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基于引物交换反应的非标记荧光探针用于脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1的高灵敏检测

分析化学 2025年第3期53卷 464-471页

作者：王芸花王乐如杨力改陈佳政杜雨润侯嘉慧翟翔赵旭华于保锋山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1, APE 1)是一种多功能蛋白质，在DNA修复和基因表达调控中发挥重要作用。由于APE 1在多种癌症中过表达，因此可作为癌症生物标志物，用于辅助临床诊断、指导用药及预后... 详细信息

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(Apurinic/apyrimidinic endonuclease 1, APE 1)是一种多功能蛋白质，在DNA修复和基因表达调控中发挥重要作用。由于APE 1在多种癌症中过表达，因此可作为癌症生物标志物，用于辅助临床诊断、指导用药及预后监测。本研究采用引物交换反应（Primer exchange reaction, PER）策略，设计了一种非标记型荧光探针，用于APE 1活性的高灵敏检测。当体系中不存在APE 1时，催化发夹（Catalytic hairpin, HP）的结构稳定，无G-四链体（G-quadruplex）生成。此时，游离的硫磺素T(Thioflavin T,ThT)不发射荧光，体系的背景荧光很低。加入APE 1后，催化发夹上的无嘌呤/嘧啶（Apurinic/apyrimidinic,AP）位点被特异性识别并切割，断裂生成的短核酸序列可直接作为引物引发PER扩增，生成大量G-四链体。游离的ThT嵌入G-四链体结构并发出荧光，导致传感体系的荧光信号显著增强。PER扩增反应策略和催化发夹的低背景设计使此探针展现出很高的灵敏度，线性检测范围为0.001～0.07 U/mL，检出限（3σ）为0.0008 U/mL。此外，引物序列可由APE 1切割直接生成而不需要额外添加，这不仅提高了反应的特异性，还简化了操作步骤。非标记型荧光信号的使用大大降低了实验成本，实现了APE 1的快速检测。利用此荧光探针检测人血清样品中APE 1的含量，回收率在91%～104%之间，表明其在生物酶研究方面拥有巨大的应用潜力。

关键词：脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1 引物交换反应 G-四链体硫磺素T 非标记荧光探针

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NUF2对泛癌的预后和免疫治疗效果的预测价值

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南方医科大学学报 2025年第1期45卷 137-149页

作者：王耀彬陈柳燕罗伊凌申继清周素芳广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室//广西高校生物分子医学研究重点实验室广西南宁530021

目的探讨NUF2表达水平与肿瘤预后的关系及在肿瘤微环境中的作用。方法综合利用人类蛋白质图谱(HPA)、癌症基因组图谱(TCGA)、基因型-组织表达计划(GTEx)、癌细胞系百科全书(CCLE)、TIMER的数据集,采用生物信息学方法挖掘NUF2的潜在致癌... 详细信息

目的探讨NUF2表达水平与肿瘤预后的关系及在肿瘤微环境中的作用。方法综合利用人类蛋白质图谱(HPA)、癌症基因组图谱(TCGA)、基因型-组织表达计划(GTEx)、癌细胞系百科全书(CCLE)、TIMER的数据集,采用生物信息学方法挖掘NUF2的潜在致癌作用,包括剖析NUF2在各种类型肿瘤组织中的表达水平、预后价值及免疫价值;采用RT-qPCR、Western blotting、免疫组化(IHC)等实验检测NUF2在肝癌细胞系和肝癌患者癌组织及血液中的表达情况。利用基因本体论(GO)、基因组百科全书(KEGG)和基因集富集分析(GSEA)探索NUF2及相关基因的分子机制并在肝癌中构建了NUF2的竞争性内源RNA(ceRNA)网络。结果与正常组织相比,NUF2表达在27种肿瘤中上调并与多种类型肿瘤的临床分期相关(P<0.05)。在部分肿瘤中,NUF2的表达上调与肿瘤患者的不良预后(总体生存期、疾病特异性生存期、无病生存期和无进展生存期)相关(P<0.05)。NUF2表达水平与多种肿瘤的肿瘤突变负荷、微卫星不稳定、浸润免疫细胞(B细胞、髓样树突状细胞、中性粒细胞、CD4+T细胞)、免疫细胞maker基因(CCR7、CD163、CD19、CD4、CD79A、CD8A、CD8B、IRF5、ITGAX和MS4A4A)以及免疫检查点基因(CTLA4、HAVCR2、LAG3、PDCD1和PDCD1LG2)呈正相关(P<0.05)。RT-qPCR等实验结果显示NUF2在肝癌细胞系、肝癌患者癌组织和血液中表达上调(P<0.05),其中肝癌患者经手术治疗之后,使得血液中NUF2表达下调(P<0.05)。GO和KEGG富集分析表明,NUF2相关基因与染色体分离、微管运动以及细胞周期相关(P<0.05)。GSEA分析提示,在肝癌中NUF2高表达与甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢以及调控神经活性配体受体相互作用有关(P<0.05)。结论NUF2在27种肿瘤中表达上调并与部分肿瘤的临床分期、不良预后有关。此外NUF2的表达与多种肿瘤的免疫细胞浸润密切相关,可能作为这些癌症免疫治疗效果的潜在预测因子。

关键词： NUF2 泛癌分析免疫浸润预后

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泛凋亡在肿瘤中的研究进展

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生理学报 2025年第02期77卷 277-288页

作者：罗伊凌陈柳燕王耀彬周素芳广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广西高校生物分子医学研究重点实验室

泛凋亡(PANoptosis)是一种由泛凋亡复合体调控的程序性细胞死亡，具有细胞焦亡、凋亡和(或)坏死性凋亡的关键特征。作为最复杂的程序性细胞死亡方式，泛凋亡涉及多种程序性细胞死亡之间的补偿作用，可以通过多种信号通路调节肿瘤细胞的... 详细信息

泛凋亡(PANoptosis)是一种由泛凋亡复合体调控的程序性细胞死亡，具有细胞焦亡、凋亡和(或)坏死性凋亡的关键特征。作为最复杂的程序性细胞死亡方式，泛凋亡涉及多种程序性细胞死亡之间的补偿作用，可以通过多种信号通路调节肿瘤细胞的增殖，迁移和侵袭等恶性表型的发生过程，从而影响恶性肿瘤的进展。研究发现泛凋亡在肿瘤进展和治疗中具有抑癌和促癌双重作用，因此深入研究泛凋亡在肿瘤发生、发展中的相关分子机制意义重大。本文综述了细胞凋亡、焦亡和坏死性凋亡的分子机制，总结了泛凋亡及其复合体的激活和调控机制以及泛凋亡在肿瘤发生、发展中的作用，以期为癌症治疗和预后评估提供新的思路。

关键词：细胞凋亡焦亡坏死性凋亡泛凋亡泛凋亡复合体肿瘤

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高糖抑制蛋白KIAA0753和CCSAP表达并通过钙信号阻断小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1的成骨分化

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中国药理学通报 2025年第3期41卷 456-465页

作者：王吉春钱正霞李梦雪汪长东重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院麻醉科重庆400016

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blo... 详细信息

目的探究高糖对蛋白KIAA0753和CCSAP的影响,以及高糖条件下KIAA0753和CCSAP与成骨分化以及钙信号通路三者之间的联系。方法利用5.5和25 mmol·L^(-1)葡萄糖浓度的成骨培养基诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1),通过Western blot检测KIAA0753和CCSAP蛋白表达情况;转染过表达质粒进入人胚肾细胞(HEK-293T),免疫共沉淀检测蛋白KIAA0753和CCSAP相互作用;利用成骨培养基分别在不同葡萄糖浓度和不同诱导时间处理MC3T3-E1细胞,试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western blot检测KIAA0753、CCSAP、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)等蛋白的表达情况,然后再设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-CCSAP组MC3T3-E1细胞,依次检测KIAA0753、OCN、OPN蛋白的表达情况以及ALP活性;利用高通量基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)中糖尿病鼠模型数据集筛选差异基因进行生物信息学分析;对MC3T3-E1细胞分别设置5.5、25 mmol·L^(-1)和25 mmol·L^(-1)+OE-KIAA0753组,Western blot检测钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡbeta,CAMK2B)、受磷蛋白(phospholamban,PLN)蛋白的表达。结果与5.5 mmol·L^(-1)组相比,25 mmol·L^(-1)抑制成骨细胞中KIAA0753和CCSAP蛋白表达,且蛋白KIAA0753和CCSAP存在相互作用。同时25 mmol·L^(-1)也抑制成骨细胞ALP、OPN、OCN蛋白表达,在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达CCSAP上调KIAA0753、OCN、OPN、ALP的表达。糖尿病鼠模型的差异基因主要富集在“信号受体、信号调控”等方面。25 mmol·L^(-1)葡萄糖抑制成骨细胞中CAMK2B、PLN蛋白的表达,且在25 mmol·L^(-1)的条件下过表达KIAA0753上调CAMK2B、PLN蛋白的表达。结论高糖抑制KIAA0753和CCSAP蛋白表达,抑制小鼠胚胎成骨细胞前体细胞成骨分化和钙信号传导,过表达CCSAP挽救高糖对成骨分化的抑制作用以及过表达KIAA0753逆转高糖对钙信号通路的抑制作用。

关键词：糖尿病 KIAA0753 CCSAP 蛋白相互作用成骨分化钙信号

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基于基础医学创新研究暨实验设计论坛和“大创”项目对本科生科研能力提升的实践与思考

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内江科技 2025年第3期46卷 27-29页

作者：朱稷蔚周文骏杨桐桐木艾塔尔·艾斯卡尔王汉铭卡思木江·阿西木江新疆医科大学新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

在医学生本科教育中,学生科研能力的培养至关重要,同时也是综合素质和创新思维培养的关键。在从医学生向临床医生转变的过程中,基础医学发挥着举足轻重的作用。本文以第九届基础医学创新研究暨实验设计论坛参与者和指导教师为主体,结合... 详细信息

在医学生本科教育中,学生科研能力的培养至关重要,同时也是综合素质和创新思维培养的关键。在从医学生向临床医生转变的过程中,基础医学发挥着举足轻重的作用。本文以第九届基础医学创新研究暨实验设计论坛参与者和指导教师为主体,结合国家级“大创”项目,并以参赛者视角回顾和总结作为本科生参加实验设计论坛以及“大创”项目申请、实施、结题的全过程,从个人能力、团队基础、以赛促研、协同合作等方面依次分析科研能力培养的重要性和实践经验。

关键词：科研能力培养大创协同合作医学创新项目申请实验设计基础医学学生科研能力

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医学分子生物学课程思政教学探索

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医学理论与实践 2025年第8期38卷 1423-1426页

作者：朱慧芳卜友泉重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆市400016

医学分子生物学是医学院校设置的必修课程,旨在让学生从分子水平上了解生命现象及其规律,探索疾病的发生机制、检测方法和治疗方案。本课程以《高等学校课程思政建设指导纲要》为依据,结合课程教学内容,重塑课程教学目标,深入挖掘课程... 详细信息

医学分子生物学是医学院校设置的必修课程,旨在让学生从分子水平上了解生命现象及其规律,探索疾病的发生机制、检测方法和治疗方案。本课程以《高等学校课程思政建设指导纲要》为依据,结合课程教学内容,重塑课程教学目标,深入挖掘课程思政元素,推进课程思政教学途径,实现“知识传授、能力培养和价值引领”,培养德才兼备的医务工作者和科研工作者。

关键词：医学分子生物学课程思政教学改革

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基于应用导向的生物化学教学模式的构建

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中国医药导报 2025年第8期22卷 91-94页

作者：侯连国尚丹丹董丽华宋利郑斌石芸河北医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室河北石家庄050017

随着技术和社会的迅速发展,传统的生物化学教学模式已无法满足当代学生的需求。在当今数字化、信息化的时代背景下,学生获取知识的途径更多样化,对知识的应用能力也提出更高的要求。应用导向的教学模式应运而生,其注重将理论知识与实际... 详细信息

随着技术和社会的迅速发展,传统的生物化学教学模式已无法满足当代学生的需求。在当今数字化、信息化的时代背景下,学生获取知识的途径更多样化,对知识的应用能力也提出更高的要求。应用导向的教学模式应运而生,其注重将理论知识与实际应用相结合,以应用带动学习,加深理解。这种教学改革模式不仅提升学生对生物化学知识的掌握能力,而且通过实际案例和课程思政,培养学生的自主学习能力和创新思维。学生在解决实际问题的过程中,能更好地理解知识的内在联系,激发学习兴趣。这样的教学模式能更好地满足学生的需求,为其未来的职业发展打下坚实的基础,也适应社会对高素质、创新型人才的要求。

关键词：生物化学应用导向课程思政教学改革

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丹皮酚对人神经母细胞瘤细胞帕金森病模型的保护作用及其初步机制

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解放军医学杂志 2025年第1期50卷 69-75页

作者：孙胜男和璐璐秦劭晨徐磊王利然于保锋马存根樊慧杰柴智山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心山西晋中 030619 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原 030001 山西中医药大学第一临床学院山西太原 030024 山西中医药大学第二临床学院山西太原 030012

目的探究丹皮酚(PAE)对过表达α-突触核蛋白(α-Syn)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中自噬的影响及其相关作用机制.方法以SH-SY5Y细胞为对照组,含A53T-α-Syn突变的SH-SY5Y细胞为模型组、PAE(150 μg/ml)组、3-甲基腺嘌呤(3-M... 详细信息

目的探究丹皮酚(PAE)对过表达α-突触核蛋白(α-Syn)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中自噬的影响及其相关作用机制.方法以SH-SY5Y细胞为对照组,含A53T-α-Syn突变的SH-SY5Y细胞为模型组、PAE(150 μg/ml)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA,1 mmol/L)组和PAE(150 μg/ml)+3-MA(1 mmol/L)组.采用CCK-8法检测各组细胞存活率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blotting检测α-Syn和自噬通路相关蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、Bcl-2表达水平.结果与对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.01),α-Syn蛋白表达水平明显增高(P＜0.001),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平明显降低(P＜0.01或P＜0.05),自噬底物蛋白p62蛋白表达水平升高(P＜0.05),调节自噬通路相关蛋白p-JNK、Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,PAE组细胞存活率增高(P＜0.01),α-Syn、p62蛋白表达水平降低(P＜0.01或P＜0.05),LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-JNK、Bcl-2蛋白表达水平增高(P＜0.05).与PAE组比较,PAE+3-MA组细胞α-Syn蛋白表达水平增高(P＜0.05).结论 PAE可缓解A53T-α-Syn突变诱导的SH-SY5Y细胞损伤,并通过激活自噬途径清除过表达的α-Syn,其机制可能与上调JNK/Bcl-2介导的自噬途径有关.

关键词：丹皮酚帕金森病 α-突触核蛋白自噬

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新医科背景下分子医学整合实验课程的构建与实践

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基础医学教育 2025年第2期27卷 159-163页

作者：陈秀芳孙委委张伟马建设朱珊丽温州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室温州325035 温州医科大学基础医学院基础医学课程整合实验教学中心温州医科大学基础医学院免疫学教研室

传统的基础医学实验教学在提升学生综合素质与能力方面有所欠缺。该课程依据以学生为中心、以能力培养为导向的理念,对生物化学与分子生物学、细胞生物学及医学免疫学的实验内容进行优化整合,构建融多学科知识与技能于一体的、重实践重... 详细信息

传统的基础医学实验教学在提升学生综合素质与能力方面有所欠缺。该课程依据以学生为中心、以能力培养为导向的理念,对生物化学与分子生物学、细胞生物学及医学免疫学的实验内容进行优化整合,构建融多学科知识与技能于一体的、重实践重思维训练的分子医学整合实验课程,进行基于问题的探究式学习,实施线上线下混合式教学,培养了学生的实践能力、综合性实验能力和研究型思维等多方面的能力。

关键词：基础医学分子医学整合实验教学创新思维素质教育混合式教学

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癌变.畸变.突变 2025年第1期37卷 45-51页

作者：卢宛瑶刘伊宁沙巴海提·吾斯曼艾乐宇胡晓文李静蕾钟炫宇艾米热拉·米尔喀迪尔伊娜刘玲新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830017 新疆医科大学临床医学部新疆乌鲁木齐830017 新疆维吾尔自治区第三人民医院检验科新疆乌鲁木齐830091

目的:探讨铜死亡相关基因COX17在食管癌中的表达及其对食管癌Eca109细胞功能的影响。方法:利用UALCAN数据库分析COX17 mRNA表达水平与食管癌患者临床病理特征的相关性。采用免疫组织化学法检测15对食管癌及其对应癌旁组织中COX17蛋白的... 详细信息

目的:探讨铜死亡相关基因COX17在食管癌中的表达及其对食管癌Eca109细胞功能的影响。方法:利用UALCAN数据库分析COX17 mRNA表达水平与食管癌患者临床病理特征的相关性。采用免疫组织化学法检测15对食管癌及其对应癌旁组织中COX17蛋白的表达,并进行临床病理资料分析。另采用siRNA干扰敲降食管癌Eca109细胞中COX17的表达,用Western blot检测siR-COX17敲降的效果,并通过CCK-8试验、划痕试验以及Transwell试验检测COX17表达下调时对Eca109细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果:UALCAN数据分析显示,与正常对照组比较,COX17 mRNA表达水平在食管癌组织中明显升高,且与肿瘤临床分期、病理分级、性别、年龄、种族具有相关关系(P<0.05)。免疫组织化学法检测结果显示,COX17蛋白在食管癌组织中的表达高于对应癌旁组织,且COX17蛋白的表达水平与病理分级和淋巴结转移相关,差异均具有统计学意义(P<0.05)。siRNA转染后,COX17蛋白在Eca109细胞中的表达水平明显低于对照组,且敲低COX17后抑制了食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。结论:铜死亡相关基因COX17在食管癌中高表达并与预后相关,其可能参与了食管癌的生物学恶性进展。

关键词：食管癌 COX17 铜死亡生物信息学

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