检索结果-内蒙古大学图书馆

siRNA特异性干扰EgRad9基因表达对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2018年第4期36卷 343-349页

作者：郑璇卢帅赵军吕国栋文丽梅李亚芬田春艳王建华新疆医科大学药学院乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院药学部临床药学科乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室乌鲁木齐830054

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)特异性干扰Eg Rad9基因表达后对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将Eg Rad9-si RNA干扰序列和阴性对照干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为Eg Rad9-si RNA-... 详细信息

目的研究小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)特异性干扰Eg Rad9基因表达后对细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤机制的影响。方法利用电穿孔法将Eg Rad9-si RNA干扰序列和阴性对照干扰序列转染细粒棘球蚴原头节,实验分为Eg Rad9-si RNA-354、-614、-971干扰组,阴性对照组和空白对照组。电转染3 d后,加入自然状态下原头节最大耐受浓度的H_2O_2处理1 h,伊红染液染色后,倒置荧光显微镜下观察原头节活性并计算存活率。收集各组原头节的培养液,进行碱性磷酸酶活性的检测。电转染3 d后,加入自然状态下原头节耐受H_2O_2的最大耐受浓度处理1 h后,TRIzol法提取总RNA。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测Eg Rad9m RNA的表达。采用彗星实验检测干扰Eg Rad9基因表达后细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤情况,活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测干扰Eg Rad9基因表达后细粒棘球蚴原头节体内ROS的含量,采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析。结果自然状态下细粒棘球蚴原头节体外耐受H_2O_2的最大浓度为0.4 mmol/L,干预时间为1 h;电穿孔法可将绿色荧光干扰序列有效的导入原头节体内,实验组和阴性对照组的原头节体内均有明亮的绿色荧光斑点;而空白对照组原头节体内无绿色荧光斑点。Eg Rad9-si RNA-354、-614、-971干扰组原头节的存活率分别为(42.99±4.03)%、(29.86±5.87)%和(56.48±4.64)%,初步筛选最有效干扰序列为Eg Rad9-si RNA-614。si RNA-354、-614、-971干扰组碱性磷酸酶活性分别为0.024±0.001、0.004±0.001、0.039±0.002,其中Eg Rad9-si RNA-614组碱性磷酸酶活性与阴性对照组(0.095±0.001)和空白对照组(0.099±0.001)相比,差异均有统计学意义(t=10.227、10.934,均P<0.01),表明该组原头节Eg Rad9基因经干扰后对其活性影响最大,最有效干扰序列为Eg Rad9-si RNA-614。Eg Rad9-si RNA-354、614、971干扰组Eg Rad9 m RNA表达量分别为0.432±0.055、0.291±0.079、0.612±0.032,其中经Eg Rad9-si RNA-614序列干扰后,Eg Rad9 m RNA表达量与阴性对照组(1.001±0.020)和空白对照组(1.001±0.012)相比均显著下调(t=7.874、7.663,均P<0.01),可确定最有效干扰序列为Eg Rad9-si RNA-614。相同电泳条件下,Eg Rad9-si RNA-614干扰组原头节DNA碎片离开核向阳极迁移,形成拖尾;Eg Rad9-si RNA-614干扰组彗星尾距OTM值为13.901±2.263,与阴性对照组(0.074±0.020)和空白对照组(0.047±0.034)相比,差异有统计学意义(t=12.845、13.251,均P<0.01)。经Eg Rad9-si RNA-614序列干扰后,原头节体内ROS含量为13.024±0.154,与阴性对照组(2.728±0.083)和空白对照组(2.555±0.007)相比,差异有统计学意义(t=9.296、10.134,均P<0.01)。结论Eg Rad9基因在细粒棘球蚴原头节DNA氧化损伤过程中发挥重要作用,Eg Rad9-si RNA-614干扰片段可特异性干扰Eg Rad9基因的表达,并降低原头节修复DNA氧化损伤的能力。

关键词： EgRad9基因小干扰RNA 细粒棘球蚴原头节 DNA氧化损伤

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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 220-224页

作者：王慧李军张富春张文宝温浩新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆大学生命科学与技术学院

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pP... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。

关键词：细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶毕赤酵母分泌表达抗氧化

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新疆伊犁地区尼勒克县人群泡球蚴感染病例调查及nad2、cob基因片段分析

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中国人兽共患病学报 2017年第12期33卷 1066-1070页

作者：郭永忠初伊明阿尔新·卡德尔郭宝平周璨林李军张文宝郭刚新疆伊犁哈萨克自治州友谊医院伊宁市835000 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054

目的了解新疆伊犁地区尼勒克县泡球蚴感染确诊病例人群分布及病原遗传特征。方法收集和调查尼勒克县境内人群泡球蚴感染病例相关数据,并利用分子生物学技术对收集到的患者病灶肝组织样本,针对线粒体nad2和cob基因片段开展病原分子检测... 详细信息

目的了解新疆伊犁地区尼勒克县泡球蚴感染确诊病例人群分布及病原遗传特征。方法收集和调查尼勒克县境内人群泡球蚴感染病例相关数据,并利用分子生物学技术对收集到的患者病灶肝组织样本,针对线粒体nad2和cob基因片段开展病原分子检测和分析。结果截止2015年底共收集到泡球蚴感染患者资料共计48例,首例感染病人确诊于1989年。近5年确诊病例占到所有病例数的45.8%,年均确诊率为1.7/10万。感染人群沿喀什河流域两岸分布,在乌拉斯台乡尤为集中。患病人群中35-44岁占到38.6%,男性占64.6%,农牧民占95.8%。通过对11份病例样本检测nad2、cob基因片段进一步证实为泡球蚴感染,序列自身比对完全同源。结论泡球蚴在尼勒克县属于新发传染病。包括尼勒克县在内的伊犁河谷地带为泡球蚴的自然疫源地,该县境内的泡球蚴病原核酸序列较为保守单一。

关键词：泡球蚴病多房棘球蚴病基因变异尼勒克县

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新疆维、汉妇女miR-146a(rs2910164)基因多态性分析

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现代妇产科进展 2015年第4期24卷 259-261页

作者：马丽马彩玲卢畅新疆医科大学第一附属医院妇科新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院病理科乌鲁木齐830054

目的：探讨新疆维吾尔族与汉族妇女间miR-146a（rs2910164）基因多态性的差异,分析其与宫颈癌发生发展的关系。方法：PCR-RFLP法检测宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中miR-146a（rs2910164）基因分型。结果：维吾尔族和汉族间的miR-146a（rs291... 详细信息

目的：探讨新疆维吾尔族与汉族妇女间miR-146a（rs2910164）基因多态性的差异,分析其与宫颈癌发生发展的关系。方法：PCR-RFLP法检测宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中miR-146a（rs2910164）基因分型。结果：维吾尔族和汉族间的miR-146a（rs2910164）基因型构成比差异显著（χ2=57. 927,P〈0. 001）,维吾尔族GG基因型比例显著高于汉族。Logistic回归分析发现,维吾尔族（OR=3. 332,95% CI1. 411 ~ 7. 868）和肿瘤直径≥4cm（OR=3. 792,95% CI1. 162 ~12. 376）与miR-146a（rs2910164）基因型GG/CG基因型显著相关。结论：新疆维吾尔族与汉组妇女间miR-146a（rs2910164）基因多态性差异显著,miR-146a（rs2910164）等位基因G可能参与宫颈癌的病情发展。

关键词：宫颈癌维吾尔族 miR-146a rs2910164

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新疆妇女宫颈病变组织miR-146a/133b的表达及临床意义

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重庆医学 2015年第27期44卷 3765-3767,3771页

作者：马丽马彩玲卢畅陈艳霞新疆医科大学第一附属医院妇科/新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院病理科乌鲁木齐830054

目的探讨miR-146a/133b在新疆维、汉民族宫颈组织中的差异性表达及其临床意义。方法采用RT-qPCR法检测miR-146a/133b在石蜡包埋的宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织中的相对表达量,分析其在宫颈癌发生、发展中的临床意义。结果... 详细信息

目的探讨miR-146a/133b在新疆维、汉民族宫颈组织中的差异性表达及其临床意义。方法采用RT-qPCR法检测miR-146a/133b在石蜡包埋的宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌组织中的相对表达量,分析其在宫颈癌发生、发展中的临床意义。结果与宫颈炎组织比,CIN和宫颈癌组织miR-146a/133b的表达水平显著升高(P<0.05),且随宫颈病变的加重,两者的表达水平逐渐升高,宫颈癌组织中维、汉民族miR-146a存在差异性表达(P<0.05)。结婚年龄小于20岁、肿瘤直径大于或等于4cm、有HPV感染的宫颈癌组织中miR-146a/133b呈高表达(P<0.05)。结论 miR-146a/133b参与宫颈癌的发生、发展,可能成为宫颈癌病情预测及评估新的分子标志物。

关键词：宫颈肿瘤维吾尔族 miR-146a miR-133b 乳头状瘤病毒

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泡球蚴感染小鼠Tregs与Th17细胞相关细胞因子的平衡变化

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中国病原生物学杂志 2012年第2期7卷 129-131,160页

作者：赵慧庞楠楠马海梅李玉娇张丽娜刘晓霞李艳华马秀敏丁剑冰新疆医科大学国家中医临床研究基地新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学第一附属医院省部共建国家重点实验室培育基地新疆重大疾病医学重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830011

目的通过检测泡球蚴感染小鼠血清中Tregs相关细胞因子IL-10与Th17细胞相关细胞因子IL-17的浓度变化,探讨其在泡球蚴感染过程中的平衡变化关系。方法 60只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔接种泡球蚴,对照组小鼠腹... 详细信息

目的通过检测泡球蚴感染小鼠血清中Tregs相关细胞因子IL-10与Th17细胞相关细胞因子IL-17的浓度变化,探讨其在泡球蚴感染过程中的平衡变化关系。方法 60只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔接种泡球蚴,对照组小鼠腹腔接种等量生理盐水,分别在接种后2、8、30、90、180和360d实验组与对照组各取5只小鼠,采血,收集血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-10和IL-17的表达水平。结果与对照组相比,小鼠血清IL-10水平在感染中晚期显著升高(P<0.01);IL-17水平在整个感染期均显著性升高(P<0.05),且晚期高于早期(P<0.01);IL-10与IL-17水平成正相关(r=0.655,P<0.01)。结论通过相关细胞因子的作用,Tregs与Th17细胞可能共同促进泡球蚴慢性感染的形成。

关键词：泡球蚴小鼠白介素-10 白介素-17

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青蒿琥酯体外抗细粒棘球蚴活性氧对DNA作用机制影响的研究

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中国病原生物学杂志 2017年第8期12卷 751-756,761页

作者：郑海亚文丽梅吕国栋卢帅李亚芬郑璇木扎拜尔·木合地尔赵军王建华新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院药学部临床药学科新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

目的了解索青蒿琥酯体外抗细粒棘球蚴氧化损伤机制。方法以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组,H2O2为活性氧(reactive oxygen species,ROS)对照组,阿苯达唑(albendazole,ABZ)和硝唑尼特(nitazoxanide,NTZ)为药效对照组,青蒿琥酯低剂量组(65... 详细信息

目的了解索青蒿琥酯体外抗细粒棘球蚴氧化损伤机制。方法以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组,H2O2为活性氧(reactive oxygen species,ROS)对照组,阿苯达唑(albendazole,ABZ)和硝唑尼特(nitazoxanide,NTZ)为药效对照组,青蒿琥酯低剂量组(65μmol/L),青蒿琥酯中剂量组(130μmol/L)和青蒿琥酯高剂量组(325μmol/L)为实验组,采用1%伊红染色法检测实验组药物干预4d的细粒棘球蚴死亡率,并观察病理组织学和超微结构变化;采用双氢罗丹明123(DHR123)法检测细粒棘球绦虫细粒棘球蚴体内ROS含量动态变化;采用单细胞凝胶电泳法(彗星实验)以Olive尾距(OTM)作为DNA损伤指标对各组细粒棘球蚴的DNA损伤情况进行分析。同时设活性氧清除剂甘露醇(mannitol,man)与药物联合干预细粒棘球绦虫细粒棘球蚴试验组作比较。结果与甘露醇联合药物干预组比较,青蒿琥酯中剂量组与H_2O_2组细粒棘球蚴死亡率降低(χ~2分别=46.371和59.328,P<0.05);病理学观察青蒿琥酯组细粒棘球蚴顶突小钩脱落,角质层、生发层结构均遭到破坏;透射电镜观察细粒棘球蚴生发层出现大量脂滴,并且有异染色质出现;在330min内,青蒿琥酯低、中和高剂量组细粒棘球蚴ROS含量升高程度均明显高于阿苯达唑组、硝唑尼特组,并具有一定的剂量依赖性;青蒿琥酯高剂量组彗星实验图像拖尾明显,证明细粒棘球蚴DNA受损严重;青蒿琥酯低、中、高剂量组与阿苯达唑组、硝唑尼特组相比,OTM值比较均具有显著性差异(t=9.065、13.134、7.845、9.400、12.251和7.877,P<0.01)。结论青蒿琥酯抗细粒棘球蚴的作用机制可能通过产生ROS导致其DNA损伤所致,为青蒿琥酯抗包虫病作用靶点的筛选和抗包虫病新药的开发奠定了基础。

关键词：青蒿琥酯细粒棘球蚴活性氧活性氧清除剂 DNA损伤

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Gadd45β及细胞周期调控相关基因在泡型包虫病患者肝脏中的表达及意义

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中国病原生物学杂志 2016年第12期11卷 1089-1093页

作者：杨舒婷张传山李亮毕晓娟林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院临床研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的研究肝泡型包虫病患者肝脏细胞Gadd45β(growth arrest and DNA damage gene 45β)及细胞周期调控相关基因的表达及意义。方法采集24例肝泡型包虫病患者肝脏标本,分为病灶旁组织(Close)和远端组织(Distance)。用重组TGF-β1(1ng/ml... 详细信息

目的研究肝泡型包虫病患者肝脏细胞Gadd45β(growth arrest and DNA damage gene 45β)及细胞周期调控相关基因的表达及意义。方法采集24例肝泡型包虫病患者肝脏标本,分为病灶旁组织(Close)和远端组织(Distance)。用重组TGF-β1(1ng/ml)及泡球蚴匀浆蛋白(1mg/ml)刺激体外培养的HL-7702人肝细胞,分别于30min、1h、6h、12h、24h、48h收集细胞。患者肝脏标本及刺激后收集的细胞均采用Trizol法提取RNA,反转录cDNA,通过实时荧光定量PCR检测目的基因表达并进行分析。结果近旁组织PCNA,TGF-β1,cyclinA1,cyclinE基因相对表达量分别为1.934±1.337、1.155±0.5138、1.367±0.8087、1.384±1.116、1.580±1.005、1.899±1.173和1.478±1.189,显著高于远端组织(1.00±0.00)且差异有统计学意义(P<0.05),而Gadd45β,cyclinB1,cyclinD差异无统计学意义(P>0.05)。用重组TGF-β1(1ng/ml)及泡球蚴匀浆蛋白(1mg/ml)刺激体外培养的HL-7702人肝细胞,引起Gadd45β,cyclinA1,cyclinE表达上调。结论泡球蚴匀浆蛋白刺激,可引起肝细胞Gadd45β及细胞周期相关蛋白表达上调,参与细胞抗凋亡过程。泡球蚴感染晚期,肝脏中仍存在细胞周期素(cyclins)参与的细胞增殖,但同时TGF-β1高表达,并通过Smads信号通路促进肝纤维化相关蛋白表达,促成肝脏泡型包虫病晚期病理变化。

关键词：泡型包虫病 Gadd45β 细胞周期泡球蚴

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细粒棘球蚴胰岛素受体(EgInsR)与人胰岛素(Huins)酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定

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中国病原生物学杂志 2016年第9期11卷 821-824页

作者：文丽梅王建华卢帅郑海亚吕国栋赵军新疆医科大学第一附属医院药学部临床药学科新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

目的构建细粒棘球蚴(Eg)胰岛素受体(InsR)与人胰岛素(Huins)酵母双杂交系统,检测表达蛋白对报告基因的自激活活性及对酵母菌的毒性。方法从Eg cDNA中扩增EgInsR基因和Huins编码序列,分别将EgInsR基因和Huins编码序列克隆入酵母双杂交载... 详细信息

目的构建细粒棘球蚴(Eg)胰岛素受体(InsR)与人胰岛素(Huins)酵母双杂交系统,检测表达蛋白对报告基因的自激活活性及对酵母菌的毒性。方法从Eg cDNA中扩增EgInsR基因和Huins编码序列,分别将EgInsR基因和Huins编码序列克隆入酵母双杂交载体pGADT7和pGBKT7中并进行限制性酶切鉴定和测序鉴定,鉴定正确的重组载体采用PEG/LiAc法转化酵母菌,检测诱饵蛋白对酵母菌生长的自激活活性和毒性。结果扩增的EgInsR和Huins基因编码区全长分别为1 122bp和261bp。构建的pGADT7-EgInsR及pGBKT7-Huins两组重组质粒转化Y2HGold酵母菌表达的蛋白对Y2HGold无毒性及自激活作用。结论构建的EgInsR基因和Huins基因重组载体表达蛋白对Y2HGold酵母菌无毒性和自激活作用,为研究Eg与中间宿主的交互作用机制奠定了基础。

关键词： EgInsR基因 Huins基因酵母双杂交自激活

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细粒棘球绦虫新疆株胆汁酸钠协同转运蛋白基因的克隆及序列分析

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科技导报 2016年第2期34卷 215-220页

作者：杨梅梁小弟李军李亮张富春张文宝新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830011

从新疆株细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)原头蚴中克隆胆汁酸钠协同转运蛋白(sodium-bile acid cotransporter,Eg SBACT)基因,进行序列测定和生物信息学分析。首先设计Eg SBACT基因特异性引物,用RT及PCR方法从新疆株细粒棘球... 详细信息

从新疆株细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)原头蚴中克隆胆汁酸钠协同转运蛋白(sodium-bile acid cotransporter,Eg SBACT)基因,进行序列测定和生物信息学分析。首先设计Eg SBACT基因特异性引物,用RT及PCR方法从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴提取总RNA,将其反转录成c DNA后扩增Eg SBACT基因并将其克隆至原核表达载体p ET30a中,测序鉴定序列并进行生物信息学分析。结果显示,RT-PCR扩增出一长度约650 bp的基因,测序显示其长度为654 bp,序列与Genbank公布的EUB59978.1完全一致,其编码217个氨基酸,预测其等电点为9.28。同源性分析发现,Eg SBACT蛋白序列与中华枝睾吸虫SBACT(Gen Bank:GAA57409.1)同源性最高,达到43%。进化树分析表明,细粒棘球绦虫的SBACT蛋白与吸虫纲的SBACT相聚集,在进化树上处于一枝,而与其他物种亲缘性较远。由此表明,本研究成功克隆出细粒棘球绦虫Eg SBACT基因。

关键词：细粒棘球绦虫 Eg SBACT 序列分析

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