检索结果-内蒙古大学图书馆

中国临床药理学杂志 2021年第17期37卷 2290-2294页

作者：张瑜伊力亚斯·艾萨雷秀英陈倩西仁阿依·西热甫冯学召席庆袁芳新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的研究小分子药物薯蓣皂苷元（DG）降解Tau蛋白的作用机制。方法（1）将SH-SY5Y细胞分组为6组:对照组和5个浓度(5,10,15,20,25μg·mL-1)DG组,用DG处理24 h, MTT方法和平板克隆形成实验检测DG的毒性作用,依据毒性结果选择15μg&#... 详细信息

目的研究小分子药物薯蓣皂苷元（DG）降解Tau蛋白的作用机制。方法（1）将SH-SY5Y细胞分组为6组:对照组和5个浓度(5,10,15,20,25μg·mL-1)DG组,用DG处理24 h, MTT方法和平板克隆形成实验检测DG的毒性作用,依据毒性结果选择15μg·mL-1DG进行以下实验。（2）用15μg·mL-1DG组处理稳定表达GFP-LC3的NRK细胞12 h,激光共聚焦显微镜检测对照组、饥饿组、雷帕霉素组和DG组的自噬体数目,饥饿组为阳性1组。蛋白质印迹法检测对照组、雷帕霉素组、DG组的选择性自噬接头蛋白（p62）和微管相关蛋白轻链3（LC3）-II蛋白量,雷帕霉素组为阳性2组。（3）稳定表达Tau-GFP蛋白的HEK293细胞分为4组:对照组、强力霉素组(200 ng·mL-1DOX)、联合1组(200 ng·mL-1DOX+15μg·mL-1DG)和联合2组（DOX+DG+氯喹10 nmoL）,强力霉素组为模型组,通过激光共聚焦显微镜检测各组Tau-GFP蛋白荧光强度,蛋白质印迹法检测Tau-GFP和LC3-II蛋白表达。结果（1）对照组和由低到高5个浓度DG组细胞存活率分别为（100.00±1.31）%,（102.25±0.62）%,（101.14±0.20）%,（103.32±1.40）%,（100.32±0.15）%和（100.36±2.98）%,DG各组与对照组比较无明显差异。15μg·mL-1DG组对SH-SY5Y细胞活力没有影响。（2）稳定表达GFP-LC3的NRK细胞中,对照组、阳性1组和DG组自噬体数目为1.00±0.00,4.33±0.58和6.33±0.58。NRK细胞中,对照组、阳性2组、DG组p62蛋白相对表达量为0.97±0.03,0.39±0.03和0.60±0.05;LC3-II蛋白相对表达量为0.65±0.04,1.06±0.11和1.11±0.11。SH-SY5Y细胞中,对照组、阳性2组、DG组的p62蛋白相对表达量为1.47±0.22,0.91±0.10和0.85±0.05;LC3-II蛋白相对表达量为0.73±0.09,0.93±0.35和1.30±0.25。（3）HEK293细胞中,对照组、模型组、联合1组、联合2组中Tau-GFP蛋白相对表达量为0.66±0.28,1.58±0.06,1.18±0.12和1.63±0.15;LC3-II蛋白相对表达量为0.38±0.05,0.53±0.05,0.70±0.02和1.50±0.13。上述指标:对照组与DG组比较或与模型组比较,或对照组与联合1组比较或与联合2组比较,联合1组与模型组比较或与联合2组比较。差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 DG能够降解Tau蛋白,进而发挥神经保护作用,其机制或许是通过诱导细胞发生自噬达成的。

关键词：薯蓣皂苷元自噬阿尔茨海默病微管相关蛋白强力霉素

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香草酸通过诱导自噬缓解HepG2细胞脂肪变性

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中国临床药理学杂志 2021年第19期37卷 2622-2626页

作者：陈倩伊力亚斯·艾萨雷秀英张瑜冯学召西仁阿依·西热甫米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆医科大学药学院药理学教研室新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆医科大学基础医学院病理与病理生物学教研室新疆医科大学药学院生药学教研室新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院

目的研究自噬在香草酸（VA）缓解肝细胞脂肪变性中的作用。方法将HepG2细胞分为空白组（不含药物的完全培养基）、阳性对照组(50 nmol·L-1西罗莫司)和低、中、高剂量实验组(25,50,100μmol·L-1VA),作用时间12 h。用蛋白质印... 详细信息

目的研究自噬在香草酸（VA）缓解肝细胞脂肪变性中的作用。方法将HepG2细胞分为空白组（不含药物的完全培养基）、阳性对照组(50 nmol·L-1西罗莫司)和低、中、高剂量实验组(25,50,100μmol·L-1VA),作用时间12 h。用蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3B（LC3Ⅱ）和泛素结合蛋白P62（P62）表达水平的变化,探究VA诱导自噬的作用。用VA单独或联合100 nmol·L-1巴弗洛霉素A1（BafA1）处理Hep G2细胞12 h,实验分为空白组（不含药物的完全培养基）、对照A组(100 nmol·L-1BafA1)、对照B组(50μmol·L-1VA)和实验组(50μmol·L-1VA+100 nmol·L-1Baf A1)。用蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ蛋白表达水平的变化,探究VA对自噬流的影响。用VA单独或联合3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预棕榈酸（PA）诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,将细胞分为空白组（不含药物的完全培养基）、模型组(100μmol·L-1PA)、对照组(100μmol·L-1PA+50μmol·L-1VA)和实验组(100μmol·L-1PA+50μmol·L-1VA+5 mmol·L-13-MA),作用时间24 h。用比色法检测细胞内三酰甘油（TG）的含量,用蛋白质印迹法检测脂滴包被蛋白3（Perilipin3）表达水平的变化。结果在探究VA诱导自噬的研究中,空白组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组的LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.53±0.08,0.93±0.31,0.89±0.22,0.96±0.24和0.92±0.14,P62蛋白相对表达量分别为1.47±0.16,0.96±0.17,1.07±0.06,0.76±0.07和0.63±0.12;空白组的上述指标与中、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义（均P <0.05）。在探究VA对自噬流的影响中,空白组、对照A组、对照B组和实验组LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.40±0.12,0.87±0.14,0.67±0.07和1.13±0.11;实验组与对照A组、对照B组的上述指标和空白组比较,差异均有统计学意义（均P <0.05）。在脂肪变性模型中,空白组、模型组、对照组和实验组细胞中TG相对含量分别为0.70±0.16,1.34±0.11,1.07±0.03和1.33±0.14,Perilipin3蛋白相对表达量分别为0.61±0.14,1.24±0.19,0.72±0.03和1.03±0.21;模型组的上述指标与空白组和对照组比较,或实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义（均P <0.05）。结论香草酸通过诱导自噬,从而缓解PA诱导的HepG2细胞脂肪变性。

关键词：香草酸棕榈酸脂肪变性细胞自噬

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抑制Gprc6a基因对染氟睾丸间质细胞睾酮生成功能的影响

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解放军医学院学报 2024年第10期45卷 1048-1053页

作者：赵雨欣赵嘉乐陈邬锦李秀梅许彭秦培钢白生宾新疆医科大学基础医学院形态中心新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学第二临床医学院新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室新疆乌鲁木齐830000

背景氟化物从多种途径诱导异常成骨细胞活化,促进骨钙素(osteocalcin,OCN)表达,过量氟会降低睾丸间质细胞中睾酮的产生,睾丸间质细胞中表达的骨钙素特异性受体Gprc6a与骨钙素结合能够调节睾酮的生物合成。目的探究Gprc6a基因对NaF干... 详细信息

背景氟化物从多种途径诱导异常成骨细胞活化,促进骨钙素(osteocalcin,OCN)表达,过量氟会降低睾丸间质细胞中睾酮的产生,睾丸间质细胞中表达的骨钙素特异性受体Gprc6a与骨钙素结合能够调节睾酮的生物合成。目的探究Gprc6a基因对NaF干预睾丸间质细胞睾酮生成的影响。方法采用正常小鼠睾丸间质TM3细胞系和Gprc6a^(-/-)TM3细胞系,分为TM3组、Gprc6a^(-/-)TM3组、TM3 (NaF)组、Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)组、TM3 (NaF)+OCN组、Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组,检测各组细胞活性,并在干预48 h时,以倒置荧光显微镜观察其细胞形态,荧光定量PCR检测Creb、Star、Cyp11a1和3β-HSD基因转录的表达,酶联免疫检测细胞分泌睾酮的表达。结果 MTT法检测细胞增殖活性显示Gprc6a^(-/-)TM3各实验组较TM3相应各组细胞活性减弱(P<0.05),TM3 (NaF)+OCN和Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组细胞较TM3 (NaF)组细胞活性增强;荧光显微镜下观察到Gprc6a抑制仅影响TM3细胞增殖数量,不影响细胞形态,单一NaF刺激后,Gprc6a^(-/-)TM3细胞更易脱壁,部分细胞回缩明显;荧光定量PCR检测基因显示,与TM3 (NaF)组相比,Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)组Creb、Star、Cyp11a1基因表达下调(P=0.032);与TM3 (NaF)+OCN组相比,Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组Creb、Star、Cyp11a1、3β-HSD基因表达下调(P=0.029);与Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)组相比,Gprc6a^(-/-)TM3 (NaF)+OCN组Star、Cyp11a1、3β-HSD基因表达上调(P=0.012);加入OCN干预后,原本被抑制的Gprc6a基因表达上调(P=0.010)。酶联免疫法检测细胞分泌睾酮表达结果显示,正常培养时,Gprc6a^(-/-)TM3组睾酮量分泌少于TM3组(P=0.004);NaF刺激后,各组细胞睾酮分泌量减少(P=0.001);NaF+OCN刺激,TM3组睾酮分泌量回升(P=0.003);Gprc6a^(-/-)TM3细胞与同种刺激的TM3组细胞相比睾酮分泌量降低(P=0.007)。结论抑制Gprc6a基因会促进过量氟诱导的睾丸间质细胞睾酮生成减少;Gprc6a参与过量氟-骨钙素对睾丸间质细胞生成睾酮的调控。

关键词： Gprc6a 氟化钠睾丸间质细胞睾酮骨钙素氟中毒

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基于转录组学分析昆布多糖对C57BL/6小鼠非增生性糖尿病视网膜病变的影响

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安徽医科大学学报 2025年第3期60卷 392-398页

作者：张蕾张素梅杨振胡韦康白红枚周文静王子涵李名聪张胜权廖荣丰安徽医科大学第一附属医院眼科安徽医科大学附属阜阳市人民医院眼科安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室安徽医科大学附属合肥医院(合肥市第二人民医院)病理科

目的采用高通量测序技术(RNA-seq)探讨昆布多糖(LAM)对非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型，观察LAM对糖尿病小鼠的影响。将C57BL/6小鼠随机分为对照(Control)、模型(Model)、昆... 详细信息

目的采用高通量测序技术(RNA-seq)探讨昆布多糖(LAM)对非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立糖尿病模型，观察LAM对糖尿病小鼠的影响。将C57BL/6小鼠随机分为对照(Control)、模型(Model)、昆布多糖治疗(LAM)组，每组8只小鼠。在建模8周后，LAM组接受为期4周的LAM腹腔注射治疗。记录3组小鼠血糖体质量变化，HE染色检查视网膜病变情况，采用RNA-seq挖掘STZ及LAM作用下糖尿病视网膜病变(DR)的关键差异基因(DEGs)。结果使用STZ可以成功建立DR模型，而LAM可以在一定程度上降低糖尿病小鼠血糖并改善糖尿病小鼠视网膜结构疏松的病理形态。经过RNA-seq对DEG挖掘发现与Control组相比，Model组小鼠视网膜共有214个DEGs,通过富集分析发现DR可通过PI3K-Akt信号通路加重病变程度。Model组与LAM组小鼠视网膜共有DEGs 42个，富集后显示LAM通过中性粒细胞胞外陷阱通路改善其病变程度。早期生长反应因子1 (Egr1),FBJ骨肉瘤致癌基因(Fos),核受体亚家族4A成员1(Nr4a1),盐诱导激酶1 (Sik1)受STZ调节，而LAM能显著回调其表达，可能与LAM对糖尿病视网膜病变的治疗密切相关。结论 DEG可通过PI3K-Akt信号通路加重糖尿病视网膜病变程度。LAM可以通过中性粒细胞胞外陷阱通路减轻糖尿病视网膜病变，Egr1、Fos、Nr4a1、Sik1是LAM治疗STZ诱导DR的关键基因。

关键词：高通量测序昆布多糖糖尿病视网膜病变 C57BL/6

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诱导小鼠白色脂肪来源的SVF分化为米色脂肪细胞的方法初探

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现代生物医学进展 2023年第10期23卷 1822-1828页

作者：蒋硕陈思远孟轩羽刘迪晖梁小弟新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院机能中心新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属肿瘤医院病理科新疆乌鲁木齐830011

目的:探究将小鼠白色脂肪来源的SVF细胞诱导为米色脂肪细胞的方法,为米色脂肪的研究提供细胞模型。方法:分离培养小鼠脂肪组织来源的SVF细胞,观察其细胞形态及生长特性,分别用鸡尾酒法和米色脂肪诱导法处理细胞,在诱导的第0、2、4、6、8... 详细信息

目的:探究将小鼠白色脂肪来源的SVF细胞诱导为米色脂肪细胞的方法,为米色脂肪的研究提供细胞模型。方法:分离培养小鼠脂肪组织来源的SVF细胞,观察其细胞形态及生长特性,分别用鸡尾酒法和米色脂肪诱导法处理细胞,在诱导的第0、2、4、6、8、10天收取细胞样品进行Western blot和RT-qPCR实验,油红O染色观察不同时间点培养皿中的脂质生成情况,并对针对脂滴大小定量。结果:实验分离的SVF细胞随着接种时间的延长逐渐呈长梭形,在+接种120 h后有呈螺旋式生长的趋势。Western blot和RT-qPCR结果显示两种诱导方法皆使过氧化物酶体增殖物受体γ(Peroxisomeproliferator activated receptor γ,PPARγ)和CCAAT-增强子结合蛋白(CCAAT/enhancer binding proteins α,C/EBPα)基因表达升高(P<0.05),油红O染色结果显示,在两种方法的诱导下,脂质生成水平无差异,但与鸡尾酒法相比,米色脂肪诱导法的脂肪细胞脂滴面积明显减少(P<0.05),并且小体积脂滴所占百分比较高。Western blot和RT-qPCR结果显示,与鸡尾酒法相比,米色脂肪诱导法使解偶联蛋白1(Uncoupling protein 1,UCP1)和含PR结构域蛋白16(PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16,PRDM16)基因表达升高(P<0.05)。结论:与鸡尾酒法相比,该方法能够成功诱导SVF细胞向米色脂肪细胞分化,脂滴具备米色脂肪特征,并表达米色脂肪标记基因。

关键词： SVF细胞米色脂肪细胞 UCP1 PRDM16 鸡尾酒诱导法

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p62体募集自噬相关蛋白WIPI2的机制研究

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新疆医科大学学报 2024年第5期47卷 668-674页

作者：张金佩冯学召刘梦薇何心瞳徐梦波阿来依·买提卡比力麦尔哈巴·达毛拉衡锐米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学重点实验室乌鲁木齐830017 中山大学肿瘤防治中心广东510060 新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830054

目的探讨自噬接头蛋白(Sequestosome 1,SQSTM1/p62)与磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositide 3-kinase,PI3K)复合物的结合蛋白WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2(WD repeat domain phosphoinositide-interacting protein 2,WIPI2)在空间上定位的调控关系。方法使用CRISPR-Cas9技术敲除正常大鼠肾上皮细胞(Normal rat kidney,NRK)中的自噬相关基因2A(Autophagy-related gene,Atg2A)、自噬相关基因2B(Autophagy-related gene,Atg2B)和p62基因,建立Atg2A和Atg2B基因敲除的细胞系(Atg2AB double knockout,Atg2AB DKO)以及p62基因敲除细胞系(p62 knockout,p62 KO);透射电镜观察Atg2AB DKO细胞中p62体周围囊泡的定位;活细胞成像观察Atg2AB DKO细胞内p62体与自噬相关蛋白WIPI2的定位变化;光漂白实验观察相变蛋白p62与WIPI2的荧光漂白恢复;通过免疫荧光观察WT、p62 KO和Atg2AB DKO细胞中WIPI2与p62的定位关系;通过蛋白免疫印记检测WT和p62 KO细胞中WIPI2表达量的变化。结果建立了Atg2AB DKO和p62 KO细胞系;透射电镜显示Atg2AB DKO细胞中p62附近聚集了大量囊泡;在Atg2AB DKO中,通过活细胞成像观察到tdTomatop62与WIPI2-GFP高度共定位;荧光漂白实验观察到WIPI2具有流动性;通过免疫荧光观察到,与WT细胞相比,在Atg2AB DKO中WIPI2点的数量明显增多(P<0.0001);与WT细胞相比,p62 KO细胞中WIPI2点的数量和表达量无明显变化(P>0.05)。结论无膜细胞器p62能够与具有流动性的WIPI2阳性囊泡动态融合,促进自噬体的形成。

关键词：自噬体自噬接头蛋白 WD重复结构域磷酸肌醇互作蛋白2

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二肽基肽酶-4在泡球蚴感染致肝纤维化中的作用研究

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中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 47-51页

作者：努尔拜提·库苏曼木克西娜·木拉提毕晓娟杨宁楚瑨刘辉房彬彬吕国栋李亮张雪孙立林仁勇新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室

目的明确二肽基肽酶-4(DPP4)在泡球蚴感染所致肝纤维化中的作用。方法取泡球蚴不同感染时期(1、3、6个月)小鼠肝脏组织,HE染色检查肝脏组织病理学变化,天狼星红染色法检测肝纤维化程度,免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和... 详细信息

目的明确二肽基肽酶-4(DPP4)在泡球蚴感染所致肝纤维化中的作用。方法取泡球蚴不同感染时期(1、3、6个月)小鼠肝脏组织,HE染色检查肝脏组织病理学变化,天狼星红染色法检测肝纤维化程度,免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和DPP4的表达,采用相关分析法分析DPP4蛋白表达水平与肝纤维化的相关性。小鼠肝星状细胞(JS1),经60μg/ml泡球蚴蛋白(EmP)刺激后采用实时荧光定量PCR检测DPP4、α-SMA、COL1A1、TIMP1、MMP2的mRNA表达水平。结果与对照组比较组,模型组小鼠感染泡球蚴后1、3、6个月α-SMA表达上调(阳性面积分别为3.521±0.8862、7.846±0.9873、15.34±0.6263)(均P<0.05),且呈时间依赖;天狼星红染色病灶旁纤维组织阳性面积增加(阳性面积分别为56979±9550、69844±763.8、82687±13774)(均P<0.05),且呈时间依赖;DPP4表达上调(阳性面积分别为5038±201.2、6110±174.4、9021±697.4)(均P<0.05),且呈时间依赖。泡球蚴感染小鼠DPP4表达水平与α-SMA相对表达量呈正相关(R^(2)=0.9166,P<0.05),与天狼星红阳性区域面积呈正相关(R^(2)=0.5368,P<0.05)。泡球蚴蛋白刺激小鼠肝星状细胞系JS1,肝星状细胞活化标志物α-SMA、COL1a1、TIMP1、MMP2 mRNA表达上调,DPP4的mRNA也随之上调(均P<0.05)。结论 DPP4参与泡球蚴感染所致肝纤维化过程并随纤维化加重表达上调,为阐明泡型棘球蚴病的致病机制和寻找新的治疗靶点奠定了基础。

关键词：多房棘球蚴二肽基肽酶-4 肝纤维化

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细粒棘球蚴重组蛋白EgG1Y162诱导表达条件的优化及其蛋白结构预测

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新疆医科大学学报 2025年第4期48卷 426-431页

作者：陈娜菲李小坡马西智彭学臻曹春宝周晓涛新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆地方病分子生物学重点实验室乌鲁木齐830017

目的探索优化重组质粒pET30a-EgG1Y162表达条件并预测其蛋白结构模型。方法通过使用EgG1Y162原始菌种进行诱导表达,探索不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,sopropylβ-D-Thiogalactoside)、孵育时间对EgG1Y162蛋白诱导表达水平的影响。... 详细信息

目的探索优化重组质粒pET30a-EgG1Y162表达条件并预测其蛋白结构模型。方法通过使用EgG1Y162原始菌种进行诱导表达,探索不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,sopropylβ-D-Thiogalactoside)、孵育时间对EgG1Y162蛋白诱导表达水平的影响。原始菌种经诱导表达后,通过超声处理离心得到细菌裂解液上清与沉淀,利用SDS-PAGE分析上清和沉淀中EgG1Y162重组蛋白的表达情况,分析最佳诱导表达条件;纯化蛋白,且通过Western blot鉴定抗原蛋白的表达;利用生物信息学技术预测EgG1Y162蛋白的空间结构模型。结果EgG1Y162蛋白在28℃,IPTG终浓度为0.2 mmoL/L,诱导6 h条件下的表达量较高,蛋白相对分子质量约为25 kDa;用HisTrap纯化柱纯化蛋白,EgG1Y162蛋白在20 mmol/L咪唑浓度的洗脱下,洗脱效果较佳,可获取大量纯化蛋白;纯化蛋白能被鼠抗His-Tag抗体识别,与预期结果相符;生物信息学预测结果显示该蛋白中β折叠占5.00%,无规则卷曲占50.83%,成功构建出EgG1Y162蛋白三级结构模型。结论通过统计学方法获得了重组蛋白EgG1Y162的最佳诱导表达及纯化条件,预测了该蛋白的空间结构,为后续大量获得细粒棘球蚴疫苗抗原蛋白EgG1Y162,进而用于研究其免疫效果与免疫机制创造了条件。

关键词：细粒棘球蚴 EgG1Y162 原核表达条件优化生物信息学

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小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1介导Foxp1 mRNA降解机制初探

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新疆医科大学学报 2023年第3期46卷 285-293页

作者：刘迪晖梁小弟蒋硕孟轩羽赵炳尧关亚群新疆医科大学基础医学院、生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830017 新疆医科大学基础医学院机能中心乌鲁木齐830017

目的探究小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1对Foxp1 mRNA转录后的调控作用。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,采用鸡尾酒法诱导其分化为成熟脂肪细胞,分别收取第0天和第4天样本进行RNA测序筛选出差异倍数(FC)>2的转录因子;提取第0、1、2、3... 详细信息

目的探究小鼠前脂肪细胞分化过程中STAU1对Foxp1 mRNA转录后的调控作用。方法培养3T3-L1前脂肪细胞,采用鸡尾酒法诱导其分化为成熟脂肪细胞,分别收取第0天和第4天样本进行RNA测序筛选出差异倍数(FC)>2的转录因子;提取第0、1、2、3、4天细胞总RNA进行实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验验证。RBPDB数据库预测Foxp1的RNA结合蛋白。转染空载体质粒和STAU1过表达质粒后将细胞分为对照组和STAU1过表达组,提取第0、12、24、36、48小时细胞总RNA。利用RT-qPCR及Western-Blot实验检测两组3T3-L1细胞STAU1过表达效率、分化过程中Foxp1的mRNA和蛋白质表达水平。10只雄性2~3周龄C57BL/6小鼠的腹股沟白色脂肪组织(inguinal white adipose tissue, iWAT)分离培养的血管基质部分(Stromal vascular fraction, SVF)细胞,鸡尾酒法诱导分化,感染慢病毒,利用免疫荧光实验检测SVF细胞中Foxp1的蛋白质表达水平,用catRAPID软件进行预测。RNA免疫共沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation, RIP)实验检测STAU1与Foxp1 mRNA 3′非翻译区(3′un-translated region, 3′UTR)STAU1结合位点(Staufen binding site, SBS)的结合情况。转染质粒24 h后加入放线菌素D,提取第0、1、2、4、6、8小时细胞总RNA,利用RT-qPCR实验检测两组3T3-L1细胞STAU1对Foxp1 mRNA稳定性的影响。结果经RNA-seq筛选出5个表达上调和5个表达下调的转录因子;RT-qPCR验证结果显示,在成脂过程中Foxp1 mRNA的表达逐渐下降,Pparγ mRNA的表达逐渐上调;RBPDB数据库结果显示,STAU1是Foxp1的RNA结合蛋白;与对照组比较,STAU1过表达组STAU1的mRNA和蛋白质表达水平显著升高(P<0.05),Foxp1的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,与对照组比较,STAU1过表达组中Foxp1相对荧光强度降低(P<0.05);RNA免疫沉淀实验后的PCR验证结果显示,STAU1与Foxp1 mRNA 3′UTR的6 714~7 000 bp存在结合;与对照组比较,STAU1过表达组Foxp1的mRNA稳定性显著下降(P<0.05)。结论 STAU1通过结合在Foxp1 mRNA 3′UTR上,启动STAU1介导的mRNA降解途径(Staufen-mediated decay, SMD)降解其mRNA,下调Foxp1的mRNA表达水平。

关键词： Foxp1 STAU1 小鼠前脂肪细胞转录后调控 mRNA降解机制

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慢性间歇性缺氧诱导海马组织炎症致小鼠短期记忆损伤

引用

现代生物医学进展 2024年第21期24卷 4047-4053页

作者：朱璐斯依提·阿木提郭浩强张珍连马丽娟姚巧玲新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室/新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院生理学教研室/新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830000

目的:探讨慢性间歇性缺氧(CIH)对雄性小鼠短期记忆的影响及其可能机制。方法:8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(RA)和间歇性缺氧组(CIH)。RA组小鼠不予任何处理,常规饲养;9 a.m.-9 p.m.将CIH组小鼠放入缺氧箱,给与间歇性缺氧刺激... 详细信息

目的:探讨慢性间歇性缺氧(CIH)对雄性小鼠短期记忆的影响及其可能机制。方法:8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(RA)和间歇性缺氧组(CIH)。RA组小鼠不予任何处理,常规饲养;9 a.m.-9 p.m.将CIH组小鼠放入缺氧箱,给与间歇性缺氧刺激,氧分压在7%-21%范围内循环,每分钟为一个循环,每小时60个循环,12 h/天,为期4周。实验前后测量小鼠体重,通过旷场试验(OFT)和新物体识别试验(NORT)分别检测小鼠自主运动能力和小鼠短期记忆水平;尼氏染色观察小鼠海马组织神经元变化;免疫荧光染色检测小鼠海马CA1区星形胶质细胞激活情况;qRT-PCR检测小鼠海马组织GFAP变化;Elisa检测小鼠海马组织TNFα,IL-6,IL-1β水平。结果:间歇性缺氧4周,RA组小鼠平均体重明显高于CIH组,差异有统计学意义(P=0.002);OFT结果显示,RA和CIH组小鼠总运动路程(P=0.3156)和运动速度无明显差异(P=0.3157);NORT训练期两组小鼠识别指数无明显差异(P=0.1596),NORT测试期CIH小鼠识别指数显著低于RA组(P=0.0063);尼氏染色显示CIH小鼠海马区神经元稀疏,尼氏体着色淡;免疫荧光染色显示CIH组小鼠海马CA1区GFAP阳性面积高于RA组(P=0.0223);qRT-PCR结果显示CIH组小鼠海马GFAP表达显著高于RA组(P=0.0175);Elisa检测结果显示与RA组相比,CIH小鼠海马组织TNFα(P=0.02),IL-6(P=0.0492),IL-1β(P=0.0473)水平明显增高。结论:慢性间歇性缺氧4周可能通过诱导海马区炎症致小鼠短期记忆损伤。

关键词：阻塞型睡眠呼吸暂停综合征慢性间歇性缺氧短期记忆海马星形胶质细胞炎症

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