检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2012年第3期43卷 366-371页

作者：齐立杰李琼郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学教研室武汉430000

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组... 详细信息

目的探讨小鼠脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)体外原代培养过程中衰老和凋亡变化。方法用差速贴壁法对1月和24月龄小鼠(各30只)腹股沟脂肪组织的ADMSCs进行原代培养,免疫荧光技术检测第3代ADMSCs表面抗原CD73、CD90和CD105的表达,比较两组细胞的形态差异和生长情况,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测ADMSCs衰老情况,PI-Hoechst33342双染色观察ADMSCs的凋亡变化。结果两组体外原代培养的ADMSCs均贴壁生长,具有典型干细胞的形态和生长特征,两组ADMSCs CD73、CD90和CD105的表型一致。SA-β-Gal染色显示:原代培养的老年组ADMSCs衰老比例比幼年组多,1月组原代培养2～7d的ADMSCs阳性率分别为(3.87±1.34)%、(4.21±1.22)%、(9.00±0.98)%、(11.20±1.24)%、(9.50±2.19)%和(13.20±2.93)%;24月组分别为(8.67±1.05)%、(10.23±0.98)%、(12.80±0.78)%、(17.10±1.13)%、(19.80±1.59)%和(24.70±1.86)%。PI-Hoechst 33342染液双染显示:1月组原代培养2～7d的ADMSCs凋亡率分别为(22.1±1.4)%、(36.7±1.62)%、(11.7±1.45)%、(38.4±1.57)%、(6.5±1.32)%和(11.3±1.63)%;24月组4～7d的ADMSCs凋亡率分别为(29.4±1.72)%、(37.6±1.64)%、(19.4±1.29)%和(18.9±1.25)%。结论老龄ADMSCs增殖能力下降,衰老、凋亡和坏死的细胞比例增加;随着ADMSCs原代培养时间的延长,其衰老增加,但凋亡和坏死无规律性变化。

关键词：脂肪间充质干细胞衰老坏死免疫荧光细胞培养小鼠

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鸡胚培养及活体电转基因方法的建立

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解剖学报 2012年第4期43卷 564-568页

作者：杨慈清毛会丽林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流6... 详细信息

目的建立和优化鸡胚胎带壳培养(in ovo culture)、去壳培养(ex ovo culture)和活体原位电转基因(in vivo electroporation)等技术。方法鸡胚孵化第2～3天,带壳培养至2～3 d和去壳培养至5～6d,分别在脊髓和大脑视顶部位,在电压18V、电流60mA、间隔90ms和电脉冲6次(60ms/次)的条件下进行定时定位活体电转基因。结果带壳和去壳培养样本数分别为20个和10个,成活率分别是85%和80%,胚胎发育至2～3 d和5～6 d在脊髓和视顶部位转染样本数分别为11个和10个,阳性表达率为54.5%和60%。结论成功建立和优化了鸡胚培养和活体定时定位电转基因的方法。

关键词：发育培养活体电转鸡胚

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鸡胚活体原位电转基因技术报告基因绿色荧光蛋白质量评估

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解剖学报 2012年第4期43卷 468-472页

作者：杨慈清毛会丽郭志坤林俊堂新乡医学院生命科学技术系河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒... 详细信息

目的在成功建立鸡胚活体原位电转基因技术的基础上,探讨报告基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达及其在鸡胚发育过程对胚胎形态结构影响,分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和神经丝蛋白(NF)的表达情况。方法活体原位电转基因技术将pCAGGS-GFP质粒转入带壳培养第3天和第3天去壳培养至第5天的鸡胚,在电转基因24h后荧光体视显微镜观察,选择对照组和阳性表达胚胎,每组各5个胚胎,冷冻切片后进行荧光免疫组织化学检测α-SMA和NF分别在脊髓和视顶部位的表达状况。结果在脊髓和视顶不同发育阶段和转染的不同时间,实验组、对照组及GFP阳性表达区域和正常区域内α-SMA、NF两种蛋白表达不存在差异,胚胎形态结构也不存在差异。结论原位电转GFP在鸡胚发育早期过程中不影响正常基因的表达及鸡胚胎发育形态结构的变化,可以作为报告基因。

关键词：胚胎绿色荧光蛋白 α-平滑肌肌动蛋白神经丝蛋白活体电转鸡

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Bax、NOS在NMDA诱导的兴奋性神经毒中的表达变化

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中国临床解剖学杂志 2012年第6期30卷 675-677页

作者：宋海岩李娜娜付升旗任铭新新乡医学院人体解剖学教研室、河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神... 详细信息

目的探讨一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)及Bax在N-甲基-D-天(门)冬氨酸(N-Methyl-D-Asparate,NMDA)诱导的兴奋性神经毒中的作用及其可能的作用机制。方法原代培养SD新生大鼠皮层神经元,利用免疫荧光方法进行细胞纯度鉴定。神经元细胞随机分为正常组、NMDA组、NG-Nitro-L-arginine Methyl Este(r L-NAME)组,分别采用NO浓度测定、ELISA及Weastern blotting检测各组细胞中NO浓度、NOS的表达及Bax的表达。结果免疫荧光大多数细胞为NSE阳性细胞,L-NAME组中NO浓度、NOS及Bax的表达均高于正常组而低于NMDA组。结论 NO毒性在NMDA诱导的神经细胞凋亡中起重要的作用,其可能是通过上调Bax的表达发挥作用。

关键词：兴奋性神经毒一氧化氮合酶 Bax

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盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠左心室壁心肌细胞和Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白变化

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解剖学报 2012年第5期43卷 629-634页

作者：蔡新华赵国安王琳田香勤新乡医学院组织学与胚胎学教研室河南新乡453003 河南省高校组织再生重点开放实验室河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院心内科河南新乡453003

目的探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响。方法成年大鼠42只按4mg/(kg.d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组。利用电子/光学显微镜观察不... 详细信息

目的探讨盐酸异丙肾上腺素(ISO)长期作用对大鼠左心室心肌细胞和间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的影响。方法成年大鼠42只按4mg/(kg.d)剂量腹膜内注射ISO 1、4和8周,制备心肌缺血SD大鼠模型,用等体积生理盐水作对照组。利用电子/光学显微镜观察不同阶段左心室肌组织结构,免疫组织化学和Western blotting方法检测左心室肌组织Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白表达,并利用HAPIS-2000显微图像分析系统和SPSS10.0统计学软件对表达强度和面积百分比进行统计学处理。结果光镜下观察ISO诱导心内膜下出现心肌细胞缺血坏死区。缺血坏死区有Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白高表达,缺血坏死区所占面积百分比有减小趋势,组间比较1周与4周之间差异无统计学意义(P>0.05),4周与8周间差异具有统计学意义(P<0.05);表达强度组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。非缺血坏死区心肌细胞早期表现为大量聚集糖原颗粒,后期以线粒体增多,肌原纤维松散为主要特征;免疫组织化学检测间质Ⅰ型胶原蛋白所占面积百分比无变化,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);表达强度实验组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但与对照组相比,表达量减小,差异具有统计学意义(P<0.05)。免疫组织化学检测间质Ⅲ型胶原蛋白所占面积百分比呈增多趋势,组间比较,1周与4周间差异具有统计学意义(P<0.05);表达强度稳定,组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果显示,实验组间Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白均呈现从增多到减少的趋势,组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 ISO长期诱导致心内膜下心肌细胞缺血坏死,且缺血坏死区面积总体趋势变小;缺血坏死区发生纤维化改变,与心壁僵硬度增大相关。非缺血坏死区心肌细胞肥大与能量代谢相关,间质Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白不参与心室壁僵硬度和顺应性变化。

关键词：盐酸异丙肾上腺素心肌肥大 Ⅰ/Ⅲ型胶原免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为及海马神经元脑源性神经营养因子表达的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2012年第6期21卷 481-483页

作者：徐辉罗欢欢朱金富 453003新乡新乡医学院心理学系河南省医用组织再生重点实验室

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法... 详细信息

目的研究睡眠剥夺对抑郁样模型大鼠探索行为的影响，并从脑源性神经营养因子（BDNF）的角度探讨其机制。方法30只sD大鼠随机分为正常组、抑郁组和剥夺组，慢性不可预知性刺激法制备抑郁样模型；在第6，12，18，24天运用多平台水环境法对剥夺组进行连续24h的全睡眠剥夺，剥夺干预后随即对各组大鼠进行敞箱实验；免疫组织化学和逆转录聚合链式反应法测海马神经元BDNF表达水平。结果第6，12，18，24天四次行为测试得分显示，剥夺组大鼠的探索行为得分呈现先降低后升高趋势，第24天探索行为得分与抑郁组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化结果显示，与抑郁组[积分光密度：108．53±4．45，阳性面积比：0．0747±0．0262]相比，剥夺组[积分光密度：116．00±5．61，阳性面积比：0．2034±0．0352]大鼠海马神经元BDNF蛋白表达明显增高（尸〈0．05），而与正常组[积分光密度：117．27±10．66，阳性面积比：0．2252±0．1143]相比差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR结果和免疫组化结果相符。结论睡眠剥夺能改善抑郁模型大鼠的探索行为能力，其机制可能与提高海马组织BDNF的含量有关。

关键词：抑郁症海马脑源性神经营养因子探索行为

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一种从骨髓血凝块中分离间充质干细胞的方法

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组织工程与重建外科杂志 2013年第3期9卷 125-128页

作者：李志勇王恒湘毕晓云黄舒郭子宽郭志坤新乡医学院组织再生重点实验室河南省新乡市453003 空军总医院血液科北京市100036 广州市开发区医院南方生物诊治中心广东省广州市510730 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京市100850

目的探讨一种从骨髓血凝块中分离培养间充质干细胞的简易方法。方法采集肝素化骨髓标本7份,部分加入凝血酶以模拟血液凝固过程,并于0、8和16 h分别使用尿激酶或机械处理,分为尿激酶处理组、机械处理组、凝固未处理组及未凝固对照组。各... 详细信息

目的探讨一种从骨髓血凝块中分离培养间充质干细胞的简易方法。方法采集肝素化骨髓标本7份,部分加入凝血酶以模拟血液凝固过程,并于0、8和16 h分别使用尿激酶或机械处理,分为尿激酶处理组、机械处理组、凝固未处理组及未凝固对照组。各组标本经氯化铵溶解红细胞后,分别进行成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)和MSC传代培养。计每组CFU-F及第0、1和2代MSC数量。流式细胞仪测定细胞表型,组织化学法检测细胞体外成骨和成脂肪能力。结果尿激酶处理组样本CFU-F数平均为(33.71±23.54),接近于未凝固对照组样本(40.43±21.29)(n=7,P>0.05),显著高于机械法处理组(13±11.91)(n=7,P<0.01)和凝固未处理组(3.71±3.89)(n=7,P<0.01)。储存8或16 h后的标本,各组CFU-F形成能力下降,而未凝固对照组和尿激酶处理组数量仍显著高于另外两组(P<0.05)。标本储存不同时间进行MSC传代培养,未凝固对照组及尿激酶处理组细胞数量无明显差别,但均显著高于凝固未处理组及机械处理组。各组MSC均表达CD73和CD90,不表达CD31和CD45。经特异诱导后,各组MSC均呈现碱性磷酸酶活性,细胞内出现亲油红O染料的脂肪滴。结论对于已经凝固的骨髓标本而言,尿激酶预处理是分离培养MSC的良好途径。

关键词：间充质干细胞骨髓凝固尿激酶分离

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异丙肾上腺素诱导的大鼠肥厚心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达

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解剖学报 2012年第1期43卷 93-97页

作者：郭志坤武俊芳单卫华高建辉新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的探讨Ⅰ、Ⅲ型胶原在肥厚心肌组织中的变化特征。方法 SD大鼠60只,分为对照组和实验组,两组分别再分为1、4、8周组,每组10只。对照组背部皮下注射生理盐水4ml/(kg.d);实验组背部皮下注射异丙肾上腺素4mg/(kg.d)。两组分别注射1、4、8... 详细信息

目的探讨Ⅰ、Ⅲ型胶原在肥厚心肌组织中的变化特征。方法 SD大鼠60只,分为对照组和实验组,两组分别再分为1、4、8周组,每组10只。对照组背部皮下注射生理盐水4ml/(kg.d);实验组背部皮下注射异丙肾上腺素4mg/(kg.d)。两组分别注射1、4、8周,然后测定各组大鼠体重(BW)、心脏湿重(HW)、左室湿重(LVW),计算出HW/BW、LVW/BW;心肌组织冷冻切片,利用图像分析软件,测量心肌细胞横径(TDM)和心肌细胞截面积(CA)。免疫组织化学法检测各组心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。Western blotting方法检测心肌肥厚大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达及其含量。结果免疫组织化学结果显示,注射异丙肾上腺素1周后,Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白表达明显增加,4周后有所下降。Western blotting结果显示,实验各组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均多于对照组(P<0.01);实验1周时Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达量最高,4周和8周均下降。实验4周和8周组与1周组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论心肌肥厚发生1周左右是Ⅰ、Ⅲ型胶原增加的高峰期,以后趋于稳定。心肌肥厚主要引起胶原量的变化,不破坏胶原纤维的网络结构。

关键词：心肌肥厚胶原蛋白免疫组织化学免疫印迹法大鼠

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哺乳动物心脏淋巴与心血管疾病

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临床心血管病杂志 2012年第3期28卷 166-168页

作者：王耀峰郭志坤新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

心淋巴管道是心脏脉管系统的重要补充,对维持心脏生理功能和心脏组织液的平衡起关键作用。心淋巴管道的异常与心血管疾病的发生密切相关。本文主要阐述心淋巴管的位置和功能、心淋巴障碍与心肌损伤、传导系统障碍、心血管病变的关系和... 详细信息

心淋巴管道是心脏脉管系统的重要补充,对维持心脏生理功能和心脏组织液的平衡起关键作用。心淋巴管道的异常与心血管疾病的发生密切相关。本文主要阐述心淋巴管的位置和功能、心淋巴障碍与心肌损伤、传导系统障碍、心血管病变的关系和促进淋巴回流在心脏病中的治疗意义。

关键词：淋巴管心肌损伤心脏传导系统心血管损伤

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整合素β1在异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚组织中的表达

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中国临床解剖学杂志 2012年第1期30卷 79-83页

作者：武俊芳郭志坤张东高建辉新乡医学院河南省高等学校组织再生重点开放实验室河南新乡453003

目的观察心肌肥厚大鼠心肌组织中整合素β1的表达变化。方法在大鼠背部皮下分别注射7 d、28 d和56 d异丙肾上腺素(ISO),判定心肌肥厚指标,利用免疫组织化学和免疫印迹技术,观察整合素β1在肥厚左心室肌中的表达。结果免疫组化和Western ... 详细信息

目的观察心肌肥厚大鼠心肌组织中整合素β1的表达变化。方法在大鼠背部皮下分别注射7 d、28 d和56 d异丙肾上腺素(ISO),判定心肌肥厚指标,利用免疫组织化学和免疫印迹技术,观察整合素β1在肥厚左心室肌中的表达。结果免疫组化和Western blot结果显示,整合素β1主要表达于心肌细胞膜。与对照组相比,实验各组大鼠的心肌组织的整合素β1表达明显(P<0.05)。7 d、28 d和56 d各组间相比其表达含量逐渐增强。结论在心肌肥厚状态下,心肌细胞中的整合素β1表达增高,随着心肌肥大的进展其表达逐渐增加,提示整合素β1在心肌肥厚发生发展起重要作用。

关键词：整合素β1 免疫组织化学免疫印迹心肌肥厚模型大鼠

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