检索结果-内蒙古大学图书馆

新疆巴音布鲁克奎克乌苏达板地区2014年绵羊肝囊型包虫病现患率调查

中华流行病学杂志 2015年第2期36卷 136-138页

作者：董建杨凌菲张文宝李海涛姜涛齐新伟宋涛新疆医科大学第一附属医院超声诊断科乌鲁木齐830011 新疆重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地及包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830011

目的应用超声诊断普查方式了解新疆巴音布鲁克奎克乌苏达板地区绵羊感染肝囊型包虫病情况。方法2014年7月在巴音布鲁克奎克乌苏达板地区采用现患筛查方法，以肝包虫病超声声像图征象为诊断标准，现场调查绵羊肝囊型包虫患病情况。以羊... 详细信息

目的应用超声诊断普查方式了解新疆巴音布鲁克奎克乌苏达板地区绵羊感染肝囊型包虫病情况。方法2014年7月在巴音布鲁克奎克乌苏达板地区采用现患筛查方法，以肝包虫病超声声像图征象为诊断标准，现场调查绵羊肝囊型包虫患病情况。以羊齿龄分组，分别计算不同齿龄羊肝囊型包虫病感染率，并分析齿龄与感染率间的相关关系。结果巴音布鲁克奎克乌苏达板地区放牧绵羊肝囊型包虫病的总感染率为36．9％。其中非钙化型肝囊型包虫病的总感染率为7．3％；钙化型肝囊型包虫的总感染率为29．6％。按绵羊齿龄分组后，①非钙化型肝囊型包虫病感染率1-岁齿龄组为1．2％、2．岁齿龄组为1．4％、3～岁齿龄组为14．0％、4～岁齿龄组为10．0％、5-岁齿龄组为15．6％、〉6岁齿龄组为4．2％；②钙化型肝囊型包虫病感染率，各岁齿龄组分别为9．9％、16．2％、31．6％、47．8％、42．2％和41．7％，其中以1-岁齿龄组肝囊型包虫病感染率较低，〉3岁齿龄绵羊肝囊型包虫病感染率明显增加；③绵羊肝囊型包虫病感染率和齿龄间存在正相关关系（r=0．372，R2=0．107，F=44．176，P=0．000），即随齿龄增长，肝囊型包虫病的感染率增加。结论新疆巴音布鲁克奎克乌苏达板地区属肝囊型包虫病的高流行区。绵羊肝囊型包虫病感染从羊只幼龄开始出现，3～4岁齿龄时呈高发状态，幼龄羊应为预防绵羊肝囊型包虫病的重点。

关键词：肝囊型包虫病绵羊超声诊断

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细粒棘球蚴囊液对HepG2细胞增殖的影响

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中华肝脏病杂志 2012年第12期20卷 930-934页

作者：李朝旺赵晋明张传山吕国栋温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院乳腺小儿外科乌鲁木齐830054 省部共建新疆重大疾病医学国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室

目的探讨细粒棘球蚴囊液（HCF）对宿主肝细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及细胞周期的影响。方法四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度HCF对HepG2细胞的增殖作用。流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（P-ERK... 详细信息

目的探讨细粒棘球蚴囊液（HCF）对宿主肝细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及细胞周期的影响。方法四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度HCF对HepG2细胞的增殖作用。流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（P-ERK）、增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin A、cyclin B1、cyclin E的表达水平。对数据采用重复测量方差分析。结果在48、72h和96h，15％、30％和60％HCF组与无胎牛血清比较，能明显促进HepG2细胞的增殖护值均〈0．05）。Westem blot检测结果显示：15％HCF组p-ERK在48h高表达（F=1．916，P〈0．01），cyclin D1在24h高表达旷=3．901，P〈0．01），15％、30％HCF组PCNA分别在48h、72h高表达（F=91．140，P〈0．01），cyclinA分别在48h、72h高表达旷=18．587，P〈0．01），cyclinB1分别在48h、72h高表达（F=2．064，P〈0．01），30％HCF组cyclinE在96h高表达（F=1．068，P〈0．01）。结论HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害作用，对其增殖有一定促进作用。

关键词：肝细胞细胞周期细粒棘球蚴囊液细胞增殖

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不同棘球蚴抗原诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的实验研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第3期31卷 188-192页

作者：单骄宇李海涛李春燕肖晋李亮张雪林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫病外科乌鲁木齐830054

目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞(DCs)表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞,用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导后,获得小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)。分别用重组抗原B(r... 详细信息

目的检测不同的棘球蚴抗原体外诱导树突状细胞(DCs)表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从C57BL/6小鼠股骨中分离出骨髓细胞,用小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导后,获得小鼠骨髓源树突状细胞(BMDCs)。分别用重组抗原B(rAgB,15μg/ml)、小鼠细粒棘球蚴囊液(MHF,5 mg/ml)、γ干扰素(IFN-γ,1 000 U/ml,为阳性对照)和RPMI 1640完全培养液(阴性对照)刺激DCs,于18、24和48 h后收集细胞和细胞上清。采用流式细胞术检测各组DCs的表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达情况,并利用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组的IDO mRNA相对转录水平。利用高效液相色谱法(HPLC)检测各组细胞上清中的色氨酸(Try)浓度。结果流式细胞术检测结果显示,DCs受rAgB和MHF刺激后,其表面标志物CD40、CD80、CD86和I-A/I-E的阳性表达率均降低。刺激24 h后,rAgB组的CD40、CD86和I-A/I-E阳性表达率分别为(22.60±2.69)%、(35.50±4.38)%和(57.30±4.38)%,与MHF组[(38.00±3.54)%、(53.00±3.39)%和(77.10±1.70)%]和阴性对照[(37.95±3.61)%、(19.55±1.06)%和(85.45±1.63)%]的差异均有统计学意义(P<0.05)。FQ-RT-PCR结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组的IDO mRNA水平[(9.20±0.01)、(29.44±0.02)和(16.48±0.04)]和MHF组的[(9.67±0.02)、(17.52±0.01)和(16.81±0.01)]均高于阴性对照组[(2.46±0.01)、(7.77±0.01)和(10.56±0.01)](P<0.01),rAgB组和MHF组IDO mRNA水平的差异均有统计学意义(P<0.05)。HPLC结果显示,刺激18、24和48 h后,rAgB组DCs上清中的色氨酸浓度[(23.65±0.64)、(13.95±1.06)和(19.05±0.64)μmol/L]均较其他3组低,刺激24 h后的色氨酸浓度与阴性对照组(22.90±0.14)和MHF组(20.65±0.35)的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外实验条件下,rAgB、MHF均可上调DCs表面IDO的表达,作用24 h后,rAgB上调IDO的能力强于MHF。

关键词：细粒棘球蚴抗原树突状细胞吲哚胺2 ,3-双加氧酶免疫逃避

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新疆维吾尔自治区部分包虫病流行地区患者药物治疗现状调查

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中华流行病学杂志 2015年第9期36卷 1002-1004页

作者：李海涛宋涛邵英梅张文宝温浩新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心肝胆包虫外科乌鲁木齐830011 新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室超声科

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）部分包虫病流行地区患者药物治疗情况。方法2013年4—6月通过问卷形式对新疆4个包虫病医疗点（新疆医科大学第一附属医院、布克塞尔蒙古自治县、额敏县和裕民县）进行包虫病规范化药物治疗现况调查，以... 详细信息

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）部分包虫病流行地区患者药物治疗情况。方法2013年4—6月通过问卷形式对新疆4个包虫病医疗点（新疆医科大学第一附属医院、布克塞尔蒙古自治县、额敏县和裕民县）进行包虫病规范化药物治疗现况调查，以WHO包虫病药物治疗建议作为规范化治疗标准。结果共调查329例包虫病患者，其中行抗包虫药物治疗250例，规范化药物治疗占49．2％（162／329）；未规范化药物治疗病例50．8％（167／329）。结论新疆部分包虫病地区患者临床药物治疗亟待规范，其综合陛防治应包括规范化诊断、手术、药物治疗以及随访的个体治疗。

关键词：包虫病药物治疗现况调查

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细粒棘球绦虫DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2基因的克隆及序列分析

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中国病原生物学杂志 2012年第7期7卷 510-512,526页

作者：吕国栋叶建蔚张传山王俊华李亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息... 详细信息

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析,半定量反转录PCR分析其在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中的表达情况。结果 EgPolD2基因开放阅读框为1 218bp,编码405个氨基酸,等电点为4.74。NCBI保守功能区分析软件预测EgPolD2蛋白第113～378个氨基酸为MPP_PolD2_C结构域。登陆GenBank进行Blast比对,EgPolD2与曼氏血吸虫SmPolD2基因同源性为32.1%,与线虫和人等其他物种PolD2基因同源性在18.3%～22.8%之间。进化树分析表明EgPolD2与SmPolD2相聚集,与其他物种同源性较低。半定量RT-PCR显示,EgPolD2在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中均有表达,且表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功克隆出细粒棘球绦虫EgPolD2新基因,为进一步研究抗细粒棘球绦虫药物靶标奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 EgPolD2 序列分析

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细粒棘球蚴MAPKK样激酶及其下游成员ERK和P38酵母双杂交载体的构建与自激活鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 207-210,215页

作者：张传山杨乐王丽敏李亮王俊华吕国栋林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成员ERK、P38酵母双杂交载体,并检测融合蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性. 方法采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,生理盐水冲洗5次,TRIzol... 详细信息

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成员ERK、P38酵母双杂交载体,并检测融合蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性. 方法采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,生理盐水冲洗5次,TRIzol法提取原头蚴总RNA,取1μg RNA反转录cDNA.以cDNA为模板,PCR分别扩增EgMKK1、EgERK和EgP38基因片段,分别经限制性内切酶EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和SalⅠ双酶切,酶切片段连接至酵母双杂交载体pGADT7或pGBKT7,经酶切及测序鉴定正确后,应用PEG/LiAc法将重组载体转化入感受态酵母菌株Y2HGold,利用固体培养基筛选,检测融合蛋白对酵母菌株生长的毒性作用及自激活活性.结果经PCR扩增,分别获得目的基因EgMKK1、EgERK和EgP38.构建的重组酵母双杂交载体pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK及pGBKT7-EgP38经双酶切,分别得到1 017 bp、1 086 bp和1 107 bp目的基因片段,大小与预测值相符.重组酵母双杂交载体转化Y2HGold酵母菌在SD/-Trp平板上形成直径为1.5～2.0 mm的菌落,与原始载体pGADT7或pGBKT7转化酵母菌菌落大小一致;重组酵母双杂交载体转化酵母菌在SD/-Trp和SD/-Leu平板均有直径约2 mm白色菌落生长,而SDO/X/A和DDO/X/A固体培养基平板上无蓝色菌落生长. 结论成功构建了酵母双杂交载体pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK和pGBKT7-EgP38,其表达蛋白对酵母菌Y2 HGold无毒性和自激活作用,为进一步研究EgMKK1与其下游成员EgERK、EgP38之间的相互作用奠定了基础.

关键词：细粒棘球绦虫 MAPK 酵母双杂交毒性自激活

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细粒棘球蚴囊液对HepG2肝癌细胞系细胞周期的影响

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中国病原生物学杂志 2012年第2期7卷 124-128页

作者：李朝旺赵晋明张传山吕国栋王俊华李静范金亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的... 详细信息

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的表达水平,并与无FCS组比较。结果 Western blot检测显示,15%、30%HCF组p-ERK分别在换液培养3h和30min高表达(P<0.05),PCNA分别在3h和12h高表达(P<0.05),cyclin-D1在3h高表达(P<0.05),cyclin-A分别在3h和12h高表达(P<0.05),15%HCF组cyclin-E在3h高表达(P<0.05),15%、30%HCF组cyclin-B1在各时间点表达量微弱(P<0.05)。结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害,且对其增殖有一定的促进作用。

关键词：细粒棘球蚴囊液肝细胞细胞周期细胞增殖

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Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原基因在泡球蚴感染中期小鼠肝脏中的表达及意义

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中国病原生物学杂志 2012年第9期7卷 653-656页

作者：王俊华魏绪法张传山吕国栋姜涛卢晓梅温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬... 详细信息

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬液,建立疾病动物模型;对照组以同样方法注射等量生理盐水。于感染中期第12周,颈椎脱臼处死小鼠,实验组取病变组织和病变邻近肝组织,对照组取注射部位所在肝组织以及临近肝组织,用4%甲醛固定,常规石蜡包埋,HE、Masson染色后观察形态学改变和肝纤维化程度。取病变临近肝组织,提取总RNA,反转录合成cDNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Col1a1、Col3a1、Col4a1基因的表达,计量结果用相对单位(AU)表示。结果泡球蚴感染组和对照组Collal基因表达量分别为(2.155±0.809)AU和(1.000±0.221)AU,差异有统计学意义(t=3.427,P<0.05);Col3a1基因表达量分别为(18.641±10.244)AU和(1.000±0.412)AU,差异有统计学意义(t=10.324,P<0.01);Col4a1基因表达量分别为(0.894±0.495)AU和(1.000±0.381)AU,差异无统计学意义(t=1.932,P>0.05)。Masson染色检查泡球蚴感染组肝纤维化评分为2.72±1.04,对照组为1.0,差异有统计学意义(t=4.105,P<0.05)。结论在泡球蚴感染小鼠中期,引起肝纤维化的胶原主要为Ⅲ型和Ⅰ型。

关键词：胶原泡球蚴肝纤维化实时荧光定量PCR

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细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123的克隆、表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2017年第1期12卷 38-41页

作者：王慧齐文静何黎郭宝平张文宝李军新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转... 详细信息

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,采用SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,Western blot鉴定其免疫反应性。结果 PCR扩增EgM123基因片段长度为594bp,经酶切分析和测序鉴定证明pET28a-EgM123原核表达载体构建正确。重组质粒转化BL21在37℃条件下,经IPTG(终浓度为0.4mmol/L)诱导3h,获得分子质量单位约为29ku的EgM123蛋白,与理论值相符。该蛋白能被EgM123-GST免疫兔抗血清识别。结论成功构建了pET28a-EgM123原核表达载体,表达蛋白具有免疫反应性,为研制包虫病疫苗奠定了基础。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫 EgM123 蛋白表达疫苗

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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 220-224页

作者：王慧李军张富春张文宝温浩新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆大学生命科学与技术学院

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pP... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。

关键词：细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶毕赤酵母分泌表达抗氧化

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