检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肿瘤生物治疗杂志 2018年第2期25卷 142-147页

作者：陈亚楠杨如许芝山吴敏娜路平钟根深新乡医学院第一附属医院生命科学技术研究中心河南卫辉453100 新乡医学院基础医学院微生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院肿瘤内二科河南卫辉453100

目的:研究过表达IL-18基因对人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)HCT-116细胞体内外增殖的影响及其可能的机制。方法:构建含人IL-18基因片段的载体,采用慢病毒转染法获得稳定过表达人IL-18的CRC HCT-116细胞株HCT-116/IL-18,CCK-8法检测H... 详细信息

目的:研究过表达IL-18基因对人结直肠癌(colorectal cancer,CRC)HCT-116细胞体内外增殖的影响及其可能的机制。方法:构建含人IL-18基因片段的载体,采用慢病毒转染法获得稳定过表达人IL-18的CRC HCT-116细胞株HCT-116/IL-18,CCK-8法检测HCT-116/IL-18细胞与野生型HCT-116细胞的增殖,Western blotting检测两组细胞内IL-18、Cyclin D1、增殖细胞核抗原(PCNA)、DNA损伤修复酶(PARP)蛋白的表达。将HCT-116、HCT-116/IL-18细胞分别接种于裸鼠左右两侧腋下,观察成瘤性及移植瘤的生长情况,免疫组化法检测移植瘤组织中IL-18及PCNA的表达。结果:IL-18基因在HCT-116细胞内过表达,可延缓HCT-116的增殖(P<0.05或P<0.01);与HCT-116细胞相比,HCT-116/IL-18细胞内PARP表达明显增强,PCNA、Cyclin D1表达减弱(P<0.01)。HCT-116/IL-18细胞系在裸鼠体内成瘤率明显降低,成瘤率为43%,与对照组比较其移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小,且HCT-116/IL-18异种移植瘤PCNA蛋白表达下调(P<0.01)。结论:过表达IL-18基因对HCT-116细胞生长增殖具有抑制作用,其机制可能与IL-18调控细胞周期和促进DNA损伤有关。

关键词：结直肠癌白介素-18 细胞增殖移植瘤

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PD-1抗体增强奥沙利铂体内外抗结肠癌的效果

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中国肿瘤生物治疗杂志 2018年第10期25卷 999-1005页

作者：钟根深孙智洋陈亚楠许芝山杨如吴敏娜石焕路平新乡医学院第一附属医院肿瘤内二科河南新乡453003 新乡医学院河南省分子诊断和检验医学协同创新中心医学检验学院河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院生命科学技术研究中心河南新乡453003 新乡医学院基础医学院微生物学教研室河南新乡453003 山东大学附属肿瘤医院肿瘤科山东济南250117

目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)联合PD-1抗体对结肠癌的抗肿瘤作用。方法:选用结肠癌细胞系HCT-116和HT-29,用流式细胞术检测细胞中PD-L1的表达。采用T细胞共培养的方法检测OXA预处理HCT-116细胞联合PD-1抗体作用后细胞因子分泌及... 详细信息

目的:探讨奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)联合PD-1抗体对结肠癌的抗肿瘤作用。方法:选用结肠癌细胞系HCT-116和HT-29,用流式细胞术检测细胞中PD-L1的表达。采用T细胞共培养的方法检测OXA预处理HCT-116细胞联合PD-1抗体作用后细胞因子分泌及CD4/CD8亚型变化。建立BALB/c小鼠的结肠癌细胞CT26移植瘤模型,用OXA联合PD-1抗体治疗,评估其抗肿瘤活性;同时采用CD8抗体清除小鼠CD8^+T细胞,评估CD8^+T细胞在OXA抗肿瘤中的作用。结果:OXA能够显著上调结肠癌细胞表面PD-L1的表达。OXA预处理后的结肠癌HCT-116细胞和T细胞共培养后,与单纯培养的T细胞相比,能降低其培养上清中IL-2、IFN-γ和TNF的水平(均P<0.05)及体系中CD4^+记忆性T细胞和CD8^+T_(EMRA)比率(P<0.05)、增加CD4^+(P>0.05)和CD8^+(P<0.05)初始T细胞比率;联合PD-1抗体后,与OXA预处理的HCT-116和T细胞共培养组相比,T细胞培养上清中IFN-γ和IL-10含量(P<0.05)以及CD8^+T_(CM)和T_(EMRA)比率增加(P>0.05)。体内抑瘤实验表明,OXA联合PD-1抗体可以增强其抗肿瘤活性,抑瘤率显著高于单用OXA组和αPD-1组(58.2%vs 25.6%、29.1%,均P<0.05);清除CD8^+T细胞后,OXA的抗肿瘤活性由68.4%下降到46.2%(P<0.05)。结论:OXA联合PD-1抗体具有联合增效的作用,同时CD8^+T细胞在OXA的抗肿瘤活性中具有重要作用。

关键词：奥沙利铂 PD-1抗体结肠癌 CD8^+T细胞

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过表达IL-18的T细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤作用

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基础医学与临床 2017年第9期37卷 1251-1256页

作者：钟根深尤朵陈亚楠杨如许芝山吴敏娜新乡医学院第一附属医院生命科学技术研究中心河南卫辉453100 新乡医学院基础医学院微生物学教研室河南新乡453003

目的探讨IL-18基因过表达的T细胞对胰腺癌细胞系SW1990的杀伤作用。方法用PCR技术构建含IL-18基因的重组慢病毒,HEK293T细胞包装后感染分离培养的人T淋巴细胞,与胰腺癌细胞SW-1990共培养后,检测培养上清中的LDH含量、ELISA检测IL-2和IFN... 详细信息

目的探讨IL-18基因过表达的T细胞对胰腺癌细胞系SW1990的杀伤作用。方法用PCR技术构建含IL-18基因的重组慢病毒,HEK293T细胞包装后感染分离培养的人T淋巴细胞,与胰腺癌细胞SW-1990共培养后,检测培养上清中的LDH含量、ELISA检测IL-2和IFN-γ的含量,以间接评估其对SW-1990细胞体外的杀伤作用。结果成功构建和包装了人IL-18的重组慢病毒,感染人T淋巴细胞后,在与人胰腺癌细胞SW-1990共培养条件下,与空白对照组相比,LDH的释放显著增多(P<0.01);IL-2和IFN-γ的分泌亦显著增多(P<0.01)。结论过表达人IL-18蛋白的T淋巴细胞对胰腺癌细胞SW-1990具有更强的杀伤作用。

关键词：胰腺癌 IL-18 T淋巴细胞

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影响TRIzol提取RNA质量的因素分析

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新乡医学院学报 2016年第8期33卷 653-656,661页

作者：李照熙杨瑞靳树胜张攀王天云新乡医学院三全学院基础医学院河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术学院合成生物学改造工程与应用实验室河南新乡453003 新乡医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室河南新乡453003

目的使用TRIzol法提取RNA,分析在不同种类、不同浓度试剂残留时RNA的吸光度及曲线变化,以阐明影响RNA纯度的因素。方法使用TRIzol试剂提取杜氏盐藻中RNA,经酚、氯仿、异戊醇抽提,醋酸钠和乙醇沉淀、纯化后制成标准品,与不同浓度的酚、TR... 详细信息

目的使用TRIzol法提取RNA,分析在不同种类、不同浓度试剂残留时RNA的吸光度及曲线变化,以阐明影响RNA纯度的因素。方法使用TRIzol试剂提取杜氏盐藻中RNA,经酚、氯仿、异戊醇抽提,醋酸钠和乙醇沉淀、纯化后制成标准品,与不同浓度的酚、TRIzol、氯仿、乙醇、牛血清白蛋白(BSA)等量混匀后制成待测定溶液,使用Nano Drop 2000测定其在230、260、280 nm处的吸光度,计算比值并观察其吸收曲线。结果在不同浓度的酚和TRIzol及0.5 g·L-1BSA残留时,RNA的吸光度比值与吸收曲线均有较明显的变化;高浓度的氯仿残留时其吸光度与吸收曲线的变化较低浓度的变化明显;高浓度的乙醇残留对RNA溶液的吸光度及曲线影响较小,而低浓度的残留反而有较大影响。结论根据RNA溶液的吸光度比值及曲线共同分析可快速准确判断影响RNA质量的残留试剂。

关键词：杜氏盐藻核糖核酸吸光度

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体外转染CyclinA2基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响

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解剖学报 2015年第1期46卷 57-62页

作者：卢杏张进忠郭志坤常玉巧贾银明徐振平新乡医学院生命科学技术学院新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 安阳市中医院心内科河南安阳455000 河南医学高等专科学校基础医学部生物学教研室郑州451191

目的探讨体外转染细胞周期素A2（Cyclin A2）基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组：转染带有强化绿色荧光蛋白（GFP）和Cyclin A2基因的重... 详细信息

目的探讨体外转染细胞周期素A2（Cyclin A2）基因对原代大鼠心肌细胞增殖的影响,为心脏再生提供细胞学依据。方法 SD乳鼠12只,分离、培养、鉴定原代乳鼠心肌细胞并分为3组,实验组：转染带有强化绿色荧光蛋白（GFP）和Cyclin A2基因的重组腺病毒（Ad-Cyclin A2-GFP）;空病毒组：转染不含目的基因带有GFP的重组腺病毒（Ad-Null-GFP）;阴性对照组：未做转染处理,仅加入等量的培养基。利用GFP示踪技术,评估原代心肌细胞转染效率;转染后的细胞继续体外培养3～5d,利用免疫荧光技术分别检测Cyclin A2、磷酸化组蛋白H3（H3P）、心肌肌钙蛋白-T（c Tn T）。结果 1.荧光GFP示踪表明原代心肌细胞的转染效率高达（97±0.74）%;2.免疫荧光标记显示,空病毒组和对照组结果相似;心肌细胞特异性标记蛋白c Tn T分布于细胞质,原代心肌细胞纯度高达（95±0.62）%;心肌细胞Cyclin A2主要在胞核内聚集,少数分布于细胞质。H3P为核蛋白在细胞核内分布。3.转染Cyclin A2后,实验组H3P阳性率明显高于空病毒组和对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;实验组可见大量多核细胞,以双核为主,伴少量3核细胞。结论腺病毒作为转染载体对原代心肌细胞有很好的侵染效率;Cyclin A2超表达促进原代心肌细胞形成双核。

关键词： Cyclin A2 心肌细胞增殖基因转染免疫荧光大鼠

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内皮细胞在感染性休克炎症性细胞因子释放中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第9期32卷 803-807页

作者：黄青松王树芳孙启蒙赵晓楠牛艳华聂慧岩魏小辉牛志国新乡医学院微生物学教研室 453003 生命科学技术系临床医学系免疫学教研室

目的以感染性休克患者血清刺激人原代内皮细胞（HPAEC）和外周血单个核细胞（PBMC），观察内皮细胞在感染性休克细胞因子释放中的作用。方法采用密度梯度离心法分离健康人PBMC；RT-PCR及免疫印迹检测HPAEC细胞表面标志CDl44和血管假性... 详细信息

目的以感染性休克患者血清刺激人原代内皮细胞（HPAEC）和外周血单个核细胞（PBMC），观察内皮细胞在感染性休克细胞因子释放中的作用。方法采用密度梯度离心法分离健康人PBMC；RT-PCR及免疫印迹检测HPAEC细胞表面标志CDl44和血管假性血友病因子（*** factor，vWF）的表达；ELISA检测感染性休克患者和健康对照者血清中的IL-6、TNF-α、MCP-1的水平；两种血清及LPS刺激HPAEC和PBMC后，ELISA检测培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1的水平；流式细胞技术检测休克患者血清和LPS刺激后HPAEC膜表面ICAM-1的表达；S1P1受体激动剂CYM-Sd42预处理后，休克血清刺激HPAEC培养上清中IL-6、TNF-α、MCP-1的水平。结果HPAEC表达内皮细胞标志性分子CDl44和vWF；感染性休克患者血清中炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1水平明显高于健康对照（P〈0．01）；休克血清和LPS处理PBMC和HPAEC后，相对于对照组，均有明显升高（P〈0．01）；PBMC的休克组炎症因子与PBMC的LPS组均无明显差异（P〉0．05），而HPAEC的休克组炎症因子相对于HPAEC的LPS组均明显升高（P〈0．01）；同样地，LPS刺激两种细胞后，HPAEC的IL-6、TNF-α明显低于PBMC（P〈0．01），MCP-1的水平无明显变化（P〉0．05），但是休克血清刺激后，HPAEC的IL-6、TNF-α与PBMC无明显变化（P〉0．05），MCP-1则明显升高（P〈0．01）；休克患者血清刺激S1P1受体特异性激动剂CYM-5442预处理的HPAEC后，培养上清中炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1水平明显降低（P〈0．01）。结论内皮细胞在感染性休克细胞因子释放中起着关键作用。

关键词：感染性休克内皮细胞外周血单个核细胞细胞因子

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长期铅暴露对小鼠胸腺细胞移行相关趋化性细胞因子受体的影响

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环境与健康杂志 2012年第3期29卷 219-221页

作者：黄青松王树芳孙启蒙赵晓楠牛艳华聂慧岩牛志国新乡医学院微生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术系新乡医学院临床医学系新乡医学院免疫学教研室

目的探讨铅暴露对小鼠胸腺细胞胸腺内迁移相关趋化性细胞因子受体的影响。方法将48只健康初断乳21日龄清洁级SD小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低(200 mg/L)、中(400 mg/L)、高(800 mg/L)剂量乙酸铅染毒组,每组12只,雌雄各半。... 详细信息

目的探讨铅暴露对小鼠胸腺细胞胸腺内迁移相关趋化性细胞因子受体的影响。方法将48只健康初断乳21日龄清洁级SD小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和低(200 mg/L)、中(400 mg/L)、高(800 mg/L)剂量乙酸铅染毒组,每组12只,雌雄各半。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒12周。染毒结束后,采用石墨炉原子吸收法检测血清、胸腺中的铅含量,采用流式细胞技术检测小鼠胸腺细胞趋化因子受体CXCR4、CCR5、CCR9的表达。结果与对照组比较,各剂量乙酸铅染毒组小鼠血清、胸腺铅含量以及小鼠胸腺细胞膜分子CXCR4、CCR5、CCR9的表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着乙酸铅染毒剂量的升高,小鼠血清、胸腺铅含量以及小鼠胸腺细胞膜分子CXCR4、CCR5、CCR9的表达呈上升趋势。结论趋化性细胞因子受体参与长期铅暴露小鼠胸腺的免疫损伤。

关键词：金属重铅胸腺细胞趋化因子受体

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MAR介导的非病毒附着体载体的研究进展

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生物技术通报 2012年第8期28卷 46-50页

作者：林艳李照熙王芳王天云新乡医学院生物化学与分子生物学教研室新乡453003 新乡医学院生命科学技术系新乡453003

附着体载体可以使外源基因在宿主细胞中不整合到基因组上而是以附着体的形式存在,是一种新型的高效、安全、附着体表达载体。目前研究较多的是由S/MAR(Scaffold/Matrix Attachment Region,S/MAR)元件介导的质粒。虽然此类载体均能介导... 详细信息

附着体载体可以使外源基因在宿主细胞中不整合到基因组上而是以附着体的形式存在,是一种新型的高效、安全、附着体表达载体。目前研究较多的是由S/MAR(Scaffold/Matrix Attachment Region,S/MAR)元件介导的质粒。虽然此类载体均能介导载体附着存在,但是转基因的表达量不同。最近研究发现,载体的启动子、骨架结构、CpG基序以及表达系统等方面能够影响转基因的表达,针对以上内容作一综述,希望据此进一步优化载体,为临床研究提供基础依据。

关键词：核基质附着区转基因表达附着体载体启动子骨架结构 CpG基序

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酶工程课程教学模式改革的探索与实践

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新乡医学院学报 2012年第1期29卷 77-78,80页

作者：高启禹张文博李小英李延兰刘涌涛新乡医学院生命科学技术系医用生物学教研室河南新乡453003

酶工程作为一门应用科学,在生命科学领域占据着极其重要的地位,如何使生物技术专业的酶工程教学满足时代发展的要求,培养合格的从事酶工程研究及生产的技术人才,使酶的应用与研究开发得到进一步拓展,是酶工程教学的首要任务。本文旨在... 详细信息

酶工程作为一门应用科学,在生命科学领域占据着极其重要的地位,如何使生物技术专业的酶工程教学满足时代发展的要求,培养合格的从事酶工程研究及生产的技术人才,使酶的应用与研究开发得到进一步拓展,是酶工程教学的首要任务。本文旨在探讨新的教学模式,发展新的教学方法,为进一步培养高素质科技人才提供保证。

关键词：酶工程教学改革教学模式

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一种简单的哺乳动物细胞附着体质粒CaCl_2转化方法

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生物技术通讯 2012年第4期23卷 584-588,620页

作者：林艳李照熙王芳王天云新乡医学院生物化学与分子生物学教研室河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术系河南新乡453003

目的:建立一种简单经济的哺乳动物细胞附着体质粒还原实验方法。方法:构建附着体载体,转染中国卵巢仓鼠(CHO)细胞和小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a,利用改良的赫特裂解法提取附着体质粒,CaCl2法转化附着质粒至宿主菌大肠杆菌DH5α,再次从DH5... 详细信息

目的:建立一种简单经济的哺乳动物细胞附着体质粒还原实验方法。方法:构建附着体载体,转染中国卵巢仓鼠(CHO)细胞和小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a,利用改良的赫特裂解法提取附着体质粒,CaCl2法转化附着质粒至宿主菌大肠杆菌DH5α,再次从DH5α中提取质粒,将转染前后质粒用KpnⅠ/BamHⅠ双酶切和BamHⅠ单酶切,并将转染前后的质粒进行DNA测序分析。结果:与最初转染的质粒相比,还原质粒双酶切和单酶切后的条带大小一致;DNA测序分析表明,转染前后质粒中的插入序列相同。结论:建立了可用于质粒还原实验的简单的CaCl2转化方法。

关键词：真核细胞质粒还原实验 CaCl2转化法附着质粒

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