目的 SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)和成年SD大鼠脾脏调节性T细胞(Tregs)体外共培养,探讨二者相互作用,并观察依普利酮(EPL)对其的影响。方法免疫磁珠法分选大鼠Tregs,差速贴壁法分选大鼠CFs,分为CFs、CFs+Tregs、CFs+Tregs+EPL(30μmol·L^(-1))、Tregs组。孵育后,CCK-8法检测CFs的增殖情况;ELISA法检测CFs分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白相对表达水平;RT-q PCR检测Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平;In-Cell Western blot法检测Tregs的Kv1.3通道蛋白质的表达水平。结果共培养48 h后,CFs增殖趋稳,共培养组CFs增殖明显(P<0.01),EPL可明显抑制其增殖(P<0.01);CFs分泌的Ⅰ型、Ⅲ型胶原和MMP-2的相对表达水平均明显增加(P<0.01),EPL可明显抑制其增加(P<0.01);Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平分别增加6.95、1.99、1.53倍(CFs+Tregs vs Tregs,P<0.01),EPL明显抑制Kv1.3、KCa3.1 mRNA的表达(CFs+Tregs+EPL vs CFs+Tregs,P<0.01),其中Kv1.3通道的抑制最为明显;Tregs的Kv1.3通道蛋白增加了67.9%(CFs+Tregs vs Tregs,P<0.01),EPL可明显抑制其表达(P<0.01)。结论体外Treg与CFs共培养48h后,Tregs能明显促进CFs的增殖,EPL可以通过下调Tregs细胞膜上Kv1.3通道的表达,抑制Tregs的活化/增殖,间接抑制心肌纤维化。
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