目的观察复合骨即重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)/异体骨不同时间点融合骨组织中BMP.2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。方法将新西兰大白兔60只随机分为3组,在L5、L6横突间行后路植骨融合术,分别植入复合骨条、自体骨条及异体骨条,于术后第1、2、3、4、5周取融合标本,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)分析内源性BMP-2和VEGF基因水平的变化。结果术后第3周,复合骨组BMP-2为(5.3519±1.0384),VEGF为(0.9257±0.2534),均达到峰值且高于异体骨组和自体骨组(P<0.05),之后则缓慢下降。第4周后,内源性BMP-2表达仍保持较高水平,但VEGF的水平与自体骨组和异体骨组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复合骨能有效地诱导内源性BMP-2和VEGF的表达,促进了成骨效应。
目的探讨下调RACK1表达对子宫颈癌ME180细胞的脂质合成及迁移、侵袭和增殖的影响。方法qRT-PCR法检测子宫颈癌组织和细胞以及正常子宫颈组织和细胞中RACK1的mRNA表达水平,随后利用Western blot法检测RACK1蛋白表达;BODIPY染色观察H8、ME180和SiHa细胞中脂滴含量。采用慢病毒转染技术构建RACK1干扰稳转细胞株,利用qRT-PCR法及Western blot法验证敲降效果。qRT-PCR法检测组织和细胞中脂肪酸合成关键基因FASN和ACC1的表达,Western blot法检测FASN和ACC1的蛋白表达;BODIPY染色和电镜观察脂滴含量变化;采用柠檬酸、脂肪酸试剂盒检测子宫颈癌ME180细胞中柠檬酸及脂肪酸含量;将shRACK1-ME180组细胞进行油酸(OA)处理后,Transwell观察OA处理前后细胞的侵袭及转移能力;平板克隆实验检测细胞增殖情况。结果子宫颈癌组织中RACK1 mRNA表达(2.38±1.78)高于正常子宫颈组织(0.43±0.47)(P<0.001);子宫颈癌细胞ME180与SiHa中RACK1的mRNA(1.67±0.05、1.39±0.08)及蛋白(1.58±0.08、1.32±0.08)表达均高于H8细胞(1.00±0.03、0.41±0.08)(P均<0.05),且ME180细胞中的表达最高;ME180细胞内脂滴含量(1.10±0.15)较SiHa细胞(0.36±0.21)丰富,且2株子宫颈癌细胞内脂质含量均高于H8细胞(0.15±0.01)(P<0.05);子宫颈癌组织中FASN(2.98±1.53)和ACC1(2.41±1.25)mRNA表达量显著高于正常子宫颈组织(0.85±0.37、0.69±0.28)(P<0.05),且RACK1 mRNA表达与FASN和ACC1 mRNA表达呈正相关(r=0.693,P<0.001;r=0.752,P<0.001);shRACK1-ME180组FASN(0.28±0.02 vs 1.00±0.01)和ACC1表达(0.24±0.03 vs 1.00±0.01)及细胞内脂质(0.62±0.09 vs 1.09±0.16)、脂肪酸(0.94±0.07 vs 2.13±0.27)及柠檬酸(3.46±0.77 vs 5.89±0.47)含量均低于shNON-ME180组(P均<0.05);且shRACK1-ME180组细胞侵袭、迁移及增殖能力显著下降(P<0.001)。经OA处理后,shRACK1-ME180组细胞侵袭、迁移及增殖能力恢复,且与shNON-ME180组相近。结论下调RACK1表达干扰子宫颈癌ME180细胞脂质合成,抑制细胞侵袭、迁移及增殖能力,为探究子宫颈癌的发生、发展提供理论依据。
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