检索结果-内蒙古大学图书馆

中国细胞生物学学报 2016年第11期38卷 1373-1381页

作者：杨芬刘彦礼闫岩张大林吉祥林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

选择安全高效的诱导剂促进干细胞成心肌样细胞分化,将为干细胞治疗心脏疾病提供更佳的种子细胞,加强干细胞治疗效果。该研究重在明确淫羊藿苷(icariin,ICA)对经血源性子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Me... 详细信息

选择安全高效的诱导剂促进干细胞成心肌样细胞分化,将为干细胞治疗心脏疾病提供更佳的种子细胞,加强干细胞治疗效果。该研究重在明确淫羊藿苷(icariin,ICA)对经血源性子宫内膜干细胞(menstrual blood-derived endometrial stem cells,Men ESC)成心肌样细胞分化的影响。首先,通过MTT法和划痕实验检测ICA对Men ESC增殖和迁移的影响。RT-PCR检测ICA与5氮杂胞苷(5azacytidine,5aza C)诱导前后心肌特异性转录调控因子肌细胞增强因子-2C(myocyte enhancer factor-2C,MEF-2C)、NK2转录因子相关蛋白5(NK2 transcription factor related locus 5,Nkx2.5)、GATA结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)以及心肌特异性标志物人类心房钠尿肽(human atrial natriuretic peptide,h ANP)、肌钙蛋白I(cardiac tropomin I,c Tn I)、肌钙蛋白T(cardiac tropomin T,c Tn T)基因的表达水平。免疫荧光检测ICA与5aza C诱导后细胞中c Tn T的蛋白质水平表达。结果表明,ICA对Men ESC的增殖和迁移无显著性影响;进一步发现,ICA与5aza C诱导Men ESC后,均能显著上调MEF-2C、Nkx2.5、GATA4、h ANP、c Tn I及c Tn T基因的表达;而最终的免疫荧光结果也证实,ICA诱导后的Men ESC阳性表达c Tn T。综上所述,ICA可在不影响Men ESC增殖和迁移活性的基础上促进其成心肌样细胞分化,为Men ESC在临床上治疗心脏疾病提供新途径。

关键词：经血源性子宫内膜干细胞淫羊藿苷心肌分化心脏疾病

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两种真核启动子体内外转录活性比较研究

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中国细胞生物学学报 2015年第10期37卷 1370-1376页

作者：刘彦礼于亚楠杨坤林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

启动子作为基因工程表达载体的核心组成部分,在很大程度上决定了目的基因的转录活性。为筛选出一个转录活性较高的真核启动子,以目的蛋白与增强型绿色荧光蛋白融合表达的形式,在体内外检测CMV和CAG两种真核启动子的转录活性。首先,通过... 详细信息

启动子作为基因工程表达载体的核心组成部分,在很大程度上决定了目的基因的转录活性。为筛选出一个转录活性较高的真核启动子,以目的蛋白与增强型绿色荧光蛋白融合表达的形式,在体内外检测CMV和CAG两种真核启动子的转录活性。首先,通过常规分子生物学技术将神经钙黏着蛋白(N-cad)克隆到p CAG-MCS-EGFP质粒中(携带CAG启动子),菌落PCR、双酶切及测序验证;与p EGFP-N-cad质粒(携带CMV启动子)一起通过磷酸钙法分别转染HEK293T细胞,比较两种质粒在体外细胞水平转染目的基因效率;随后,通过已建立的鸡胚脊髓活体电转方法比较两种质粒在活体鸡胚脊髓内转录目的基因效率,冷冻切片后进行荧光强度观察;而体内外实验均应用常规Western blot和RT-PCR技术验证目的基因N-cad在蛋白及基因水平上的表达。荧光显微镜观察结果表明,CMV启动子仅能在体外细胞水平上行使其转录活性,而CAG启动子可在体内体外高效行使其转录活性,进一步的Western blot和RT-PCR结果与荧光观察结果一致。该研究结果可为体内研究目的基因功能时的载体构建提供借鉴。

关键词：启动子转录活性活体电转技术增强型绿色荧光蛋白

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整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化

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解剖学报 2013年第4期44卷 525-529页

作者：穆灵敏王文锋郭志坤张光谋新乡医学院形态学实验室新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化。方法利用免疫组织化学和RT-PCR方法,检测胚胎18d(E18d)、生后5d(P5d)、P19d、P40d及生后1年(P1y)大鼠心肌组织的CD11a、CD11b和CD11c的基因和蛋白表达。结果免疫组织化... 详细信息

目的探讨整合素CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心脏发育中的表达变化。方法利用免疫组织化学和RT-PCR方法,检测胚胎18d(E18d)、生后5d(P5d)、P19d、P40d及生后1年(P1y)大鼠心肌组织的CD11a、CD11b和CD11c的基因和蛋白表达。结果免疫组织化学结果显示,大鼠心肌组织CD11a、CD11b和CD11c表达部位在心肌细胞质内;从E18d到P1y大鼠心肌组织CD11a、CD11b和CD11c的表达逐渐减弱。RT-PCR显示,CD11a、CD11b、CD11c各组均呈阳性表达。其中CD11a在P5d和P40d间,P5d和P19d间比较(P>0.05)差异无统计学意义,其他各组间比较差异均有统计学意义;CD11b在E18d、P5d、P19d和P40d分别比较(P>0.05)差异无统计学意义,其他各组差异均有统计学意义;CD11c各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CD11a、CD11b和CD11c在大鼠心肌的发育过程中出现表达量的变化,不同结构的整合素分子在心脏发育过程表现出相似的表达规律,它们可能对心肌细胞的发育起重要的调控作用。

关键词：心脏整合素CD 免疫组织化学反转录一聚合酶链反应大鼠

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三种经典钙黏蛋白分子在鸡胚脊髓发育过程中的表达模式

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解剖学杂志 2015年第3期38卷 261-264,F0003页

作者：李晗杨慈清乔梁张必超于亚楠林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的：揭示神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。方法：取鸡胚正常发育过程 E3、E4、E5、E6、E8和 E10各时期的脊髓,原位杂交法检测神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空... 详细信息

目的：揭示神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。方法：取鸡胚正常发育过程 E3、E4、E5、E6、E8和 E10各时期的脊髓,原位杂交法检测神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7在鸡胚脊髓发育过程中的时空表达模式。结果：在 E3~E6时期,神经钙黏蛋白主要在神经上皮层、生皮节、脊索、顶板、底板以及背根神经节区域表达,E8~E10时期,其 mRNA 信号主要在灰质区和背根神经节；在 E3~E5时期,钙黏蛋白6主要在生皮节、顶板和底板表达,之后在顶板和底板的表达均减弱,主要在侧运动柱表达；E3~E6时期,钙黏蛋白7主要在生皮节、底板、基板背部、运动柱、背根和腹根强烈表达,E8之后其表达主要集中在灰质区和腹根。结论：神经钙黏蛋白、钙黏蛋白6与钙黏蛋白7不同的表达模式预示着它们在脊髓及其周围组织发育过程中扮演不同角色。

关键词：神经钙黏蛋白钙黏蛋白6 钙黏蛋白7 原位杂交表达模式

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Caspase-3和Caspase-9在PC-12细胞移植肿瘤模型中的表达及意义

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黑龙江畜牧兽医 2015年第5期 27-29,268页

作者：李小英杨慈清王聪睿付苏雷林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

为了在建立的PC-12细胞肿瘤移植模型基础上,对不同时间点肿瘤组织中的Caspase-3和Caspase-9的表达进行检测,探讨Caspase-3和Caspase-9在肿瘤发展过程中的作用和意义,试验将指数生长期的PC-12细胞以0.1 m L(1×107个/m L)的密度接种... 详细信息

为了在建立的PC-12细胞肿瘤移植模型基础上,对不同时间点肿瘤组织中的Caspase-3和Caspase-9的表达进行检测,探讨Caspase-3和Caspase-9在肿瘤发展过程中的作用和意义,试验将指数生长期的PC-12细胞以0.1 m L(1×107个/m L)的密度接种于出生第7天的昆明白小鼠右前肢腋窝皮下,在接种后的不同时间点(7,14,21天)分别进行取材,将肿瘤块及邻近组织一并取下,通过多聚甲醛固定、包埋剂包埋后进行冰冻切片,采用荧光免疫组织化学法对Caspase-3和Caspase-9的表达进行检测。结果表明:刚出生7天的昆明白小鼠,接种PC-12细胞后7天时便可以明显观察到肿瘤块的形成,在14天时肿瘤块最大,21天时肿块减小,到28天时肿瘤块基本消失;对照组小鼠肌肉组织中Caspase-3和Caspase-9都呈现低表达。在移植肿瘤7天的肿块实体组织中,Caspase-3和Caspase-9都呈阳性表达;在14天时实体组织中表达降低,但是在周围组织中的表达增强;在21天时周围组织的表达也减弱。说明普通昆明白小鼠幼鼠中不能够建立真正的肿瘤模型,但是短期内仍能形成瘤块,在不同时间点,Caspase-3和Caspase-9表达具有明显的区域和量的差异,但是Caspase-3和Caspase-9表达部位和表达量的变化具有相似性。

关键词： PC-12细胞细胞移植肿瘤 Caspase-3 Caspase-9

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金黄色葡萄球菌类肠毒素K与GFP融合蛋白工程菌的构建及其表达蛋白生物学活性分析

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中国生物工程杂志 2018年第12期38卷 14-20页

作者：何亚南孙钰椋任雅坤梁盛英杨芬刘彦礼林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 新乡医学院生物医学工程学院新乡453003

目的构建携带金黄色葡萄球菌类肠毒素K(staphylococcal enterotoxin-likeK,SElK)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合基因的工程菌,并对SElK-GFP融合蛋白进行初步生物学活性分析。方法利用PCR和OverlapPCR克隆获得SElK-GFP融合基因,并插入pET28a表达载体中,通过菌落PCR,质粒双酶切及测序验证后,将构建成功的pET28a-SElK-GFP质粒转化到***21菌株中进行诱导表达,通过Ni+亲和磁珠试剂盒纯化获得SElK-GFP融合蛋白;并利用MTT法检测SElK-GFP刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISA法检测SElK-GFP尾静脉注射后小鼠血清中细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌水平。结果成功构建能够表达SElK-GFP融合蛋白的工程菌,纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白可观测到明显的绿色荧光,融合蛋白生物学活性分析表明,SElK-GFP能够呈剂量依赖性地显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖;同时ELISA检测发现SElK-GFP可显著增加小鼠血清中细胞因子IL-2及IFN-γ的分泌水平。结论成功克隆、表达及纯化获得高纯度的SElK-GFP融合蛋白,其不仅保留了SElK的超抗原活性,同时兼具GFP绿色荧光的可视性,为深入研究SElK生物学活性提供有利工具。

关键词：金黄色葡萄球菌类肠毒素K 超抗原 T淋巴细胞原核表达

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从异位子宫内膜分离获得的内膜干细胞的生物学特点

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解剖学报 2019年第4期50卷 438-444页

作者：梁盛英王红梅杨芬孙钰椋刘彦礼杨君林俊堂河南省医用组织再生重点实验室新乡医学院第一附属医院妇二科河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术学院干细胞中心河南新乡453003 新乡医学院生物医学工程学院河南新乡453003

目的建立子宫内膜异位症(内异症)患者异位病灶来源子宫内膜干细胞(En SCs)的分离培养及鉴定方法,并对所分离细胞的生物学特性进行检测,为研究En SCs在内异症发病机制中的潜在作用提供支持。方法收集临床内异症患者异位病灶内膜组织样本... 详细信息

目的建立子宫内膜异位症(内异症)患者异位病灶来源子宫内膜干细胞(En SCs)的分离培养及鉴定方法,并对所分离细胞的生物学特性进行检测,为研究En SCs在内异症发病机制中的潜在作用提供支持。方法收集临床内异症患者异位病灶内膜组织样本,机械剪碎后Ⅰ型胶原酶消化,分离获得异位En SCs,常规培养传代(n=10);免疫荧光检测细胞波形蛋白(vimentin)的表达(n=3);MTT法检测细胞增殖活性(n=5);成脂成骨诱导检测细胞多向分化潜能(n=3),流式细胞仪检测细胞表面标志物(n=3);蛋白芯片检测细胞条件培养基中促血管再生因子及相关炎症因子的分泌(n=6),同时检测细胞表面相关黏附分子的表达(n=7)。结果成功从异位病灶中分离获得异位En SCs,所分离细胞强阳性表达骨架蛋白vimentin,且细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物CD29、CD73、CD90及CD105,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45;经成脂诱导分化后油红O染色可见明显脂滴,成骨诱导分化后茜素红染色可见明显钙结节;蛋白芯片检测结果表明,异位En SCs能够分泌高浓度的促血管再生因子血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素(ANG)及血小板衍生生长因子(PDGF)-AA,以及与促血管再生密切相关的炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),且细胞表面高表达活化白细胞黏附分子(ACLAM)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)。结论本研究成功建立内异症患者异位病灶来源En SCs的分离培养及鉴定方法;对其活性因子分泌的研究表明,异位En SCs具有明显的促血管再生作用。上述实验结果肯定了内异症患者异位病灶中干细胞的存在,在支持内异症发病机制中"干细胞学说"的同时,为进一步围绕异位En SCs开发潜在的内异症治疗靶点提供可能。

关键词：子宫内膜异位症旁分泌作用黏附因子免疫荧光流式细胞术异位子宫内膜干细胞

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瘦素对肥胖小鼠下丘脑神经元活性及脂肪组织代谢的影响

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解剖学报 2024年第4期55卷 452-459页

作者：刘晓璇张晗思韩晓静尚晓迪康静林俊堂闫欣乔梁河南省干细胞与生物治疗工程研究中心新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院医学工程学院河南新乡453003

目的探讨瘦素对肥胖小鼠下丘脑神经元活性的影响,以及对脂肪组织脂质代谢的作用。方法选取10只瘦素基因纯合突变(ob/ob)小鼠和同窝出生的10只野生型(WT)小鼠作为研究对象,随机分为对照组和瘦素治疗组。通过免疫荧光染色、HE染色和Real-t... 详细信息

目的探讨瘦素对肥胖小鼠下丘脑神经元活性的影响,以及对脂肪组织脂质代谢的作用。方法选取10只瘦素基因纯合突变(ob/ob)小鼠和同窝出生的10只野生型(WT)小鼠作为研究对象,随机分为对照组和瘦素治疗组。通过免疫荧光染色、HE染色和Real-time PCR分析小鼠阿黑皮质素原(POMC)神经元和酪氨酸羟化酶(TH)神经元活性、脂肪组织形态变化及脂质相关基因的表达。结果与WT小鼠相比,ob/ob小鼠POMC神经元和TH;+;神经元活性显著降低,脂肪组织和肝脏组织细胞直径明显增大,皮下白色脂肪中产热相关基因解耦联蛋白1(UCP1)、细胞色素C氧化酶亚基8b(Cox8b)和细胞死亡激活剂CIDE-A(Cidea)的表达显著降低,脂质合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1(Srebp1)和脂肪酸合酶(Fas)的表达显著升高;瘦素治疗后,WT和ob/ob小鼠POMC神经元和TH;+;神经元活性增加,ob/ob小鼠脂肪组织和肝脏组织细胞直径明显减小,空泡变性程度降低,褐色脂肪组织产热相关基因和脂解相关基因的表达显著升高,脂质合成相关基因的表达显著降低。结论瘦素通过激活ob/ob小鼠下丘脑POMC神经元和外周脂肪组织交感神经系统,抑制食物摄入,增加脂肪降解并降低脂质合成作用,从而改善脂肪白色化并抑制肥胖的发展。

关键词：肥胖瘦素下丘脑脂肪组织免疫荧光实时定量聚合酶链反应瘦素基因纯合突变小鼠

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缬沙坦诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化

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解剖学报 2014年第6期45卷 841-846页

作者：何万里李永海杨军政林俊堂郭志坤徐振平新乡医学院生命科学技术学院干细胞与生物治疗技术研究中心河南省医用组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的探讨缬沙坦诱导人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）向心肌样细胞分化的潜能。方法hUCMSCs经缬沙坦诱导后培养1～3周，应用心肌肌钙蛋白T（cTnT）和GATA结合蛋白4重组蛋白（GATA4）抗体进行免疫细胞化学和免疫荧光染色，鉴定分化后的细... 详细信息

目的探讨缬沙坦诱导人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）向心肌样细胞分化的潜能。方法hUCMSCs经缬沙坦诱导后培养1～3周，应用心肌肌钙蛋白T（cTnT）和GATA结合蛋白4重组蛋白（GATA4）抗体进行免疫细胞化学和免疫荧光染色，鉴定分化后的细胞。通过RT—PCR检测心肌肌钙蛋白I（cTnI）基因、心肌相关转录因子和心肌细胞发育相关基因的mRNA表达，进行hUCMSCs的心肌分化潜能和缬沙坦诱导能力的分析。结果人脐带间充质干细胞形态为均一的纤维状细胞，呈漩涡状排列。缬沙坦诱导后明显变小呈短梭形且不规则排列。免疫细胞化学和免疫荧光结果显示，诱导组细胞有心肌特异蛋白cTnI和心肌相关转录因子GATA4蛋白表达，对照组较少。RT—PCR结果显示，人脐带间充质干细胞自发的、持续性表达心肌相关转录因子Tbx5、GATA4和Nkx2．5的mRNA，经缬沙坦诱导1周时其mRNA表达水平略有上升，随后逐渐下降。cTnI的mRNA在诱导第3周时出现，未见心肌发育相关基因心房利钠肽（ANP）和β-心肌肌球蛋白重链（B—MHC）的mRNA表达。结论人脐带间充质于细胞具有心肌分化潜能但无法自发分化；缬沙坦具有诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的能力。

关键词：缬沙坦诱导分化心肌样细胞免疫组织化学免疫荧光人脐带间充质干细胞

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小鼠子宫内电转基因方法的建立

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解剖学杂志 2013年第2期36卷 170-172,F0004页

作者：杨慈清李小英卢习付苏雷赵善廷林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

目的：建立小鼠子宫内电转基因技术，比较分析转染绿色荧光蛋白（GFP）后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响。方法：将怀孕15d的小鼠，水合氯醛麻醉后，取出两侧子宫，用毛细管注射针将2μg／μl的pCAGGS-GFP质粒0．5-1μl准确注射到胎鼠... 详细信息

目的：建立小鼠子宫内电转基因技术，比较分析转染绿色荧光蛋白（GFP）后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响。方法：将怀孕15d的小鼠，水合氯醛麻醉后，取出两侧子宫，用毛细管注射针将2μg／μl的pCAGGS-GFP质粒0．5-1μl准确注射到胎鼠侧脑室，在电压40V、每次脉冲60ms，间隔940ms，电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因，电转后24h取材，甲醛固定冷冻冠状切片，DAPI染细胞核观察组织形态结构变化，荧光免疫组织化学检测α-SMA的表达差异。结果：妊娠15d孕鼠转染24h后小鼠成活率80％（8／10），胚胎成活率为54．2％（13／24），存活胚胎GFP阳性表达率为61．5％（8／13），GFP阳性表达胚胎脑组织切片，基因转染区域和正常组织区组织形态结构和α-SMA表达不存在差别。结论：成功建立了小鼠子宫内电转基因的方法。

关键词：小鼠转基因方法子宫内电转

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