检索结果-内蒙古大学图书馆

中南大学学报(医学版) 2007年第5期32卷 765-770页

作者：库热西·玉努斯黄国虹龙梅贺捷纳斯尔·买买提艾力夏艳萍哈木拉提·吾甫尔新疆医科大学生物化学及分子生物学教研室新疆医科大学基础医学院机能中心新疆医科大学新疆地方病分子生物学实验室乌鲁木齐830054

目的:构建核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)基因的RNA干扰载体,观察其抑制NF-κB蛋白的效率。方法:分别构建大鼠NF-κB基因的pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-NF-κB重组真核表达载体和pSilencer1.0-U6-siRNA-NF-κB重组载体,用两种重组载体转染COS-7细胞,在荧光倒置显微镜下观察大鼠NF-κB-绿色荧光融合蛋白的表达,并用Western免疫印迹方法检测。结果:荧光倒置显微镜观察及Western免疫印迹检测结果均显示随着pSilencer1.0-U6-siRNA-NF-κB重组载体浓度的增加,NF-κB-绿色荧光融合蛋白表达量逐渐减少。结论:成功构建NF-κB基因的RNA干扰载体。

关键词： NF-κB RNAi 转染 GFP

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基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入/敲除策略

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中国生物化学与分子生物学报 2019年第1期35卷 1-6页

作者：张雪梅高旭马宁哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥... 详细信息

成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。

关键词：基因编辑成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR) 基因敲入同源模板

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酶和核酶的词源学研究及现实意义

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中国生物化学与分子生物学报 2020年第4期36卷 475-480页

作者：卜友泉重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆400016

酶学是生物化学与分子生物学的一个重要领域。酶绝大多数是蛋白质,少数是RNA,特称为核酶。本文结合酶学研究历史及最新进展,对酶和核酶的词源学进行研究。从术语内涵来讲,酶是细胞内催化特定化学反应的生物分子。作为一个重大发现,核酶... 详细信息

酶学是生物化学与分子生物学的一个重要领域。酶绝大多数是蛋白质,少数是RNA,特称为核酶。本文结合酶学研究历史及最新进展,对酶和核酶的词源学进行研究。从术语内涵来讲,酶是细胞内催化特定化学反应的生物分子。作为一个重大发现,核酶不仅对于探索生命演化具有重要理论意义,也是酶学理论的进一步拓展补充。核酶具有许多普通酶的一般特性,具有与蛋白质类酶类似的催化机制,遵守米氏动力学。国内生物化学与分子生物学学界对酶和核酶的含义长期存在分歧,词源学研究有助于厘清两者的联系与区别,有助于解决分歧、统一认识,在教学和学术交流中规范、正确地使用这两个术语。

关键词：酶核酶

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薯蓣皂苷元通过自噬降解Tau蛋白发挥神经保护作用

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中国临床药理学杂志 2021年第17期37卷 2290-2294页

作者：张瑜伊力亚斯·艾萨雷秀英陈倩西仁阿依·西热甫冯学召席庆袁芳新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的研究小分子药物薯蓣皂苷元（DG）降解Tau蛋白的作用机制。方法（1）将SH-SY5Y细胞分组为6组:对照组和5个浓度(5,10,15,20,25μg·mL-1)DG组,用DG处理24 h, MTT方法和平板克隆形成实验检测DG的毒性作用,依据毒性结果选择15μg&#... 详细信息

目的研究小分子药物薯蓣皂苷元（DG）降解Tau蛋白的作用机制。方法（1）将SH-SY5Y细胞分组为6组:对照组和5个浓度(5,10,15,20,25μg·mL-1)DG组,用DG处理24 h, MTT方法和平板克隆形成实验检测DG的毒性作用,依据毒性结果选择15μg·mL-1DG进行以下实验。（2）用15μg·mL-1DG组处理稳定表达GFP-LC3的NRK细胞12 h,激光共聚焦显微镜检测对照组、饥饿组、雷帕霉素组和DG组的自噬体数目,饥饿组为阳性1组。蛋白质印迹法检测对照组、雷帕霉素组、DG组的选择性自噬接头蛋白（p62）和微管相关蛋白轻链3（LC3）-II蛋白量,雷帕霉素组为阳性2组。（3）稳定表达Tau-GFP蛋白的HEK293细胞分为4组:对照组、强力霉素组(200 ng·mL-1DOX)、联合1组(200 ng·mL-1DOX+15μg·mL-1DG)和联合2组（DOX+DG+氯喹10 nmoL）,强力霉素组为模型组,通过激光共聚焦显微镜检测各组Tau-GFP蛋白荧光强度,蛋白质印迹法检测Tau-GFP和LC3-II蛋白表达。结果（1）对照组和由低到高5个浓度DG组细胞存活率分别为（100.00±1.31）%,（102.25±0.62）%,（101.14±0.20）%,（103.32±1.40）%,（100.32±0.15）%和（100.36±2.98）%,DG各组与对照组比较无明显差异。15μg·mL-1DG组对SH-SY5Y细胞活力没有影响。（2）稳定表达GFP-LC3的NRK细胞中,对照组、阳性1组和DG组自噬体数目为1.00±0.00,4.33±0.58和6.33±0.58。NRK细胞中,对照组、阳性2组、DG组p62蛋白相对表达量为0.97±0.03,0.39±0.03和0.60±0.05;LC3-II蛋白相对表达量为0.65±0.04,1.06±0.11和1.11±0.11。SH-SY5Y细胞中,对照组、阳性2组、DG组的p62蛋白相对表达量为1.47±0.22,0.91±0.10和0.85±0.05;LC3-II蛋白相对表达量为0.73±0.09,0.93±0.35和1.30±0.25。（3）HEK293细胞中,对照组、模型组、联合1组、联合2组中Tau-GFP蛋白相对表达量为0.66±0.28,1.58±0.06,1.18±0.12和1.63±0.15;LC3-II蛋白相对表达量为0.38±0.05,0.53±0.05,0.70±0.02和1.50±0.13。上述指标:对照组与DG组比较或与模型组比较,或对照组与联合1组比较或与联合2组比较,联合1组与模型组比较或与联合2组比较。差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 DG能够降解Tau蛋白,进而发挥神经保护作用,其机制或许是通过诱导细胞发生自噬达成的。

关键词：薯蓣皂苷元自噬阿尔茨海默病微管相关蛋白强力霉素

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SCN5A基因单核苷酸多态性位点H558R与慢型克山病合并高血压及其心电图特征的相关性研究

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中国地方病学杂志 2012年第4期31卷 377-380页

作者：姜山方传丰刘汉文舒畅程禾何娟李凤兰李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的研究克山病地区人群SCN5A基因单核苷酸多态性（SNP）位点H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心律失常发生之间的关系。方法2006—2010年，在黑龙江省齐齐哈尔市富裕县，选取39例慢型克山病合并高血压患者作... 详细信息

目的研究克山病地区人群SCN5A基因单核苷酸多态性（SNP）位点H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心律失常发生之间的关系。方法2006—2010年，在黑龙江省齐齐哈尔市富裕县，选取39例慢型克山病合并高血压患者作为病例组，63例高血压患者作为对照组，应用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析以及PCR直接测序技术。检测病例组与对照组人群SCN5A基因的Exon12SNP位点H558R，并检查病例组与对照组的心电图特征，采用病例对照研究分析方法分析H558R与慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者心电图特征之间的相关性。结果H558RTC基因型可能会降低慢型克山病合并高血压的发病风险[比值比（OR）=0．288，95％可信区间（a）：0．104～0．794，P=0．016]以及降低慢型克山病合并高血压患者发生QRS间期延长的风险（OR=0．061，95％CI：0．006～0．612，P=0．017）。结论SCN5A基因SNP位点H558R可能是慢型克山病合并高血压以及慢型克山病合并高血压患者发生QRS间期延长的易感因子。

关键词：克山病单核苷酸多态性 SCN5A基因心率失常

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硒代半胱氨酸合成蛋白基因表达对过氧化氢介导的内皮细胞EVC-304损伤的影响

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中华地方病学杂志 2014年第4期33卷 383-387页

作者：赵汉东孙美娜李凤兰李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS... 详细信息

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS高表达组，分别用0、200、400、600、800、1000μmol/L H2O2处理细胞6 h。转染后，用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞SEPSECS基因表达，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测各组细胞SEPSECS蛋白表达，流式细胞仪对各组细胞进行细胞周期检测。H2O2处理后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测各组细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果转染后对照组、SEPSECS 低表达组、空载体转染组、SEPSECS 高表达组 EVC-304细胞 SEPSECS mRNA 表达分别为1.03±0.24、0.43±0.11、0.98±0.27、1.61±0.13，SEPSECS 蛋白表达分别为1.00±0.26、0.51±0.10、1.12±0.38、1.51±0.20。其中SEPSECS低表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）；SEPSECS高表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与空载体转染组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）。转染后，各组细胞周期未见明显改变（P 均〉0.05）。经H2O2处理的各组EVC-304细胞MDA含量均随H2O2浓度的升高而升高。其中H2O2为800、1000μmol/L时，SEPSECS低表达组MDA含量[（15.8±0.5）、（19.6±1.5）μmol/L]明显高于对照组[（12.4±0.1）、（17.1±0.5）μmol/L，P均〈0.05]，SEPSECS高表达组MDA含量[（10.8±0.4）、（14.2±1.1）μmol/L]明显低于空载体转染组[（12.7±0.7）、（16.2±1.1）μmol/L，P均〈0.05]。经H2O2处理的各组EVC-304细胞SOD含量均随 H2O2浓度升高而降低，且 H2O2为800、1000μmol/L 时，SEPSECS 低表达组SOD 含量[（7.7±0.4）、（2.4±0.3）μmol/L]明显低于对照组[（10.0±1.0）、（6.0±0.6）μmol/L，P均〈0.05]， SEPSECS高表达组SOD含量[（11.3±0.6）、（12.7±1.6）μmol/L]明显高于空载体转染组[（9.2±0.6）、（6.7±0.2）μmol/L，P均〈0.05]。结论 SEPSECS基因表达对H2O2介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304具有保护作用，能够显著降低氧化应激所致的细胞损伤。

关键词：硒代半胱氨酸合成蛋白过氧化氢细胞培养技术

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氧化苦参碱对氧糖剥夺/复糖复氧损伤星形胶质细胞AMPK/mTOR途径及自噬的影响

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中国药理学通报 2023年第12期39卷 2331-2338页

作者：崔明宇卢金莹于露王宇彤边疆王高杨新霞杨菁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001

目的探讨AMPK/mTOR通路调节的自噬在氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)抑制氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion injury,OGD/R)对星形胶质细胞(astrocyte,AS)损伤中的作用。方法将分离纯化AS随机分为对照组(CON组)、模型组(OGD/R组)和OGD/R+OMT组(0.1、0.2、0.4 mmol·L^(-1))。MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342和Annexin V-FITC法检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;Western blot法检测p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、Beclin 1、LC3B、p62和β-actin的表达。同时通过加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)探究自噬在OMT药效中作用。结果与CON组相比,OGD/R组细胞存活率明显降低(P<0.01),细胞凋亡率及细胞内ROS生成明显增加(P<0.01),p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/Ⅰ的比值及Beclin 1含量升高(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值及p62含量降低(P<0.01)。与OGD/R组相比,OGD/R+OMT组细胞存活率明显升高(P<0.01),细胞凋亡率减少(P<0.01),细胞内ROS生成明显减低(P<0.01),p-AMPK/AMPK和LC3BⅡ/Ⅰ的比值降低(P<0.01),p-mTOR/mTOR比值及p62含量升高(P<0.01)。与OGD/R组相比,OGD/R+3-MA组细胞存活率明显提高(P<0.01),同时OGD/R+3-MA组存活率与OGD/R+OMT及OGD/R+OMT+3-MA组相比均有明显差异(P<0.01)。结论OMT对OGD/R诱导的AS具有保护作用,其中作用与抑制AMPK/mTOR信号通路及改善自噬有关。

关键词：氧化苦参碱氧糖剥夺/复糖复氧星形胶质细胞自噬氧化应激 AMPK/mTOR途径

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饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1与硒蛋白P表达的影响

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中华地方病学杂志 2013年第6期32卷 636-638页

作者：孙美娜赵汉东张一彤李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮... 详细信息

目的探讨饮食低硒对小鼠肝、肾、脑组织硒结合蛋白1（SBP1）和硒蛋白P（SelP）表达的影响。方法将C57BL／6小鼠按体质量随机分为4组：对照组和低硒4、12、24周组，每组10只，雌雄各半。对照组饲以普通饲料（含硒量为0．300mg／kg），饮用蒸馏水，第12周断颈处死；低硒各组饲以低硒饲料（含硒量为0．015mg／kg），分别于第4、12、24周时断颈处死。采用蛋白印迹（Western blot）法检测小鼠肝、肾、脑组织SBPl与SelP蛋白表达。结果低硒4、12、24周组小鼠肝组织中SBP1和SelP蛋白表达分别为0．11±0．01、0．36±0．01、0．59±0．02和0．41±0．01、0．39±0．02、0．25±0．02；肾脏组织中分别为0．60±0．03、0．20±0．02、0．03±0．01和O．88±0．01、0．73±0．03、0．85±0．02；脑组织中分别为0．54±0．03、0．11±0．01、0．01±0．01和0．50±0．02、0．49±0．03、0．38±0．02。低硒各组小鼠肝脏、肾脏、脑组织SBP1、SelP蛋白表达与对照组（1．00±0．00、1．00±0．00）比较明显降低（P均〈0．05），其中各脏器中SBPI的表达量随低硒喂养时间的延长各有不同．肝脏先降低后回升，肾脏和脑组织则持续降低。结论低硒饮食对小鼠肝、肾、脑组织内SelP和SBP1的表达量有一定的影响．

关键词：硒硒结合蛋白1 硒蛋白P

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低硒对小鼠心肌钾离子通道基因mRNA表达的影响．

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中华地方病学杂志 2014年第1期33卷 46-48页

作者：孙美娜李凤兰赵汉东李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的研究钾离子通道基因mRNA在低硒小鼠心肌组织中的表达。方法C57BL／6小鼠40只，雌雄各半，体质量18～22g，按体质量随机分为4组，每组10只小鼠（雌雄各半），其中低硒4周组、12周组、24周组分别采用低硒饲料（硒含量为0．004mg／kg... 详细信息

目的研究钾离子通道基因mRNA在低硒小鼠心肌组织中的表达。方法C57BL／6小鼠40只，雌雄各半，体质量18～22g，按体质量随机分为4组，每组10只小鼠（雌雄各半），其中低硒4周组、12周组、24周组分别采用低硒饲料（硒含量为0．004mg／kg）喂养4周、12周、24周，对照组则给予正常饲料（硒含量为0．256mg／kg）。将各组小鼠断颈处死，取小鼠心脏，Trizol法提取RNA，采用实时荧光定量PCR（reM—timePCR）方法检测钾离子通道基因（KCNA4、KCND2、KCND3、KCNEl、KCNE2、KCNJ2、KCNJl2、KCNQl）mRNA的表达。结果低硒4周组钾离子通道基因KCNA4、KCND2mRNA[（25．3±0．09）、（4．85±0．05）]表达高于对照组（1．00±0．00、1．00±0．00，P均〈0．05）；低硒24周组钾离子通道基因KCNJl2mRNA（22．7±0．10）表达高于对照组（P〈0．05）；KCND3、KCNEl、KCNE2、KCNJ2、KCNQlmRNA表达与对照组比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。结论低硒能够影响小鼠心肌钾离子通道基因的表达。

关键词：硒小鼠钾离子通道

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RNA结合蛋白人抗原R在人脂肪细胞分化中的作用

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中华内分泌代谢杂志 2017年第10期33卷 854-860页

作者：张丹梁小弟努尔比耶·努尔麦麦提刘玲孟轩羽刘杰焦谊陆剑飞关亚群新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830011

目的通过检测RNA结合蛋白人抗原R（HuR）与脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（FABP4）、脂肪酸合成酶（FASN）、脂蛋白脂肪酶（LPL）在人脂肪细胞分化过程中的表达变化，并探讨其作用。方法对人脂肪源性间充质干细胞进行成脂诱导分化，油红O染... 详细信息

目的通过检测RNA结合蛋白人抗原R（HuR）与脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（FABP4）、脂肪酸合成酶（FASN）、脂蛋白脂肪酶（LPL）在人脂肪细胞分化过程中的表达变化，并探讨其作用。方法对人脂肪源性间充质干细胞进行成脂诱导分化，油红O染色观察细胞成脂情况，分别以实时定量PCR和Western印迹检测HuR、FABP4、FASN、LPL mRNA和蛋白表达水平的变化；siRNA干扰HuR后，进一步观察细胞成脂变化和成脂相关基因的表达水平。结果人脂肪源性间充质干细胞在成脂诱导分化过程中HuR、FABP4、FASN和LPL的mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高（均P〈0.01）。干扰HuR表达后，细胞成脂水平干扰组较对照组下降，FABP4、FASN、LPL mRNA表达水平无明显变化，而其蛋白表达水平均显著下调（均P〈0.05）。结论HuR主要通过调节FABP4、FASN和LPL蛋白水平的变化影响成脂，促进人脂肪细胞的分化。

关键词：脂肪细胞分化 RNA结合蛋白人抗原R 脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白脂肪酸合成酶脂蛋白脂肪酶

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