检索结果-内蒙古大学图书馆

中华神经医学杂志 2021年第11期20卷 1081-1091页

作者：雷秀英伊力亚斯·艾萨张瑜陈倩冯学召西仁阿依·西热甫米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院药理学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院生药学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830011

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL ... 详细信息

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH作用24 h,观察细胞形态及数目的变化,采用MTT法检测细胞存活率;(2)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH作用4 h,采用免疫荧光染色检测细胞自噬体数;(3)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组、10μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L雷帕霉素、10μg/mL TAH作用4 h,Western blotting检测细胞p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白的表达;(4)将PC12细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬抑制剂氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用4 h,Western blotting检测细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达;(5)将PC12细胞分为TAH组和空白对照组,分别加入10μg/mL TAH和等量溶剂处理4 h后,Western blotting检测细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)的表达;(6)将过表达Tau-绿色荧光蛋白(GFP)的Tet on HEK293细胞分为空白对照组、TAH组、强力霉素组、强力霉素+TAH组、强力霉素+TAH+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、强力霉素+TAH+氯喹组,后4组细胞加入200 ng/mL强力霉素处理24 h后,空白对照组加入等量溶剂,TAH组加入10μg/mL TAH,后3组细胞分别加入10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+5 mmol/L 3-MA、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹,作用24 h后在激光共聚焦显微镜下观察细胞绿色荧光强度的变化,Western blotting检测细胞Tau-GFP和LC3-Ⅱ蛋白的表达;(7)将稳定表达α-Syn的HEK293细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用24 h,Western blotting检测细胞α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果:(1)与空白对照组比较,20、50μg/mL TAH组细胞存活率降低,且50μg/mL TAH组细胞存活率低于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)与空白对照组比较,雷帕霉素组、10、20μg/mL TAH组细胞自噬体数增多,且10μg/mL TAH组细胞自噬体数多于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05),因此,选择10μg/mL TAH用于后续实验;(3)与空白对照组比较,雷帕霉素组、TAH组细胞p62蛋白的表达均降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);(4)与空白对照组比较,氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,且TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,差异均有统计学意义(P<0.05);(5)与空白对照组比较,TAH组细胞p-mTOR、p-p70S6K的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);(6)强力霉素组细胞Tau-GFP蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素组降低,强力霉素+TAH+3-MA组、强力霉素+TAH+氯喹组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素组增加,强力霉素+TAH+3-MA组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组降低,强力霉素+TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05);(7)与空白对照组比较,TAH组HEK293细胞α-Syn蛋白的表达降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,TAH+氯喹组细胞α-Syn蛋白的表达高于TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TAH可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路激活神经细胞

关键词：骆驼蓬总碱细胞自噬 Tau蛋白 α-突触核蛋白

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两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较

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中国地方病学杂志 2006年第5期25卷 561-564页

作者：张春桃王俊芳林仁勇张彤王星卢晓梅王俨张琰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PC... 详细信息

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。

关键词：克隆分子 DNA 重组质粒

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慢病毒介导的水通道蛋白8短发卡RNA抑制SiHa人子宫颈癌细胞的迁移研究

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中国实用妇科与产科杂志 2013年第2期29卷 123-127页

作者：史永华尼加提.热合木塔拉甫.托坎拉莱.苏祖克新疆医科大学基础医学院病理教研室新疆乌鲁木齐830011

目的探讨慢病毒介导的AQP8短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)对SiHa人子宫颈癌细胞迁移的影响。方法 2011年6月构建慢病毒介导的AQP8 shRNA稳定转染SiHa细胞系,新疆医科大学基础医学院病理教研室通过Transwell侵袭和迁移实验、损伤愈... 详细信息

目的探讨慢病毒介导的AQP8短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)对SiHa人子宫颈癌细胞迁移的影响。方法 2011年6月构建慢病毒介导的AQP8 shRNA稳定转染SiHa细胞系,新疆医科大学基础医学院病理教研室通过Transwell侵袭和迁移实验、损伤愈合实验及增殖和贴附能力实验检测AQP8基因沉默对SiHa细胞迁移的抑制作用。结果 (1)成功构建慢病毒介导的AQP8 shRNA稳定转染SiHa细胞系;(2)AQP8shRNA-SiHa侵袭迁移率明显低于对照组(F=196.451,P<0.05);AQP8shRNA-SiHa愈合速度明显低于对照组(F=37.725,P<0.05);AQP8shRNA-SiHa组增殖及基质贴附能力与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抑制AQP8基因表达可以抑制SiHa细胞的迁移和潜在的侵袭过程。

关键词：慢病毒 AQP8基因抑制 SiHa 肿瘤细胞迁移

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miR-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制

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解放军医学杂志 2022年第2期47卷 128-135页

作者：丁毅李敏陈龙张美林冯树梅新疆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室乌鲁木齐830011 新疆第二医学院基础医学院解剖组胚教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院技能中心乌鲁木齐830011 新疆乌鲁木齐市中心血站乌鲁木齐830011

目的探讨mi R-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制。方法用1.8 mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞Ha Ca T,于氯化钙处理0、1、5、7 d,采用q RT-PCR检测mi R-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10(CK10)、外皮蛋白(Inv)、谷氨... 详细信息

目的探讨mi R-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制。方法用1.8 mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞Ha Ca T,于氯化钙处理0、1、5、7 d,采用q RT-PCR检测mi R-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10(CK10)、外皮蛋白(Inv)、谷氨酰胺转移酶1(TG1)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的m RNA表达水平。于氯化钙处理0、5 d采用细胞免疫荧光分析ΔNp63α的表达情况。利用bibiserv网站预测mi R-125b-5p与ΔNp63α的结合位点。用mi R-125b-5p模拟物/抑制剂和阴性对照模拟物/抑制剂转染Ha Ca T细胞,培养5 d后,采用q RT-PCR和Western blotting检测ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt和m TOR的m RNA和蛋白相对表达水平。结果与氯化钙处理0 d时相比,处理1、5、7 d时mi R-125b-5p相对表达水平明显下降(0.17±0.02、0.08±0.01、0.07±0.02 vs.1.00±0.02,P<0.001),而ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt和m TOR m RNA相对表达水平逐渐升高(P<0.05)。细胞免疫荧光分析结果显示,与氯化钙处理0 d时相比,氯化钙处理5d时角质形成细胞中ΔNp63α阳性细胞率增高(96.9%±0.9%vs.43.2%±8.2%,P<0.001)。bibiserv网站预测结果显示,miR-125b-5p可与ΔNp63α的3?-UTR位点相结合。与阴性对照模拟物组相比,mi R-125b-5p模拟物组ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt和m TOR m RNA相对表达水平明显降低,且ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、PI3K、Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR蛋白表达水平也明显降低(P<0.05),而抑制mi R-125b-5p的表达可逆转上述效应(P<0.05)。结论 miR-125b-5p靶向ΔNp63α可通过下调PI3K/Akt/m TOR信号通路抑制角质形成细胞的分化。

关键词： miR-125b-5p ΔNp63α 细胞分化角质形成细胞

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铁死亡中的溶酶体降解系统:质量调控与能量代谢

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中国病理生理杂志 2023年第9期39卷 1691-1696页

作者：刘师佐杨欢汤蓉王延蛟新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学第二临床医学院新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830017

铁死亡(ferroptosis)是近年来新发现的一种细胞死亡方式,其特征是胞内游离铁和脂质过氧化物的积累[1]。巨自噬(macroautophagy;下文简称自噬,au⁃tophagy)是隔离膜将胞质内底物包裹,并在溶酶体内降解为小分子以维持细胞发育和环境稳态的... 详细信息

铁死亡(ferroptosis)是近年来新发现的一种细胞死亡方式,其特征是胞内游离铁和脂质过氧化物的积累[1]。巨自噬(macroautophagy;下文简称自噬,au⁃tophagy)是隔离膜将胞质内底物包裹,并在溶酶体内降解为小分子以维持细胞发育和环境稳态的过程。自噬的质量调控和能量代谢对铁死亡的发生有重要意义。铁死亡中的质量调控由泛素系统和自噬-溶酶体系统构成,主要参与铁死亡相关蛋白的降解。

关键词：铁死亡自噬溶酶体

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细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 111-116页

作者：单骄宇纪卫政吐尔洪江.吐逊李亮张传山林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室乌鲁木齐830054

目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态,采用流式细胞术检测其表面标志物;用混合淋巴细胞反应(MLR)观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天,收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测;另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖(LPS)刺激24 h后,收集成熟树突状细胞,进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液(为阴性对照组)、重组小鼠γ干扰素(rmIFN-γ,1 000 U/ml,为IFN-γ组)和rAgB(终浓度15μg/ml,为rAgB组),培养24 h后,通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot-ting)检测各组树突状细胞IDO的表达情况。结果获得纯度为80%的CD11c+树突状细胞,在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子I-A/I-E的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MLR结果显示,诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为(4.544±1.752)%、(20.464±4.452)%和(11.148±1.966)%,3组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果表明,3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的灰度值之比分别为(0.229±0.085)、(0.794±0.114)和(0.573±0.129),其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与IFN-γ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功能。

关键词：细粒棘球蚴重组抗原B 树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶免疫耐受

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2型糖尿病合并脂肪肝动物模型制备方法研究

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中国临床药理学杂志 2015年第18期31卷 1846-1848页

作者：闫冬李思怡魏媛媛新疆医科大学基础医学院药理学教研室新疆医科大学第一附属医院检验科新疆医科大学基础医学院生理学教研室

目的探讨建立最佳2型糖尿病合并脂肪肝大鼠模型方案。方法用不同方案给予链脲佐菌素、烟酰胺及高脂饲料干预大鼠8周后,制备脂肪肝动物模型。尾静脉取血,测定空腹血糖(FPG),全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肝和血清谷... 详细信息

目的探讨建立最佳2型糖尿病合并脂肪肝大鼠模型方案。方法用不同方案给予链脲佐菌素、烟酰胺及高脂饲料干预大鼠8周后,制备脂肪肝动物模型。尾静脉取血,测定空腹血糖(FPG),全自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、肝和血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);放免法检测空腹胰岛素(FINS),计算肝指数及胰岛素抵抗指数;光镜下观察肝组织改变。结果先注射链脲佐菌素50 mg·kg-1、高脂饲料喂养后,大鼠血糖、血脂、肝功能有显著的变化,组织病理学观察肝细胞出现脂变。结论先注射STZ后高脂饲料喂养可以成功复制糖尿病并脂肪肝动物模型,且符合人类此病的发病特点。

关键词： 2型糖尿病合并脂肪肝烟酰胺链脲佐菌素动物模型

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抗凝全血中miRNA130a的表达与维吾尔族人群肥胖的关系

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中国老年学杂志 2013年第9期33卷 1985-1988页

作者：朱曼丽焦谊龙梅毛新民马晓丽古扎丽努尔.艾尔肯武云王烨李琳琳新疆医科大学基础医学院药理教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院生化与分子生物教研室新疆医科大学基础医学院机能实验中心新疆医科大学中医学院新疆医科大学分析测试中心新疆医科大学第一附属医院综合内科

目的探讨外周抗凝全血中miRNA的表达与维吾尔族肥胖人群的关系。方法按照亚太地区推荐对肥胖诊断的标准,选择维吾尔族肥胖与非肥胖组抗凝全血样本各5例,采用芯片筛选出差异表达的miRNA;后扩大样本量,测量身高、体重、腰围、臀围后,留取... 详细信息

目的探讨外周抗凝全血中miRNA的表达与维吾尔族肥胖人群的关系。方法按照亚太地区推荐对肥胖诊断的标准,选择维吾尔族肥胖与非肥胖组抗凝全血样本各5例,采用芯片筛选出差异表达的miRNA;后扩大样本量,测量身高、体重、腰围、臀围后,留取血样检测空腹血糖、血脂等指标,采用实时PCR验证差异表达的miRNA。结果芯片结果显示,与非肥胖组相比维吾尔族肥胖组抗凝全血中miRNA130a的表达量下降〔(1.14±0.32)vs(0.28±0.13),P<0.05〕;维吾尔族肥胖组体重指数、腰围、臀围以及收缩压均大于非肥胖组,并且差异有统计学意义(P﹤0.05);实时PCR验证结果显示,与非肥胖组相比维吾尔族肥胖组抗凝全血中miRNA130a表达量降低〔(4.84±1.18)vs(2.03±0.59),P<0.05〕;相关分析结果在维吾尔族抗凝全血中miRNA130a的表达量与空腹血糖值、总胆固醇值呈负相关(P<0.05),而与高密度脂蛋白胆固醇呈正相关(P<0.05)。结论抗凝全血中miRNA130a的表达量在维吾尔族肥胖人群中显著降低,提示miRNA130a表达量降低可能与维吾尔族BMI有关。

关键词：微小RNA 肥胖实时定量逆转录聚合酶链反应

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慢性囊型包虫病患者外周血单个核细胞中TLR2、4、7mRNA表达水平的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第3期31卷 273-278页

作者：单骄宇吐尔洪江·吐逊王俊华张志李亮张雪张传山刘涛林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室

目的探讨慢性囊型包虫病（CE）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体（TLRs）2、4、7基因表达变化及血清IL-10的表达情况.方法采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测42例慢性CE患者与28例健康对照组（NC）外周血中TLR2、4、7 mRN... 详细信息

目的探讨慢性囊型包虫病（CE）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体（TLRs）2、4、7基因表达变化及血清IL-10的表达情况.方法采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测42例慢性CE患者与28例健康对照组（NC）外周血中TLR2、4、7 mRNA的表达,GAPDH作为内参基因;应用ELISA方法检测两组血清中IL-10的浓度.t检验比较两组间TLR2、4、7及IL-10的表达差异;TLR2、4、7的表达水平间及它们与血清IL-10水平间的相关性分析采用线性相关分析.结果慢性CE组的TLR2、TLR4、TLR7的mRNA相对表达量均比NC组的表达增高,其中CE组的TLR2是NC组的7.3倍,TLR4是NC组的3.6倍,TLR7是NC组的3.6倍.CE组的TLR2、TLR4、TLR7 mRNA相对表达量分别是1.0729±0.4006、5.0976±1.6682、0.6481±0.2574;NC组的TLR2、TLR4、TLR7 mRNA的相对表达量分别是0.1468±0.0435、1.4067 ±0.3279、0.1804±0.0568.与NC组相比,CE组的TLR2、TLR4的差异均具有统计学意义（P值分别为0.0287、0.033）,而TLR7则无统计学意义（P=0.0862）.慢性CE组、NC组外周血清IL-10分别为（17.6770±1.6298）pg/ml、（9.4898±0.7049）pg/ml,且慢性CE组与NC组的IL-10比较,差异具有统计学意义（P=0.0002）;在慢性CE组中,外周血PBMC的TLR2与TLR4在mRNA相对表达水平上呈正相关（r=0.1135,P=0.036）,其他均无相关.结论 TLR2、TLR4参与了慢性囊型包虫病的发生发展过程,TLR2、TLR4可作为囊型包虫抗原的受体,与不同抗原成分相互作用,调节宿主的免疫应答,同时在血清IL-10分泌增高的作用下共同促使机体向Th2型免疫应答方向发展,从而对囊型包虫感染所产生的免疫逃避发挥着重要作用.

关键词：慢性囊型包虫病 Toll样受体外周血单个核细胞转录水平

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pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组质粒的构建及表达产物的纯化与鉴定

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 185-189,196页

作者：李艳敏赵商岐马西智郑佳龚巧巧丁剑冰周晓涛新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的构建pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)原核表达质粒,诱导表达后纯化,获得重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4),并对其免疫学特性进行初步鉴定,对其空间结构进行预测。方法利用DNA重组技术构建重组质粒pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4),将测序正确的质粒转化至*** BL21(DE)菌株中,分别采用不同浓度的IPTG在不同诱导时间及温度下诱导表达重组蛋白。取菌液超声破碎,SDS-PAGE分析上清及沉淀中蛋白的表达;通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并进行Western blot鉴定。通过生物信息学技术,利用SOPMA、I-TASSER在线数据库预测重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)的空间结构。结果成功构建pET30a-CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组质粒,转化至*** BL21(DE)后诱导表达相对分子质量为53×10^(3)的重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)。SDS-PAGE分析CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组蛋白在IPTG浓度为0.7 mmol/L,37℃、4 h条件下上清中表达量较高。镍柱层析纯化用20 mmol/L咪唑浓度洗脱的蛋白浓度及纯度较高。Western blot检测重组蛋白CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)能被相应抗体识别,反应条带位于53×10^(3)处,与预期相符。生物信息学在线软件分析CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)中各蛋白均能正常折叠,未对优势表位产生影响。结论利用原核表达成功获得CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4)重组蛋白,并预测出该蛋白的三维结构模型,为细粒棘球蚴重组疫苗的研制提供了重要的实验依据。

关键词：细粒棘球蚴重组质粒 CTLA-4IgV-EgG1Y162-2(4) 原核表达

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