目的骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)可诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大,为进一步寻求其调控机制,文中探讨细胞自噬在心肌肥大中的作用及其与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulating kinase,ERK1/2)的相互关系...
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目的骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)可诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大,为进一步寻求其调控机制,文中探讨细胞自噬在心肌肥大中的作用及其与细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulating kinase,ERK1/2)的相互关系。方法将H9C2心肌细胞随机分为4组:对照组、BMP4组、BMP4+ERK1/2信号通路抑制剂(PD98059)组、BMP4+自噬抑制剂(3MA)组,PD98059与3MA终浓度分别为50μmol/L与5 mmol/L,阻断30 min后加入浓度为50μg/L的BMP4。各组继续培养30 min后提取总蛋白分别检测微管相关蛋白1轻链3(tiny tubes related proteins 1 light chain 3,LC3)与pERK1/2的表达;48h后观察细胞表面积、平均蛋白含量、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白表达水平。在倒置显微镜下观察细胞的形态,用Image J软件测量细胞表面积,BCA法测细胞总蛋白含量、Western blot检测LC3、ERK1/2、p-ERK1/2及α-SMA的蛋白表达。结果 30 min后,与对照组相比,BMP4组LC3、p-ERK1/2蛋白表达均显著增强[(1.54±0.05)vs(1.95±0.11),(0.94±0.04)vs(1.33±0.06),P<0.01],BMP4+3MA组及BMP4+PD98059组均无明显变化(P>0.05);与BMP4组相比,BMP4+PD98059组、BMP4+3MA组LC3表达与p-ERK1/2均显著降低(P<0.01);而BMP4+PD98059组与BMP4+3MA组比较表达均无明显变化(P>0.05)。48 h后,与对照组相比,BMP4组细胞表面积、平均蛋白含量、α-SMA的蛋白表达水平均显著增加[(644.1±15.01)μm2vs(745.6±14.43)μm2,(240.0±7.26)pg/cell vs(347.1±5.4)pg/cell,(1.22±0.06 vs 1.99±0.03),P<0.01];与BMP4组相比,BMP4+PD98059组、BMP4+3MA组细胞面积、平均蛋白含量、α-SMA的蛋白表达水平均显著减少(P<0.01),而BMP4+PD98059组与BMP4+3MA组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论细胞自噬可能通过ERK1/2信号通路参与了BMP4促大鼠H9C2心肌细胞肥大,阻断细胞自噬或ERK1/2信号通路的激活,可能对心肌肥大有治疗作用。
目的心肌肥大的刺激因素及发生机制尚不完全明确,文中旨在探讨骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)通过激活细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulating kinase,ERK1/2)诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大的机制。方法培养...
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目的心肌肥大的刺激因素及发生机制尚不完全明确,文中旨在探讨骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)通过激活细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulating kinase,ERK1/2)诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大的机制。方法培养大鼠H9C2心肌细胞。首先建立BMP4诱导的大鼠H9C2心肌细胞肥大模型,随机将细胞分为对照A组、BMP4 A组、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)组,培养48 h;其次,观察以50μg/L的BMP4作用不同时间(0、10、30、60、120 min)及以不同浓度(0、10、50、100μg/L)的BMP4作用30 min后大鼠H9C2心肌细胞ERK1/2蛋白磷酸化(p-ERK1/2)表达的变化,分别记为0、10、30、60、120 min组及0、10、50、100μg/L组;最后,深入观察阻断ERKl/2信号通路后H9C2心肌细胞的变化,随机将细胞分为对照B组、BMP4 B组、BMP4+PD98059组、PD98059组,PD98059终浓度50×10-6mol/L阻断30 min后加入BMP4(50μg/L)继续培养48 h。倒置显微镜观察细胞形态大小,Image J软件测量细胞面积,BCA法测细胞总蛋白含量,Western blot检测p-ERK1/2及心肌细胞肥大标志物脑钠尿肽(brain natriuretic factor or peptide,BNP)的表达。结果对照A组、BMP4 A组、AngⅡ组心肌细胞面积[(649.74±2.03)、(744.85±1.31)、(748.39±1.54)μm2],蛋白含量[(243.18±3.69)、(340.09±2.14)、(347.43±3.30)pg/cell]、BNP蛋白表达水平[(0.72±0.44)、(0.96±0.55)、(1.07±0.55)/GAPDH]逐渐升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。BMP4干预心肌细胞后p-ERK1/2表达随时间出现先升高后下降的变化,30 min时达到高峰。30 min p-ERK1/2蛋白磷酸化表达明显高于0、60、120 min组(P<0.01),亦高于10 min组(P<0.05);BMP4不同浓度干预心肌细胞,p-ERK1/2蛋白磷酸化表达随BMP4干预浓度增加而增大,50μg/L组p-ERK1/2蛋白磷酸化表达明显高于0、10μg/L组,并低于100μg/L组(P<0.01)。BMP4+PD98059组H9C2心肌细胞面积、蛋白含量、灰度值显著低于BMP4 B组[(650.49±1.28)μm2vs(746.04±1.45)μm2,(244.06±3.48)pg/cell vs(343.57±4.11)pg/cell,(0.55±0.15)/GAPDH vs(0.79±0.55)/GAPDH,P<0.01]。结论 BMP4可能通过激活ERK1/2信号通路诱导大鼠H9C2心肌细胞肥大;早期阻断ERK1/2的激活,可能对治疗心肌肥大有临床裨益。
目的探讨参附注射液联合磷酸肌酸钠治疗扩张型心肌病心功能不全患者的临床疗效。方法选取2014年1月—2015年6月的72例扩张型心肌病合并心功能不全患者为研究对象行回顾性分析,按照治疗方法的不同分为A组(36例)和B组(36例)。两组均进行常规抗心力衰竭治疗,A组进行参附注射液联合磷酸肌酸钠治疗,B组静脉滴注磷酸肌酸钠治疗。分别于治疗前、治疗后14 d观察两组的心功能分级、测定6 min步行试验(6 minute walk test,6MWT)、进行明尼苏达心力衰竭生活质量问卷(Minnesota living with heart failure questionaire,MLHFQ)、血清B型利钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)水平、左心室收缩功能相关参数,并统计用药过程中的不良反应情况。结果两组患者治疗后14 d临床症状均好转,但A组总有效率高于B组(P<0.05);6MWT距离和射血分数高于B组(P<0.05);MLHFQ评分、血清BNP和左心室收缩末期及舒张末期内径水平低于B组(P<0.05)。且无明显不良反应。结论扩张型心肌病合并心功能不全患者应用参附注射液和磷酸肌酸钠联合治疗,可以安全、有效地改善患者的临床症状,提高生活质量。
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