检索结果-内蒙古大学图书馆

感染．炎症．修复 2013年第1期14卷 3-6,F0002页

作者：鲁刚马奎付小兵解放军医学院北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复与组织再生重点实验室北京100048

目的:探讨脐带间充质干细胞(UCMSC)对创伤后急性肺损伤(ALI)早期的作用。方法:采用撞击后静脉注射脂多糖的二次打击方法复制创伤后ALI家兔模型。24只家兔随机分为正常对照组(正常饲养)、ALI组(复制ALI模型)和UCMSC组(伤前30 min静脉注射... 详细信息

目的:探讨脐带间充质干细胞(UCMSC)对创伤后急性肺损伤(ALI)早期的作用。方法:采用撞击后静脉注射脂多糖的二次打击方法复制创伤后ALI家兔模型。24只家兔随机分为正常对照组(正常饲养)、ALI组(复制ALI模型)和UCMSC组(伤前30 min静脉注射UCMSC 1×10~6个),每组8只。各组动物于伤后0、1.5、3和6 h测定血浆TNF-α含量;伤后6 h测定PaO_2,支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、补体C3a和C5a、白蛋白含量及中性粒细胞计数,肺湿/干重比值(W/D),免疫组织化学法观察肺组织中TNF-α蛋白的表达,光镜下观察肺组织病理学变化。结果:与正常对照组比较,ALI组PaO_2下降,其余各检测指标均明显升高,镜下见肺泡壁破坏,肺泡腔渗出和出血,肺组织TNF-α表达增强。伤前给予UCMSC能提高ALI动物的PaO_2,不同程度降低外周血TNF-α及BALF中TNF-α[(0.72±0.70)μg/L比(1.82±0.60)μg/L]、C3a[(0.28±0.07)μg/L比(0.45±0.03)μg/L]、C5a[(0.08±0.01)μg/L比(0.19±0.03)μg/L]、白蛋白含量[(69.0±9.7)mg/L比(102.0±14.9)mg/L]和中性粒细胞计数[(229.0±21.4)×10^(6/)L比(298.0±36.8)×10^(6/)L],降低肺W/D,抑制肺组织TNF-α蛋白表达,减轻肺泡的损伤程度。结论:UCMSC能减少ALI时组织及血浆TNF-α的含量,减轻肺泡损伤程度,在一定程度上对早期创伤后急性肺损伤起保护作用。

关键词：脐带间充质干细胞肺损伤急性创伤肿瘤坏死因子-α

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大鼠左心室肥厚模型的制备和评价

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解剖学杂志 2012年第1期35卷 114-116页

作者：邢智钰李娜娜蔡新华吕卫锋郭晓洁张凤真新乡医学院新乡453003 新乡医学院组织再生重点开放实验室新乡453003

心脑血管病居我同死因第1位，高血压是冠心病、心肌梗死、脑卒中的主要危险因素之一[1]。而左心室肥厚（1eftventric-ular hypertrophy，LVH）已公认为是发生各种心血管并发症的独立危险因素。最新研究结果表明，LVH增高2倍总病死率增加... 详细信息

心脑血管病居我同死因第1位，高血压是冠心病、心肌梗死、脑卒中的主要危险因素之一[1]。而左心室肥厚（1eftventric-ular hypertrophy，LVH）已公认为是发生各种心血管并发症的独立危险因素。最新研究结果表明，LVH增高2倍总病死率增加2．3倍致死与非致死性心血管病事件。值得注意的是，LVH有相当高的发生率，坐位舒张压在（13．33～15．33）kPa之间的高血压患者中约62％有LVH[2]。

关键词：左心室肥厚独立危险因素高血压患者制备模型大鼠心血管并发症心血管病事件

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肾性高血压模型大鼠左心室壁Ⅰ、Ⅲ型胶原网络重建

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解剖学报 2012年第5期43卷 673-678页

作者：田香勤王琳郭志坤蔡新华邢智钰吕卫锋新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室新乡医学院本科生2008级河南新乡453003

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原分布的变化规律。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,32只SD大鼠随机分为假手术组、术后2周组、术后5周组和术后7周组,利用无创动物血压分析测试仪评价高血压动物模型质量,免... 详细信息

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原分布的变化规律。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,32只SD大鼠随机分为假手术组、术后2周组、术后5周组和术后7周组,利用无创动物血压分析测试仪评价高血压动物模型质量,免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测各组左心室肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。结果与假手术组相比,Ⅰ、Ⅲ型胶原网络在术后2周均无明显变化,术后5周心肌细胞及肌束周围Ⅰ型胶原粗细纤维束呈断裂、聚集或部分缺如。心室壁小动脉管壁Ⅰ型胶原鞘不规整,纤维束断裂,胶原聚集或堆积,血管外膜粗纤维束向间质延伸;术后5周组肌细胞周围Ⅲ型胶原粗、细纤维束均出现严重松散或紊乱;血管壁Ⅲ型胶原鞘呈现松散现象。图像分析结果显示:术后5周组与术后7周组相比,Ⅰ型胶原平均吸光度和平均面积比均存在显著差异(P<0.05);Ⅲ型胶原平均吸光度各组间无显著差异(P>0.05),平均面积比术后2周组与术后5周组之间差异显著(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,手术5周后Ⅰ型胶原蛋白表达量呈增高趋势,Ⅲ型胶原蛋白表达量呈降低趋势。结论高血压可导致左室壁Ⅰ、Ⅲ型胶原网络发生重建或破坏,血管外膜胶原结构严重受损。

关键词： Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原心肌肾性高血压模型免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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应用鸡胚活体电转GFP示踪技术观察脊髓左右两侧神经元纤维投射

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中国免疫学杂志 2012年第8期28卷 718-721页

作者：杨慈清石晓卫胡阿珍贾阳阳郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术系新乡453003 新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室新乡453003

目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每... 详细信息

目的:探索鸡胚发育过程中,脊髓左右侧神经元经纤维之间的联系,为脊髓两侧神经纤维投射提供形态学基础;方法:采用鸡胚带壳开窗培养技术,待胚胎发育至第3天,通过活体电转基因,将pCAGGS-GFP质粒0.1～0.5μl准确注射到脊柱,在电压18 V、每次脉冲60 ms,间隔100 ms,电脉冲6次的条件下进行定时定位活体电转基因,电转后6小时开始到10天,分别收集胚胎,甲醛固定冰冻切片,DAPI染细胞核观察组织形态结构变化。结果:电转后6小时便可以观察到GFP的表达,24小时后可以看到GFP标记细胞纤维的投射,3天可以清晰的观察到转入GFP一侧脊髓的运动神经元纤维束投射到另外一侧脊髓。结论:电转GFP成功标记运动神经元纤维在脊髓左右两侧的投射。

关键词：鸡胚胚胎发育活体电转纤维投射

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不同年龄小鼠脂肪源间充质干细胞体外原代培养衰老和凋亡的变化

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解剖学报 2012年第3期43卷 366-371页

作者：齐立杰李琼郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430000

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组... 详细信息

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化。结果两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致。SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2～7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)%、(4.21±1.22)%、(9.00±0.98)%、(11.20±1.24)%、(9.50±2.19)%和(13.20±2.93)%;24月组分别为(8.67±1.05)%、(10.23±0.98)%、(12.80±0.78)%、(17.10±1.13)%、(19.80±1.59)%和(24.70±1.86)%。PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2～7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11.3±1.63)%;24月组4～7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%。结论老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化。

关键词：脂肪间充质干细胞衰老坏死免疫荧光细胞培养小鼠

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鸡胚培养及活体电转基因方法的建立

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解剖学报 2012年第4期43卷 564-568页

作者：杨慈清毛会丽林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流6... 详细信息

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流60mA、间隔90ms和电脉冲6次(60ms/次)的条件下进行定时定位活体电转基因。结果带壳和去壳培养样本数分别为20个和10个,成活率分别是85%和80%,胚胎发育至2～3 d和5～6 d在脊髓和视顶部位转染样本数分别为11个和10个,阳性表达率为54.5%和60%。结论成功建立和优化了鸡胚培养和活体定时定位电转基因的方法。

关键词：发育培养活体电转鸡胚

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鸡胚活体原位电转基因技术报告基因绿色荧光蛋白质量评估

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解剖学报 2012年第4期43卷 468-472页

作者：杨慈清毛会丽郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒... 详细信息

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒转入带壳培养第3天和第3天去壳培养至第5天的鸡胚,在电转基因24h后荧光体视显微镜观察,选择对照组和阳性表达胚胎,每组各5个胚胎,冷冻切片后进行荧光免疫组织化学检测α-SMA和NF分别在脊髓和视顶部位的表达状况。结果在脊髓和视顶不同发育阶段和转染的不同时间,实验组、对照组及GFP阳性表达区域和正常区域内α-SMA、NF两种蛋白表达不存在差异,胚胎形态结构也不存在差异。结论原位电转GFP在鸡胚发育早期过程中不影响正常基因的表达及鸡胚胎发育形态结构的变化,可以作为报告基因。

关键词：胚胎绿色荧光蛋白 α-平滑肌肌动蛋白神经丝蛋白活体电转鸡

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Bax、NOS在NMDA诱导的兴奋性神经毒中的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2012年第6期30卷 675-677页

作者：宋海岩李娜娜付升旗任铭新新乡医学院人体解剖学教研室、河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神... 详细信息

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神经元细胞随机分为正常组、NMDA组、NG-Nitro-L-arginine Methyl Este(r L-NAME)组,分别采用NO浓度测定、ELISA及Weastern blotting检测各组细胞中NO浓度、NOS的表达及Bax的表达。结果免疫荧光大多数细胞为NSE阳性细胞,L-NAME组中NO浓度、NOS及Bax的表达均高于正常组而低于NMDA组。结论 NO毒性在NMDA诱导的神经细胞凋亡中起重要的作用,其可能是通过上调Bax的表达发挥作用。

关键词：兴奋性神经毒一氧化氮合酶 Bax

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盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠左心室壁心肌细胞和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白变化

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解剖学报 2012年第5期43卷 629-634页

作者：蔡新华赵国安王琳田香勤新乡医学院组织学与胚胎学教研室河南新乡453003 河南省高校组织再生重点开放实验室河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院心内科河南新乡453003

目的探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响。方法成年大鼠42只按4mg/(kg.d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组。利用电子/光学显微镜观察不... 详细信息

目的探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响。方法成年大鼠42只按4mg/(kg.d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组。利用电子/光学显微镜观察不同阶段左心室肌组织结构,免疫组织化学和Western blotting方法检测左心室肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白表达,并利用HAPIS-2000显微图像分析系统和SPSS10.0统计学软件对表达强度和面积百分比进行统计学处理。结果光镜下观察ISO诱导心内膜下出现心肌细胞缺血坏死区。缺血坏死区有Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白高表达,缺血坏死区所占面积百分比有减小趋势,组间比较1周与4周之间差异无统计学意义(P>0.05),4周与8周间差异具有统计学意义(P<0.05);表达强度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。非缺血坏死区心肌细胞早期表现为大量聚集糖原颗粒,后期以线粒体增多,肌原纤维松散为主要特征;免疫组织化学检测间质Ⅰ型胶原蛋白所占面积百分比无变化,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);表达强度实验组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比,表达量减小,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学检测间质Ⅲ型胶原蛋白所占面积百分比呈增多趋势,组间比较,1周与4周间差异具有统计学意义(P<0.05);表达强度稳定,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果显示,实验组间Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白均呈现从增多到减少的趋势,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 ISO长期诱导致心内膜下心肌细胞缺血坏死,且缺血坏死区面积总体趋势变小;缺血坏死区发生纤维化改变,与心壁僵硬度增大相关。非缺血坏死区心肌细胞肥大与能量代谢相关,间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白不参与心室壁僵硬度和顺应性变化。

关键词：盐酸异丙肾上腺素心肌肥大 Ⅰ/Ⅲ型胶原免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为及海马神经元脑源性神经营养因子表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2012年第6期21卷 481-483页

作者：徐辉罗欢欢朱金富 453003新乡新乡医学院心理学系河南省医用组织再生重点实验室

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法... 详细信息

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法对剥夺组进行连续24h的全睡眠剥夺，剥夺干预后随即对各组大鼠进行敞箱实验；免疫组织化学和逆转录聚合链式反应法测海马神经元BDNF表达水平。结果第6，12，18，24天四次行为测试得分显示，剥夺组大鼠的探索行为得分呈现先降低后升高趋势，第24天探索行为得分与抑郁组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化结果显示，与抑郁组[积分光密度：108．53±4．45，阳性面积比：0．0747±0．0262]相比，剥夺组[积分光密度：116．00±5．61，阳性面积比：0．2034±0．0352]大鼠海马神经元BDNF蛋白表达明显增高（尸〈0．05），而与正常组[积分光密度：117．27±10．66，阳性面积比：0．2252±0．1143]相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR结果和免疫组化结果相符。结论睡眠剥夺能改善抑郁模型大鼠的探索行为能力，其机制可能与提高海马组织BDNF的含量有关。

关键词：抑郁症海马脑源性神经营养因子探索行为

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