。利用卡那霉素抗性和PCR方法筛选阳性工程菌株,并利用荧光显微镜检测两种荧光蛋白在幽门螺杆菌中的表达状况。结果工程菌株能够在卡那霉素抗性平板生长,PCR扩增目的基因片段与预期结果一致,表明gfp和rfp基因表达盒成功插入到幽门螺杆菌染色体靶位点。荧光显微镜下分别观察到明亮的绿色荧光和红色荧光,而野生型对照菌株无任何荧光,表明gfp和rfp基因在幽门螺杆菌中成功表达。结论在幽门螺杆菌中成功构建GFP和RFP两种荧光蛋白报告系统,为幽门螺杆菌的转录调控及致病机制研究提供了良好的检测手段。

关键词：幽门螺杆菌绿色荧光蛋白红色荧光蛋白基因表达报告系统

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噬菌体治疗中国专家建议

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中华传染病杂志 2023年第10期41卷 631-639页

作者：中国噬菌体研究联盟中国生物工程学会噬菌体技术专业委员会中国微生物学会医学微生物学与免疫学专业委员会乐率陈立光朱同玉不详陆军军医大学基础医学院微生物学教研室微生物工程重庆市高校重点实验室重庆400038 花莲慈济医学中心临床病理部花莲97002 复旦大学附属中山医院泌尿外科上海200030

细菌耐药问题给人类健康和公共卫生安全带来巨大威胁,然而,新型抗菌药物的研发速度远不及病原菌耐药产生的速度。因此,研发新型的抗菌疗法迫在眉睫。噬菌体是一种可特异性感染并杀死细菌的病毒,其杀菌机制与传统抗菌药物截然不同,且对... 详细信息

细菌耐药问题给人类健康和公共卫生安全带来巨大威胁,然而,新型抗菌药物的研发速度远不及病原菌耐药产生的速度。因此,研发新型的抗菌疗法迫在眉睫。噬菌体是一种可特异性感染并杀死细菌的病毒,其杀菌机制与传统抗菌药物截然不同,且对抗菌药物耐药的细菌同样有效,不良反应少。噬菌体是治疗难治性耐药细菌感染中极具应用潜力的新策略。近年来,噬菌体治疗超级细菌感染的成功案例越来越多。中国、美国、欧洲联盟、以色列和澳大利亚等国家和地区相继批准了噬菌体治疗耐药菌感染的临床试验。但是,目前噬菌体治疗的临床循证医学证据有限,缺乏统一的技术规范和评价体系。因此,现组织噬菌体治疗过程中涉及的基础医学、临床医学、临床检验诊断学等多学科的专家,基于我国前期进行的噬菌体治疗临床试验经验,并通过文献检索和证据评价,共同起草了《噬菌体治疗中国专家建议》,以期规范噬菌体的临床应用流程,促进噬菌体在临床实践中的应用,提高我国噬菌体临床应用水平,为有效遏制耐药细菌危机,更好地维护人民生命健康奠定坚实的基础。

关键词：噬菌体临床应用耐药细菌专家建议

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SrrAB在葡萄球菌生长代谢及存活中的作用研究进展

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微生物学通报 2021年第2期48卷 596-605页

作者：孟媛媛乾莲郭姝蓉武有聪瞿涤大理大学基础医学院病原生物学综合实验室云南大理671000 大理大学基础医学院医学微生物学及免疫学教研室云南大理671000 复旦大学教育部/卫健委医学分子病毒学重点实验室上海200032

双组分信号转导系统SrrAB能够感应外界环境中氧浓度的变化,通过磷酸化水平的改变来调控靶基因的转录,进而影响葡萄球菌的多种生物学特性。研究发现SrrAB与葡萄球菌的毒力、生物膜的形成密切相关,而且有氧及厌氧条件下的调控机制不尽相... 详细信息

双组分信号转导系统SrrAB能够感应外界环境中氧浓度的变化,通过磷酸化水平的改变来调控靶基因的转录,进而影响葡萄球菌的多种生物学特性。研究发现SrrAB与葡萄球菌的毒力、生物膜的形成密切相关,而且有氧及厌氧条件下的调控机制不尽相同。然而,SrrAB与葡萄球菌的生长、代谢及其在病原体-宿主互作中的机制尚不清楚。结合课题组研究,本文就近年来SrrAB在葡萄球菌生长、代谢及其在葡萄球菌与宿主固有免疫细胞相互作用中的研究进展进行综述,为控制葡萄球菌引起的感染提供理论依据。

关键词：双组分信号转导系统 SrrAB 生长代谢葡萄球菌

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消炎药药渣堆放过程中真菌多样性分析

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菌物学报 2022年第10期41卷 1585-1596页

作者：程敏郭鑫瑶王梅竹季晶焱李小兵康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省赤水河畔酱酒研究中心贵州贵阳550003 贵州省烟草科学研究院贵州贵阳550009

中药药渣的处理是中药制药的难题,本研究利用Pac Bio Sequel高通量测序对堆放2年与5年的消炎药药渣进行理化性质及真菌多样性研究,为重要药渣的利用提供依据。分别对堆放2年(New 1–New 3)及5年(Old 1–Old 3)各3个消炎药渣高通量测序,... 详细信息

中药药渣的处理是中药制药的难题,本研究利用Pac Bio Sequel高通量测序对堆放2年与5年的消炎药药渣进行理化性质及真菌多样性研究,为重要药渣的利用提供依据。分别对堆放2年(New 1–New 3)及5年(Old 1–Old 3)各3个消炎药渣高通量测序,共检测到43753条有效序列,堆放2年的药渣中共检测到4个门、86个属、126个种,节担菌纲、小丛壳目、曲霉属为优势类群。堆放5年的药渣中检测到3个门、49个属、59个种,Chaetomium novozelandicum及小囊菌科为优势类群。消炎药药渣功能组成分析发现,堆放2年的药渣中腐生型真菌占比67.7%、致病真菌占比32.3%;堆放5年的药渣中腐生型真菌占比96.8%,仅检测到极少数其他型真菌。堆放2年的药渣p H为4.9±0.2,含水量为49.2%;堆放5年的药渣p H为3.6±0.1,含水量为20.8%。结果表明,随着堆放时间的增加,药渣p H及含水量下降,真菌营养类型由腐生、致病与共生三者丰度相当转变为单一的腐生型,说明随着堆放时间的增加,腐生真菌丰度增加,药渣降解加快,研究结果为药渣的利用提供了一定依据。

关键词：特殊生物质消炎中草药渣真菌多样性高通量测序

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一株产酶真菌Phaeophlebiopsis sp.转录组分析

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菌物学报 2022年第10期41卷 1634-1646页

作者：程敏郭鑫瑶李启瑞王迪李小兵康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省赤水河畔酱酒研究中心贵州贵阳550003 贵州省烟草科学研究院贵州贵阳550009

对从药渣中分离的真菌ZYJHYZ254进行鉴定及产酶活性研究,从转录组分析菌株不同生长时期差异表达基因对其生长发育及产酶调控的影响,以筛选高产木质纤维素水解酶真菌,寻找调控关键基因。鉴定ZYJHYZ254为拟暗射脉菌Phaeophlebiopsissp.,... 详细信息

对从药渣中分离的真菌ZYJHYZ254进行鉴定及产酶活性研究,从转录组分析菌株不同生长时期差异表达基因对其生长发育及产酶调控的影响,以筛选高产木质纤维素水解酶真菌,寻找调控关键基因。鉴定ZYJHYZ254为拟暗射脉菌Phaeophlebiopsissp.,产酶在第5–7天最高。从生长3 d与7 d的菌丝中共检测到1232个差异基因,以3 d的菌丝为对照,显著上调、下调基因分别有826及406个,基因注释和GO、KEGG功能富集分析结果表明差异表达基因主要与蛋白质合成、代谢及酶合成相关。此外,共有387个CAZymes基因表达,GH数量最多,约占49.61%,其次为AA(97)与GT(62),约占25.06%与16.02%。GH16(24个)占GH的12.50%,含量最多,主要编码葡萄糖苷酶、木聚糖酶等,AA中AA3(37个)占比38.14%,编码氧化酶、脱氢酶等。结果表明ZYJHYZ254中生长3 d与7 d的菌丝经功能富集分析发现差异表达基因主要与蛋白质合成、代谢,以及酶合成相关。进一步研究发现在两个生长时期中CAZymes基因表达最多的是GH16与AA3,预示了该菌葡萄糖苷酶、木聚糖酶、β-半乳糖苷酶、氧化酶与脱氢酶含量最丰富,对降解特殊生物质中的木质纤维素具有重要意义。

关键词：特殊环境丝状真菌转录组学木质纤维素碳水化合物活性酶

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基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统构建

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中国病原生物学杂志 2022年第9期17卷 1010-1014页

作者：崔古贞花登雄鲍江舰张馨月洪伟吴道艳向松谷俊莹陈峥宏贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省病原生物学特色重点实验室贵州医科大学医学检验学院省部共建地方病与少数民族性疾病重点实验室贵州医科大学附属医院

目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携... 详细信息

目的构建基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统。方法构建sacB毒蛋白诱导表达受体质粒pACYC-sacB(携带p15A复制子),分析sacB毒蛋白对大肠埃希菌的毒性。设计sacB基因打靶位点,构建脱水四环素诱导的Targetron供体质粒pSY11-sacB(携带colE1复制子和sacB405a打靶位点)。双质粒共转化大肠埃希菌BL21(DE3),脱水四环素诱导Targetron表达并对sacB基因进行打靶。涂布含有5%蔗糖和0.1 mmol/L IPTG的选择培养基,筛选sacB基因失活的阳性菌落,利用菌落PCR进一步验证Ⅱ型内含子在靶位点的插入情况。结果sacB基因表达的大肠埃希菌不能在含有5%蔗糖的平板中生长;双质粒共转化后,脱水四环素诱导Targetron表达能够插入到sacB405a靶位点;sacB基因失活后,大肠埃希菌能够在含有5%蔗糖的平板上生长,菌落PCR验证内含子插入到DNA靶位点。结论建立了基于sacB负筛选标记的Targetron质粒分析系统,为Ⅱ型内含子功能鉴定、迁移规律分析等奠定了基础。

关键词： Targetron sacB Ⅱ型内含子打靶平台

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病原菌血流感染对阿尔茨海默病小鼠记忆力和海马锥体细胞的影响

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贵州医科大学学报 2024年第2期49卷 205-212页

作者：姚昌昊周晓明康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵阳市妇幼保健院质控科贵州贵阳550003

目的探讨病原菌血流感染对阿尔茨海默病(AD)小鼠记忆力和海马锥体细胞的影响。方法 50只C57BL/6J雄性小鼠腹壁皮下注射D-半乳糖液[200 mg/(kg·d)]连续8周构建AD模型并于造模期间每周观测小鼠的一般状态及体质量;造模结束后均分为... 详细信息

目的探讨病原菌血流感染对阿尔茨海默病(AD)小鼠记忆力和海马锥体细胞的影响。方法 50只C57BL/6J雄性小鼠腹壁皮下注射D-半乳糖液[200 mg/(kg·d)]连续8周构建AD模型并于造模期间每周观测小鼠的一般状态及体质量;造模结束后均分为生理盐水(对照)组、大肠埃希菌组、铜绿假单胞菌组、肺炎克雷伯杆菌组、金黄色葡萄球菌组及白念珠菌组,对照组小鼠尾静脉注射生理盐水,其余病原菌感染组小鼠尾静脉注射低(1.5×107CFU/L)、中(1.5×108CFU/L)及高(1.5×109CFU/L)浓度的对应病原菌菌液,观察14 d,分别于注射后第1、2、3天及第1、2周测定各组小鼠的体质量及体温;观察结束后,于第15天采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠逃逸潜伏期、游泳速度及穿越平台次数,水迷宫实验共进行6 d;实验结束后处死各组小鼠,取海马组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察海马组织学的改变。结果小鼠于第8周体质量开始下降,且精神状况较造模初期明显下降;部分病原菌感染组小鼠逃避潜伏期较对照组延长(P<0.05),第5天肺炎克雷伯菌高浓度组小鼠水迷宫实验游泳速度较对照组下降(P<0.05);对照组小鼠海马CA1和CA3区神经细胞及皮层未见明显异常,白念珠菌组小鼠海马组织中发现少量凋亡细胞,肺炎克雷伯菌组、金黄色葡萄球菌组小鼠海马神经细胞轻度排列紊乱。结论 AD患者来源的病原菌经尾静脉血流感染可导致AD小鼠记忆力下降及海马锥体细胞的形态改变。

关键词：阿尔茨海默病小鼠记忆海马血流感染病原菌水迷宫苏木精-伊红染色

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滴鼻感染甲型流感病毒对BALB/c和C57BL/6J小鼠自发行为学的比较研究

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中国免疫学杂志 2020年第16期36卷 1931-1934,1940页

作者：周艳琳谷李铭李康生王革非(指导) 新乡医学院三全学院病原生物学与免疫学教研室新乡453003 汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室广东省感染病与分子免疫病理重点实验室汕头515041

目的:比较滴鼻感染甲型流感病毒PR8的C57BL/6J和BALB/c两种品系小鼠旷场自发行为表现的差异,探讨流感病毒感染对两种品系小鼠抑郁焦虑情绪的影响。方法:健康C57BL/6J小鼠和BALB/c小鼠各20只,随机分为甲型流感病毒PR8感染组(PR8组)和生... 详细信息

目的:比较滴鼻感染甲型流感病毒PR8的C57BL/6J和BALB/c两种品系小鼠旷场自发行为表现的差异,探讨流感病毒感染对两种品系小鼠抑郁焦虑情绪的影响。方法:健康C57BL/6J小鼠和BALB/c小鼠各20只,随机分为甲型流感病毒PR8感染组(PR8组)和生理盐水对照组(CON组),每组10只。记录每组小鼠1周内的体质量、在旷场行为箱体内的行走总路程、周边区域运动路程、平均运动速度及粪便排泄情况,并检测感染后的第7天小鼠脑组织炎症因子(TNF-α、IL-1β、CXCL10、BDNF)转录水平。结果:滴鼻感染PR8后均引起小鼠体质量显著下降,且BALB/c小鼠较C57BL/6J小鼠体质量下降更明显。BALB/c小鼠较C57BL/6J小鼠在旷场试验中行走总路程、周边区域运动路程减少更明显。感染后第7天BALB/c小鼠中枢神经系统(CNS)炎症因子表达显著上调。结论:滴鼻感染PR8可引起小鼠体质量下降,活动性降低,出现一定程度的抑郁焦虑情绪,并伴随CNS炎症因子显著上调。且BALB/c小鼠对PR8的敏感度较C57BL/6J小鼠明显,更适宜做PR8感染的模型小鼠。本研究为研究流感病毒外周感染诱导小鼠空间记忆、学习认知、情绪等调控奠定基础,为进一步探究流感相关脑病的病理机制提供依据。

关键词：流感病毒小鼠旷场自发行为抑郁情绪

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肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定

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贵州医科大学学报 2023年第3期48卷 259-265页

作者：彭秀玲邵瑞瑞田艳黄孝彬陈绍海文胜陈峥宏崔古贞齐晓岚洪伟贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室&贵州省分子生物学重点实验室&贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学生物与工程学院贵州贵阳550025 贵州建设职业技术学院公共艺术教研室贵州清镇市551400 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025

目的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定。方法以18株临床分离肺炎克雷伯菌为宿主菌,采用双层平板法从水样中分离肺炎克雷伯菌噬菌体并进行纯化,透射电镜观察噬菌体形态,提取噬菌体DNA及蛋白并测定其生理生化特性。结果成功分... 详细信息

目的肺炎克雷伯菌裂解性噬菌体KP-ZS5的分离及鉴定。方法以18株临床分离肺炎克雷伯菌为宿主菌,采用双层平板法从水样中分离肺炎克雷伯菌噬菌体并进行纯化,透射电镜观察噬菌体形态,提取噬菌体DNA及蛋白并测定其生理生化特性。结果成功分离到1株长尾肺炎克雷伯菌噬菌体,并命名为KP-ZS5,pH稳定性实验表明KP-ZS5不耐强酸(pH≤3);限制性片段酶切多样性(RFLP)分析表明,KP-ZS5基因组中存在3个BglⅡ酶切位点,预计总基因组大小为20000~30000 bp;裂解谱实验表明,KP-ZS5可以感染33%(6/18)的临床肺炎克雷伯菌株;SDS-PAGE结果显示,在KP-ZS5外壳蛋白由3种蛋白组成,外壳蛋白分子量为35~48 kDa。结论成功分离出1株长尾肺炎克雷伯菌噬菌体KP-ZS5,该噬菌体具有较广的宿主范围和pH值耐受性,外壳蛋白组成简单,仅含3种分子量为35~48 KDa的组分,具有在临床治疗肺炎克雷伯菌感染的潜力。

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生理生化特征双层平板法噬菌体疗法

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