检索结果-内蒙古大学图书馆

中国应用生理学杂志 2009年第3期25卷 411-415页

作者：张若楠宋士军李芳芳马俊骥李怡秋河北医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室河北石家庄050017 河北医科大学基础医学院生理教研室河北石家庄050017

目的:观察去卵巢大鼠空间学习记忆能力的变化与海马中胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的关系。方法:雌性SD大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,饲养4个月后采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,于测试前将各组组内又分为训练组和非训练... 详细信息

目的:观察去卵巢大鼠空间学习记忆能力的变化与海马中胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的关系。方法:雌性SD大鼠随机分为假手术组和去卵巢组,饲养4个月后采用Morris水迷宫测试空间学习记忆能力,于测试前将各组组内又分为训练组和非训练组,训练组用于测定经学习记忆训练诱发的ERK1/2的诱导活性,非训练组用于测定未经学习记忆训练时的ERK1/2的基础活性,Western blot方法检测海马CA1/CA2区p-ERK1/2蛋白及Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的变化。结果:①与假手术组比较,去卵巢组大鼠的空间学习记忆能力明显下降(P<0.05)。②各组中的训练大鼠p-ERK1/2蛋白水平明显高于非训练大鼠(P<0.05)。③去卵巢组训练及非训练大鼠的p-ERK1/2蛋白水平均相应低于假手术组训练及非训练大鼠(P<0.05)。④去卵巢组RKIP蛋白表达水平明显高于假手术组(P<0.05)。结论:雌激素缺乏大鼠的空间学习记忆能力下降与海马CA1/CA2区ERK1/2通路的基础和诱导活性降低以及该通路的抑制蛋白RKIP的表达增加有关。

关键词：雌激素缺乏海马学习记忆胞外信号调节激酶1/2 Raf激酶抑制蛋白

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BAG3(WT)与BAG3(ΔPXXP)真核表达载体的构建与鉴定

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中华肿瘤防治杂志 2013年第6期20卷 401-404,410页

作者：李超刘宝琴王华芹中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001

目的:构建重组人BAG3(WT)与BAG3(ΔPXXP)的真核表达载体,建立稳定表达EGFP-BAG3(WT)、EGFP-BAG3(ΔPXXP)的人甲状腺癌FRO细胞系。方法:基因克隆方法构建pcDNA3-N-EGFP-BAG3(WT)和pcDNA3-N-EGFP-BAG3(ΔPXXP)的真核表达载体,应用脂质体介导的转染技术将重组质粒导入FRO细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系。FRO细胞中EGFP-BAG3(WT)、EGFP-BAG3(ΔPXXP)的表达用倒置荧光显微镜方法检测。结果:分别成功构建pcDNA3-N-EGFP-BAG3(WT)和pcDNA3-N-EGFP-BAG3(ΔPXXP)重组质粒,获得转染并经G418反复筛选的稳定表达EGFP-BAG3(WT)、EGFP-BAG3(ΔPXXP)的FRO细胞系。FRO细胞均能表达绿色荧光,EGFP-BAG3(WT)主要分布在细胞质内,而EGFP-BAG3(ΔPXXP)在细胞质和细胞核内均有分布。结论:成功构建了BAG3(WT)与BAG3(ΔPXXP)真核表达载体。

关键词： Bcl-2相关抗凋亡蛋白基因转染稳定表达细胞自噬作用

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基于CRISPR/Cas9技术构建与鉴定敲除ACE2基因的Huh7肝癌细胞株

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生物技术通报 2023年第6期39卷 181-188页

作者：张祖霖刘方芳周青鸟赵瑞强贺菽嘉林文珍广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室南宁530021 广西高校生物分子医学研究重点实验室南宁530021

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人Huh7肝癌细胞的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,构建ACE2基因敲除细胞株,为研究ACE2在肝细胞癌的作用提供细胞模型。首先,对ACE2结构域进行鉴定,利用在线网站设计两条破坏所有结构域、靶向作用于ACE2外... 详细信息

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人Huh7肝癌细胞的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,构建ACE2基因敲除细胞株,为研究ACE2在肝细胞癌的作用提供细胞模型。首先,对ACE2结构域进行鉴定,利用在线网站设计两条破坏所有结构域、靶向作用于ACE2外显子的sgRNA。其次,构建重组载体并转染肝癌细胞Huh7,嘌呤霉素筛选出单克隆细胞株。最后,免疫印迹鉴定敲除效果。结构域鉴定结果显示,在340-520号氨基酸位置存在Zn结合位点和激活位点,根据sgRNA靶点设计原则,采用片段敲除的方式,针对ACE2的第9、第10外显子设计两对sgRNA,并成功构建PX459-ACE2-sgRNA重组质粒。嘌呤霉素成功筛选出单克隆细胞株,并测序证实了发生片段敲除,ACE2蛋白在敲除细胞株中不表达;成功构建ACE2敲除的Huh7细胞株,为日后研究ACE2在肝细胞癌的发生机制奠定基础。

关键词：血管紧张素转化酶2 肝细胞癌 CRISPR-Cas9 单克隆细胞株

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circRNA相关数据库及其应用

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中国生物化学与分子生物学报 2019年第1期35卷 35-41页

作者：陈伟吴仙华孙绍光河北医科大学基础医学院临床医学系石家庄050017 河北医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室石家庄050017

环状RNA(circular RNA, circRNA)是由真核生物中的前体mRNA反向剪接产生的环状内源性RNA分子,分布广泛、结构稳定、序列高度保守,具有细胞和组织特异性。circRNA以多种方式参与调控生物学过程以及疾病的发生发展。目前发现的功能模式包... 详细信息

环状RNA(circular RNA, circRNA)是由真核生物中的前体mRNA反向剪接产生的环状内源性RNA分子,分布广泛、结构稳定、序列高度保守,具有细胞和组织特异性。circRNA以多种方式参与调控生物学过程以及疾病的发生发展。目前发现的功能模式包含竞争性内源性RNA作用、与蛋白质互作、翻译成蛋白质以及顺式调控亲本基因的转录等。随着circRNA的基本信息、功能分析和与人类疾病的关系等研究内容不断更新增加,急需对海量的信息进行整合分析,以及对相应细胞或组织来源的circRNA进行分类。本文从基本信息整合及分析、相关功能分析和与人类疾病的相关性等方面,对目前常用的circRNA数据库进行综述,以期为circRNA研究提供参考。

关键词：环状RNA 数据库信息整合功能预测人类疾病

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胃癌细胞系SGC7901通过间充质干细胞原纤毛调控钙信号对成骨分化的影响

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中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志 2023年第1期16卷 23-32页

作者：陈茜李梦雪王吉春刘杰许洁汪长东重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探究胃癌细胞系SGC7901如何影响间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化。方法分离SD大鼠乳鼠股骨,获取原代MSCs。将原代MSCs和经血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理的原代MSCs分别与胃黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系... 详细信息

目的探究胃癌细胞系SGC7901如何影响间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化。方法分离SD大鼠乳鼠股骨,获取原代MSCs。将原代MSCs和经血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)处理的原代MSCs分别与胃黏膜细胞系GES-1和胃癌细胞系SGC7901共培养,并以成骨诱导培养基(OS培养基)诱导72 h,提取MSCs总蛋白和总RNA。对总RNA进行RNA-seq检测并对显著差异基因进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)和真核直系同源群(euKaryotic Ortholog Groups,KOG)可视化分析;以GAPDH为内参,Western blot检测成骨标志蛋白,钙信号相关蛋白和原纤毛结构相关蛋白表达;对共培养后获取的MSCs总蛋白进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测。结果MSCs原代培养细胞呈多角形或梭形;经过成骨诱导培养基(OS培养基)诱导,茜素红染色矿化结节呈红色;以SGC7901为对照,MSCs细胞高表达CD44,低表达CD34。与GES-1共培养相比,SGC7901共培养的MSCs中骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和Runx2表达均降低(P<0.01),ALP酶活力显著降低(P<0.001)。SGC7901共培养上调了MSCs中乙酰化α-微管蛋白和γ-微管蛋白表达(P<0.01)。RNA-seq分析显著差异基因共3712个,2756个基因表达上调,956个基因表达下调;SGC7901共培养的MSCs中ADRB3和PLN表达均降低(P<0.001)。经过AngⅡ处理后,SGC7901共培养抑制的Runx2和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平增加(P<0.05),ALP酶活力增强(P<0.001)。结论胃癌细胞SGC7901通过促进MSCs原纤毛生长,抑制钙信号从而抑制MSCs成骨分化。

关键词： SGC7901 间充质干细胞成骨分化原纤毛钙信号

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碱性蛋白酶水解苦荞蛋白工艺优化及其抗氧化活性

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食品工业 2019年第6期40卷 137-141页

作者：罗小雨费烨许庆忠张礼林雷霆雯李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

采用碱性蛋白酶对苦荞蛋白进行酶解,以水解度(DH)作为指标,采用单因素试验和正交试验优化苦荞蛋白酶解工艺。以VC作为对比,检测苦荞蛋白肽的体外抗氧化能力。结果表明:苦荞蛋白最佳酶解条件为:底物浓度3%, pH 10,温度45℃,加酶量5%,酶... 详细信息

采用碱性蛋白酶对苦荞蛋白进行酶解,以水解度(DH)作为指标,采用单因素试验和正交试验优化苦荞蛋白酶解工艺。以VC作为对比,检测苦荞蛋白肽的体外抗氧化能力。结果表明:苦荞蛋白最佳酶解条件为:底物浓度3%, pH 10,温度45℃,加酶量5%,酶解时间4 h。在此条件下水解度DH为19.42%,制备的苦荞蛋白肽羟自由基的清除率IC50为1.372 mg/mL,抑制羟自由基的能力为17.55 U/mg。表明苦荞蛋白肽具有较好的抗氧化能力。

关键词：苦荞蛋白水解度酶解工艺羟自由基

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敲减EEF1D的人卵巢癌细胞的构建及其药物敏感性研究

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安徽医科大学学报 2018年第6期53卷 828-834页

作者：汪慎燚徐恰阮昕席浩王鹏陈曦秦宜德安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转... 详细信息

目的探讨RNA干扰真核生物翻译延长因子1δ(EEF1D)基因表达对人卵巢癌耐药细胞DDP、PGPIPN敏感性的影响。方法针对人EEF1D基因设计并筛选出下调基因表达效果最佳的siRNA,构建shRNA序列表达载体pLJM1-shRNA。通过慢病毒表达载体构建稳定转染pLJM1-shRNA-EEF1D的SKOV3、SKOV3/DDP细胞株。RT-PCR和Western blot检测稳定转染细胞株EEF1D基因的表达情况,MTT法测定PGPIPN、DDP、DDP/PGPIPN对稳定转染细胞株的增殖抑制率。结果成功构建重组慢病毒载体pLJM1-shRNA-EEF1D。RT-PCR和Western blot法均证实在SKOV3、SKOV3/DDP细胞中成功敲减EEF1D的表达。此外,MTT结果显示,与对照组和非特异性转染组相比,DDP/PGPIPN细胞的增殖均明显受到抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过敲减EEF1D基因表达可以明显增强人卵巢癌SKOV3/DDP细胞对DDP/PGPIPN的敏感性。

关键词： RNA干扰人卵巢癌 EEF1D DDP PGPIPN

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miR-20a通过靶向NR4A3促进前列腺癌细胞增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第8期37卷 1093-1099页

作者：杨伟玉刘驰谢辉林平于晓光哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院生物技术实验中心哈尔滨150081

前列腺癌是男性患者中常见的恶性肿瘤,探讨前列腺癌的发病机制和寻找合适的治疗靶标具有重要的临床意义。来源于类固醇核激素受体超家族NR4A3在多种肿瘤的恶性进展中发挥重要作用,但其在前列腺癌中的作用尚未阐明。本课题拟以前列腺癌... 详细信息

前列腺癌是男性患者中常见的恶性肿瘤,探讨前列腺癌的发病机制和寻找合适的治疗靶标具有重要的临床意义。来源于类固醇核激素受体超家族NR4A3在多种肿瘤的恶性进展中发挥重要作用,但其在前列腺癌中的作用尚未阐明。本课题拟以前列腺癌细胞为研究对象,揭示NR4A3在前列腺癌中的作用;在此基础上,寻找靶向NR4A3的miRNA,为前列腺癌的诊断和治疗提供新靶点。GEPIA网站预测显示,NR4A3在前列腺癌组织中呈低表达。qRT-PCR检测证实,NR4A3在前列腺癌细胞中也呈低表达(P<0.01);CCK8和克隆形成的结果显示,过表达NR4A3可使前列腺癌细胞活力显著下降(P<0.01),集落数量和大小显著减少。生物信息学网站预测,NR4A3可能是miR-20a靶基因。通过qRT-PCR检测发现,miR-20a在前列腺癌细胞中呈高表达(P<0.01),双荧光素酶报告基因结果证实,miR-20a能够与NR4A3的3’-UTR的2个位点靶向结合(P<0.05,P<0.001),且Western印迹结果显示,miR-20a可抑制NR4A3的表达;进一步CCK8检测发现,随着时间的延长miR-20a inhibitor能够使前列腺癌细胞活力显著下降(P<0.05),miR-20a mimic则得到与之相反的结果(P<0.05,P<0.01);而当共转染miR-20a mimic和pcDNA3.1-NR4A3重组质粒时,通过CCK8和克隆形成实验发现,上调NR4A3的表达可部分抵消miR-20a mimic对PC3细胞活力(P<0.05),集落数量和大小的促进作用。综上所述,miR-20a通过靶向NR4A3促进前列腺癌细胞增殖。

关键词：前列腺癌 miR-20a 核受体亚家族4 A组成员3 细胞增殖

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结直肠癌中辅酶Q_(10)的功能及分子机制探讨

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重庆医科大学学报 2023年第1期48卷 30-36页

作者：杜炌龙孟佩新孙世杰王义涛陈全梅温含璐重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:探索辅酶Q_(10)(coenzyme Q_(10),CoQ_(10))对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响及潜在分子机制。方法:使用CoQ_(10)分别处理SW480细胞和RKO细胞后,采用细胞计数和细胞划痕实验探究CoQ_(10)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响;采... 详细信息

目的:探索辅酶Q_(10)(coenzyme Q_(10),CoQ_(10))对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响及潜在分子机制。方法:使用CoQ_(10)分别处理SW480细胞和RKO细胞后,采用细胞计数和细胞划痕实验探究CoQ_(10)对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响;采用流式细胞术探究CoQ_(10)对结直肠癌SW480细胞周期和细胞凋亡的影响;采用RNA-seq测序分析CoQ_(10)对结直肠癌RKO细胞系基因表达谱的影响,将差异表达基因进行GO和KEGG通路分析,最后采用定量RT-PCR验证RNA-seq结果。结果:(1)CoQ_(10)对结直肠癌细胞系SW480的细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移均无明显影响,对结直肠癌细胞系RKO的细胞增殖也无明显影响,但可抑制RKO细胞迁移。(2)CoQ_(10)处理结直肠癌RKO细胞后的RNA-seq结果表明,差异表达基因明显富集于细胞黏附分子信号通路、细胞外基质受体信号通路和胆固醇信号通路等。定量RT-PCR验证结果表明,CoQ_(10)处理确实可导致胆固醇合成通路中的PCSK9、HMGCR、HMGCS1和DHCR7基因表达明显上调,提示CoQ_(10)可能通过调节这些基因的表达来抑制结直肠癌细胞RKO的迁移。结论:CoQ_(10)对结直肠癌细胞的增殖无明显影响,但可通过参与调节胆固醇代谢而抑制部分结直肠癌细胞的迁移能力。

关键词：辅酶Q_(10) 结直肠癌细胞增殖与迁移胆固醇代谢

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GluA1相互作用蛋白GNAI2和SRSF10对肝细胞癌预后的影响及诊断模型的建立

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重庆医科大学学报 2023年第12期48卷 1408-1417页

作者：张洺铭易发平重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

目的:探讨AMPA型谷氨酸受体亚基1(glutamate A1,GluA1)相互作用蛋白GNAI2、SRSF10对HCC药物相关靶点、预后指标及诊断模型的作用和影响。方法:蛋白质组学方法获得GluA1相互作用蛋白。Xena数据库(https://***/)中获取肝细胞癌(liver hepa... 详细信息

目的:探讨AMPA型谷氨酸受体亚基1(glutamate A1,GluA1)相互作用蛋白GNAI2、SRSF10对HCC药物相关靶点、预后指标及诊断模型的作用和影响。方法:蛋白质组学方法获得GluA1相互作用蛋白。Xena数据库(https://***/)中获取肝细胞癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)转录组数据以及对应的临床数据,保留在75%样本中表达的基因和其中原发肿瘤和癌旁组织样本用于后续分析。R语言的limma包标准流程对样本进行差异分析。对GluA1相互作用蛋白及差异基因取交集,并进行表达量分析、单因素COX分析和生存曲线分析。PDBePISA数据库验证候选蛋白集与GluA1在分子结构上的对接。string数据库分析候选蛋白集与肝癌相关药物的作用靶点。多因素COX分析患者的预后指标,logistic回归模型构建肝癌诊断模型。结果:获得6个候选蛋白,即KIF1A、GNAI2、RPL3、ARPC1A、EIF3H和SRSF10与GluA1具有很强的亲和力。其中GNAI2和SRSF10是肝细胞癌药物Regorafenib的二级作用靶点,其在单因素以及多因素COX分析中对患者的生存均存在影响(P<0.05),GNAI2(P=0.000339),SRSF10(P=0.0404),并且GNAI2、SRSF10在疾病组中比正常组中高。Z值分别为GNAI2:3.584、SRSF10:2.049。HR分别为GNAI2:2.38,SRSF10:1.18,均为不利预后因素,有希望作为独立于其他因素的预后指标。在肝癌患者的诊断模型中,HR系数分别为GNAI2:11.8455,SRSF10:-0.2037,且该模型在训练集上的曲线下面积为0.971,性能优异。结论:GluA1相互作用蛋白GNAI2和SRSF10是肝细胞癌治疗药物Regorafenib的二级作用靶点,意味着其可能会成为独立于其他因素的预后指标,且具备一定的诊断意义。

关键词：肝细胞癌谷氨酸受体亚基1 预后诊断模型

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