检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2013年第4期29卷 412-415页

作者：杨慈清李小英付苏雷李晗林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:阐明鸡胚发育过程视顶盖层的组织学结构,神经元迁移的模式及神经丝蛋白的分布特点。方法:鸡胚正常培养到第3天(E3),采用鸡胚带壳开窗培养方法,取出3～4 ml蛋清,开窗培养至E5,将质粒pCAGGS-GFP通过活体原位电转基因技术导入视顶盖,... 详细信息

目的:阐明鸡胚发育过程视顶盖层的组织学结构,神经元迁移的模式及神经丝蛋白的分布特点。方法:鸡胚正常培养到第3天(E3),采用鸡胚带壳开窗培养方法,取出3～4 ml蛋清,开窗培养至E5,将质粒pCAGGS-GFP通过活体原位电转基因技术导入视顶盖,电转后继续培养到胚胎发育的E8～E12,取材、固定、包埋、切片后进行荧光免疫组化分析不同时期各层结构的形成和神经丝蛋白的分布。结果:在鸡胚发育过程,视顶盖从内向外最终共形成6层结构,大部分神经元垂直于视顶盖平面迁移至视神经纤维层终止,部分细胞沿视神经纤维层继续水平迁移,在中央灰质层(SGC)层,细胞迁移复杂,既存在纵向也存在横向迁移模式,NF的表达具有明显层的特点。结论:鸡胚发育过程视顶盖神经元不但存在从内向外垂直迁移的模式,而且还存在水平横向迁移的模式。

关键词：胚胎发育视顶盖神经丝蛋白神经元迁移

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胶原支架上体外三维培养成年大鼠心肌细胞

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中国组织工程研究 2013年第16期17卷 2961-2967页

作者：王慧玲李琼郭志坤孙永琨 Kuboki Y 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南省新乡市453003 日本北海道大学

背景:前期研究中已经在Atelocollagen胶原支架培养出了具有收缩功能的乳鼠心肌细胞。目的:在Atelocollagen胶原支架上三维培养成年大鼠心肌细胞。方法:将成年SD大鼠心肌细胞经消化培养并纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维... 详细信息

背景:前期研究中已经在Atelocollagen胶原支架培养出了具有收缩功能的乳鼠心肌细胞。目的:在Atelocollagen胶原支架上三维培养成年大鼠心肌细胞。方法:将成年SD大鼠心肌细胞经消化培养并纯化后,种植到Atelocollagen胶原支架上进行三维培养。应用倒置显微镜动态观察心肌细胞在Atelocollagen胶原支架上的生长状况;对三维培养的心肌细胞块进行冰冻切片,分别进行肌钙蛋白免疫组织化学和免疫荧光显色,对支架上生长的细胞进行鉴定。结果与结论:成年SD大鼠心肌细胞接种12h开始贴附支架生长,24h与支架汇合、紧密黏附,但心肌细胞并不产生自律性搏动,细胞之间夹杂少量崩解的细胞碎片;48h换液后支架网孔中崩解的细胞被换掉,剩下大部分细胞贴附在支架壁边缘生长。苏木精-伊红染色显示培养48h细胞与支架形成复合体。形态学鉴定证明支架网孔中生长的主要是心肌细胞。免疫组织化学和免疫荧光显色均显示在支架内生长的大部分是心肌细胞,并且紧贴支架,生长良好。

关键词：生物材料细胞外基质材料胶原支架心肌细胞三维培养免疫组织化学免疫荧光成年大鼠省级基金

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骨科修复重建中医用钛网的应用

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中国组织工程研究 2013年第12期17卷 2233-2240页

作者：宋君涛郭志坤新乡医学院第三附属医院河南省新乡市453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南省新乡市453003

背景:钛网在骨科修复重建治疗中效果良好,已得到广泛的应用。目的:探讨钛网在颅骨缺损、四肢骨缺损、大块胸壁缺损、掌指骨骨折及颌面部骨折等相关骨科疾病应用中的可靠性及优越性。方法:收集钛网在颌面骨缺损、大块胸壁缺损、颅骨缺损... 详细信息

背景:钛网在骨科修复重建治疗中效果良好,已得到广泛的应用。目的:探讨钛网在颅骨缺损、四肢骨缺损、大块胸壁缺损、掌指骨骨折及颌面部骨折等相关骨科疾病应用中的可靠性及优越性。方法:收集钛网在颌面骨缺损、大块胸壁缺损、颅骨缺损、四肢长骨干骨缺损、掌指骨折等骨科疾病修复重建的临床研究及相关实验研究,评价钛网治疗骨科疾病的效果。结果与结论:与其他修复材料相比,钛网在骨科修复重建中有明显的优越性,但作为重建材料尚有一定的缺点,如X射线透光性差等。因此,在骨科应用中应针对不同部位的缺损采用不同的操作方法,以减少并发症的发生和达到更好的修复重建效果。

关键词：生物材料生物材料学术探讨钛金属钛网骨科骨缺损骨折颅骨缺损面部骨折粉碎性骨折修复并发症腰椎术后综合征胸壁缺损胸壁肿瘤人工材料

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小鼠脂肪间充质干细胞体外培养时间与细胞衰老关系初探

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中国免疫学杂志 2013年第10期29卷 1028-1032页

作者：李琼左红波张珉李慈霞郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 河南省肿瘤医院肝胆外科郑州450000

目的:探讨脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)体外培养时间与细胞衰老之间的关系,为细胞治疗提供实验参考。方法:分离、培养小鼠ADMSCs,MTT法绘制细胞生长曲线;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测第1至第1... 详细信息

目的:探讨脂肪间充质干细胞(Adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)体外培养时间与细胞衰老之间的关系,为细胞治疗提供实验参考。方法:分离、培养小鼠ADMSCs,MTT法绘制细胞生长曲线;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测第1至第10代ADMSCs以及第4代细胞培养第1至第8天细胞的衰老情况;流式细胞术检测细胞周期变化;电镜观测第3和第8代细胞的超微结构。结果:衰老ADMSCs胞浆呈蓝色,随着代次增加细胞衰老率升高,第8代开始高于第1代细胞(P<0.05),并且G0/G1期细胞所占比例升高,S期和G2/M期细胞所占比例明显降低,提示细胞分裂增殖速度减慢;相同代次细胞,随着培养天数增加细胞衰老率呈上升趋势,第4天开始细胞的衰老比率明显高于第1天(P<0.05)。随着细胞代次增加,细胞膜出现较多突起,且胞质内脂滴增多,出现自噬体。结论:ADMSCs细胞衰老率与体外培养时间正相关。

关键词：脂肪间充质干细胞细胞衰老超微结构

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3种诱导法诱导CD73^+脂肪间充质干细胞成心肌细胞效果的比较

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解剖学报 2013年第3期44卷 339-344页

作者：齐立杰郭康李琼郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室第三附属医院肿瘤科河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430000

目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚... 详细信息

目的从脂肪来源的间充质干细胞(ADMSCs)的混合细胞群中分离纯化出CD73阳性的细胞亚群,证明几种不同诱导法诱导CD73细胞的成心肌分化潜能。方法体外分离培养1～3月龄小鼠的ADMSCs,利用流式细胞仪从ADMSCs中分选出CD73+和CD73-两个细胞亚群。分别培养两组细胞,利用5-氮杂胞苷(5-aza)、心肌组织裂解液和5-aza+心肌组织裂解液对两组分选出的细胞分别进行成心肌的诱导。利用免疫细胞化学技术检测3种诱导法的成心肌效果。结果未分选的ADMSCs可分化为成脂和成骨细胞,分选的CD73+细胞具备分化为心肌细胞的良好潜能。3种诱导法均能诱导CD73+ADMSCs向心肌方向分化,5-aza诱导CD73+ADMSCs分化为心肌细胞率为(22.99±6.72)%,心肌组织裂解液组心肌细胞率(14.12±5.42)%,5-aza+心肌组织裂解液组心肌细胞率(26.94±6.11)%。3种方法比较,5-aza+心肌组织裂解液的诱导效果最佳(P<0.05)。结论 CD73+比CD73-的ADMSCs更易于分化为心肌细胞。化学诱导因素和体外模拟心肌微环境,可高效诱导脂肪间充质干细胞分化为心肌细胞。

关键词： CD73 5-氮杂胞苷心肌组织裂解液脂肪源间充质干细胞细胞培养免疫荧光小鼠

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瘤内注射吉西他滨治疗大鼠脑胶质瘤的效果观察

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肿瘤研究与临床 2013年第12期25卷 796-798页

作者：崔爱玲王巍东赵松鹤李春玲贾阿林龚亮胡红伟李甜甜新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室 453003 新乡医学院第三附属医院输血科

目的观察吉西他滨瘤内给药治疗大鼠脑胶质瘤的效果,探讨治疗脑胶质瘤的有效化疗途径及药物.方法 50只SD大鼠随机分为对照组（5只）,肿瘤组和治疗（1 mg/ml）组和治疗（4mg/ml）组,每组15只.除对照组外,所有大鼠均在纹状体部埋植导管,... 详细信息

目的观察吉西他滨瘤内给药治疗大鼠脑胶质瘤的效果,探讨治疗脑胶质瘤的有效化疗途径及药物.方法 50只SD大鼠随机分为对照组（5只）,肿瘤组和治疗（1 mg/ml）组和治疗（4mg/ml）组,每组15只.除对照组外,所有大鼠均在纹状体部埋植导管,并接种9L胶质瘤细胞株以建立在体脑胶质瘤模型.治疗组于植入瘤细胞第9天,通过导管将吉西他滨（10μl,1 mg/ml和4 mg/ ml）分别注入瘤内.于给药第9天,每组随机取脑抽检（5只）,观察瘤形态及大小;余者（每组10只）观察其饮食、行为、体质量及存活期,评价吉西他滨对大鼠脑胶质瘤的治疗效果.结果于瘤内注入吉西他滨第9天取脑,发现各组肿瘤大小分别为：肿瘤组（44.69±7.52） mm3、治疗（1 mg/ml）组（22.44±5.37） mm3和治疗（4 mg/ml）组（18.72±7.13）mm3,肿瘤组与两治疗组间差异有统计学意义（P＜0.05）,但两治疗组之间差异无统计学意义（P＞0.05）.治疗组大鼠体质量下降较肿瘤组为轻.肿瘤组平均存活期为23.8d.4 mg/ml组1只存活期比肿瘤组短,剩余4只及全部1 mg/ml组（10只）均长于肿瘤组.结论吉西他滨可抑制脑胶质瘤生长,缓解大鼠体质量下降,延长模型动物存活期,对大鼠脑胶质瘤具有抑制作用.

关键词：神经胶质瘤吉西他滨药物疗法瘤内投药大鼠

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兔脂肪来源间充质干细胞的生物表型及其心肌样细胞的分化潜能

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解剖学报 2013年第1期44卷 55-61页

作者：闫小宾李琼郭志坤齐立杰罗欢欢李和新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 华中科技大学同济医学院人体解剖学与组织学胚胎学系武汉430030

目的鉴定兔脂肪来源间充质干细胞(ADMSCs)的生物学表型及其向心肌细胞分化的潜能。方法成年兔肩胛区皮下脂肪组织经消化、培养,观察其形态变化。第3代细胞进行CD29、CD34、CD44、CD105免疫细胞化学显色、免疫荧光单标、双标及三标显色... 详细信息

目的鉴定兔脂肪来源间充质干细胞(ADMSCs)的生物学表型及其向心肌细胞分化的潜能。方法成年兔肩胛区皮下脂肪组织经消化、培养,观察其形态变化。第3代细胞进行CD29、CD34、CD44、CD105免疫细胞化学显色、免疫荧光单标、双标及三标显色。5-氮杂胞苷(5-aza)诱导ADMSCs 7d,免疫组织化学和免疫荧光技术显示肌钙蛋白-I(Troponin-I)和肌球蛋白重链(MHC)表达。光学显微镜和激光扫描共焦显微镜观察并计数。结果ADMSCs开始为圆形,后逐渐伸展,呈现形态多样性。90%以上的第3代细胞阳性表达CD29、CD44、CD105,三者共表达于胞质中。CD34阴性表达。CD分子表达阳性的细胞70.59%±1.26%表达Troponin-I,71.98%±1.13%表达MHC。结论 90%以上的ADMSCs共表达干细胞表面标记CD29、CD44、CD105,它们具有很强的分化为心肌样细胞的潜能。

关键词： CD分子生物表型脂肪来源间充质干细胞心肌样细胞免疫组织化学新西兰白兔

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鸡胚视顶发育过程中神经元增殖、迁移和分层形成的规律

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解剖学杂志 2013年第2期36卷 177-180页

作者：杨慈清杜蕊张学乾林俊堂赵善廷西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的：采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记鸡胚发育过程中视顶新生神经元，阐明鸡胚发育过程中视顶盖神经元增殖、迁移规律。方法：采用鸡胚开窗带壳培养的方式，在培养过程中，分别在胚胎发育的第E4天至E18．5d滴加1mg／ml浓度的BrdU... 详细信息

目的：采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记鸡胚发育过程中视顶新生神经元，阐明鸡胚发育过程中视顶盖神经元增殖、迁移规律。方法：采用鸡胚开窗带壳培养的方式，在培养过程中，分别在胚胎发育的第E4天至E18．5d滴加1mg／ml浓度的BrdU各10肛l，每组5个胚胎，滴加BrdU后密封开口，继续培养，当培养到胚胎发育的E18．5d时，取材、甲醛固定、震荡切片，采用硫堇染色，观察视顶盖层的结构，免疫组织化学显示BrdU标记的新生细胞；显微拍照，分析不同时期表面灰质纤维层增殖细胞的数量、总面积、灰度平均值、平均光密度和平均积分光密度等参数，综合分析各阶段新生神经元的差异。结果：鸡胚视顶结构通过硫堇染色可以明显分成6层，在胚胎发育的E4d-8d是细胞大量增殖阶段，新生细胞数明显高于其他阶段；新生细胞在胚胎发育的E12d后明显减少。结论：鸡胚发育过程中，视顶从胚胎发育的E4d开始到E12d时，6层结构已经基本形成，新生神经元E12d后明显减少，其视顶盖6层结构的形成规律是从内向外。

关键词：鸡胚 5-溴脱氧尿嘧啶核苷视顶盖增殖神经元迁移

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N-Cadherin异常表达对293T细胞形态结构及连环蛋白表达的影响

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中国免疫学杂志 2013年第9期29卷 914-917页

作者：李小英杨慈清范义峰贾阳阳付苏雷胡阿珍李晗林俊堂新乡医学院生命科学技术学院新乡453003 河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 新乡市驼人医疗器械有限公司新乡453400

目的:实现鸡源N-Cadherin在293T细胞中的过表达及其抑制表达,进一步分析N-Cadherin异常表达对293T细胞内源性β-catenin和α-catenin的表达及细胞形态结构的影响。方法:采用脂质体转染法,设对照、过表达和抑制表达3组,将pCAGGS-GFP、pCA... 详细信息

目的:实现鸡源N-Cadherin在293T细胞中的过表达及其抑制表达,进一步分析N-Cadherin异常表达对293T细胞内源性β-catenin和α-catenin的表达及细胞形态结构的影响。方法:采用脂质体转染法,设对照、过表达和抑制表达3组,将pCAGGS-GFP、pCAGGS-N-Cadherin和pCAGGS-N-Cadherin/pGPU6-GFP-neo-N-Cadherin-shRNA质粒分别转染到293T细胞中,转染后48小时观察拍照,荧光免疫组化检测N-Cadherin和相关蛋白表达情况。结果:N-Cadherin过表达后会改变293T细胞的形态,其细胞突起明显增加,而对N-Cadherin干扰后,突起又会消失,并且外源性N-Cadherin的过表达会使得293T细胞内源性β-catenin和α-catenin的表达升高,抑制其表达β-catenin和α-catenin表达也随之减弱,并表现出β-catenin在核内的聚集。结论:异源性N-Cadherin的表达明显改变293T细胞的形态,并且内源性β-catenin和α-catenin的表达与N-Cadherin的表达呈正相关。

关键词： 293T细胞神经钙黏蛋白 RNA干扰 β-连环蛋白 α-连环蛋白

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小鼠子宫内电转基因方法的建立

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解剖学杂志 2013年第2期36卷 170-172,F0004页

作者：杨慈清李小英卢习付苏雷赵善廷林俊堂新乡医学院生命科学技术学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003 西北农林科技大学动物医学院杨凌712100

目的：建立小鼠子宫内电转基因技术，比较分析转染绿色荧光蛋白（GFP）后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响。方法：将怀孕15d的小鼠，水合氯醛麻醉后，取出两侧子宫，用毛细管注射针将2μg／μl的pCAGGS-GFP质粒0．5-1μl准确注射到胎鼠... 详细信息

目的：建立小鼠子宫内电转基因技术，比较分析转染绿色荧光蛋白（GFP）后对胚胎发育及相关蛋白表达的影响。方法：将怀孕15d的小鼠，水合氯醛麻醉后，取出两侧子宫，用毛细管注射针将2μg／μl的pCAGGS-GFP质粒0．5-1μl准确注射到胎鼠侧脑室，在电压40V、每次脉冲60ms，间隔940ms，电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因，电转后24h取材，甲醛固定冷冻冠状切片，DAPI染细胞核观察组织形态结构变化，荧光免疫组织化学检测α-SMA的表达差异。结果：妊娠15d孕鼠转染24h后小鼠成活率80％（8／10），胚胎成活率为54．2％（13／24），存活胚胎GFP阳性表达率为61．5％（8／13），GFP阳性表达胚胎脑组织切片，基因转染区域和正常组织区组织形态结构和α-SMA表达不存在差别。结论：成功建立了小鼠子宫内电转基因的方法。

关键词：小鼠转基因方法子宫内电转

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