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中国人兽共患病学报 2014年第1期30卷 27-31页

作者：吕国栋王红丽刘辉张富春林仁勇新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054

目的制备细粒棘球绦虫(Eg)p38蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Egp38蛋白的功能提供检测抗体。方法将Egp38蛋白基因序列克隆至原核表达载体pET28a,转化*** BL21株,IPTG诱导蛋白表达,以Ni亲和层析纯化Egp38蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELIS... 详细信息

目的制备细粒棘球绦虫(Eg)p38蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Egp38蛋白的功能提供检测抗体。方法将Egp38蛋白基因序列克隆至原核表达载体pET28a,转化*** BL21株,IPTG诱导蛋白表达,以Ni亲和层析纯化Egp38蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价,Western blotting检测所制备抗体与Eg虫体天然Egp38蛋白的反应性。结果经0.2mmol/L IPTG诱导,表达出约46kDa的Egp38重组蛋白,制备获得效价在2.56×105以上的多克隆抗体,该抗体能够与Egp38重组蛋白和Eg蚴虫体内的Egp38蛋白发生特异性反应。结论成功制备获得兔抗Egp38多克隆抗体,为研究Egp38在Eg与宿主间的交互作用中的功能和作为药物靶标等研究奠定基础。

关键词：细粒棘球绦虫 p38 蛋白表达抗体制备

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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 220-224页

作者：王慧李军张富春张文宝温浩新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆大学生命科学与技术学院

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pP... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。

关键词：细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶毕赤酵母分泌表达抗氧化

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新疆某三甲级医院包虫病流行病学的现状和特征分析

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新疆医科大学学报 2014年第9期37卷 1204-1207页

作者：曹文艳师晓莉曹明宇张朝霞温浩刘学磊王倩兰希姜涛姜艳马秀敏新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第六附属医院乌鲁木齐830002

目的：研究新疆包虫病流行病学的现状和特征，为制定控制措施及合理治疗提供依据。方法调查2002-2013年新疆医科大学第一附属医院收治的2957例包虫病患者，回顾性分析包虫病患者的性别、年龄、职业、民族、入院年份、发病部位、疾病转... 详细信息

目的：研究新疆包虫病流行病学的现状和特征，为制定控制措施及合理治疗提供依据。方法调查2002-2013年新疆医科大学第一附属医院收治的2957例包虫病患者，回顾性分析包虫病患者的性别、年龄、职业、民族、入院年份、发病部位、疾病转归的分布特征。结果调查的患者中男性1478名（49．98％），女性1479名（50．02％）。年龄2-85岁，其中31-40岁的患者最多（27．5％）。患者职业中以农民为主（37．8％）。各民族中汉族患者最多（48．0％），其次是维吾尔族（17．7％）和哈萨克族（11．7％）。包虫病的发病率由2002年的4．3％上升到2013的14．3％。发病部位中最常见的是肝（85．6％）。绝大部分病人可治愈（86．0％）。结论新疆包虫病发病率呈逐年增加趋势，包虫病患者以汉族！维吾尔族！哈萨克族居多，病例呈逐年增多趋势，大部分患者可治愈。

关键词：新疆包虫病流行病学回顾性分析

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重组卡介苗及其载体在感染性疾病中的应用

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生物医学工程学杂志 2013年第5期30卷 1136-1140页

作者：祖力皮也·吐尔逊丁剑冰新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054

最近研究表明,重组卡介苗(rBCG)可集载体与佐剂的功能于一身,同时具备接种一次就可以获得强而持久特异性免疫的特点。因此BCG是研制新型重组活疫苗的一种理想的载体。本文简要概述了近年来构建的rBCG疫苗及其载体在细菌、病毒等微生物... 详细信息

最近研究表明,重组卡介苗(rBCG)可集载体与佐剂的功能于一身,同时具备接种一次就可以获得强而持久特异性免疫的特点。因此BCG是研制新型重组活疫苗的一种理想的载体。本文简要概述了近年来构建的rBCG疫苗及其载体在细菌、病毒等微生物和寄生虫等感染性疾病中的应用和意义。

关键词：重组卡介苗疫苗载体微生物寄生虫

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p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

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中华预防医学杂志 2013年第8期47卷 757-761页

作者：郑树涛刘涛刘清鲁芒高向朋伊力亚尔·夏合丁林仁勇卢晓梅新疆医科大学第一附属医院新疆维吾尔自治区重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院胸外科

目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在食管鳞癌细胞Ecal09中的可能作用。方法构建p38ct特异性的shRNA干扰载体，瞬时转染Ecal09细胞，运用qRT—PCR、免疫印迹分别检测p38ct干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTr和流式细... 详细信息

目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在食管鳞癌细胞Ecal09中的可能作用。方法构建p38ct特异性的shRNA干扰载体，瞬时转染Ecal09细胞，运用qRT—PCR、免疫印迹分别检测p38ct干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTr和流式细胞仪检测p38ct干扰后Ecal09细胞增殖，细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变。作为平行反向验证，转染含有p38c~全长cDNA的真核过表达质粒，运用免疫印迹检测p38ct过表达后在蛋白水平上的表达效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖，细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38ct的变化后细胞迁移能力的改变。结果p38ct基因在受干扰后，测定其蛋白水平表达水平（22．970±2．857）较空质粒组（35．658±2．286）降低，差异具有统计学意义（t=-4．475，P〈0．01）。观察Ecal09细胞的增殖变化，发现干扰48h后吸光度值（0．951±0．086）大于对照组细胞（0．811±0．012）（t=3．20，P〈0．05），表明Ecal09细胞增殖加快。观察细胞周期和凋亡变化发现，干扰48h后凋亡率（17．400±5．495）较空质粒组（1．000±O．721）增加（t=40．06，P〈0．01）；干扰72h后细胞迁移速度（0．034±0．031）较空质粒组（0．278±0．021）加快（t=-5．79，P〈0．01），表明浸润能力增加。p38ct在过表达后，检测到其内源性p38α蛋白表达水平（41．1704-2．357）高于对照组（35．658±2．286）（t=4．41，P=0．005）；48h过表达组吸光值（0．472±0．089）与对照组细胞吸光值（0．81l±0．012）相比，细胞增殖受到抑制（t=-7．50，P〈0．01），细胞生长活动在Gl期受阻（t=4．80，P〈0．01），并且其细胞凋亡（32．233±1．457）高于空质粒组（1．000±0．721）（t=17．20，P〈0．01），细胞迁移[（0．770±0．054）mm]较空质粒组[（0．278±O．021）mm]减慢并且浸润受到抑制（t=11．00，P〈0．01）。结论p38αMARK抑制食管鳞癌细胞Eeal09的发生发展过程。

关键词：食管鳞癌 p38α RNA干扰过表达

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细粒棘球绦虫重组BCG-EgG1Y162菌株的构建和表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 110-113页

作者：祖力皮也·吐尔逊德力夏提·依米提曹春宝马海梅李玉娇周晓涛朱明马秀敏温浩丁剑冰新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011

目的构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(***)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化***后进行扩增。重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR... 详细信息

目的构建和表达细粒棘球绦虫重组卡介苗(BCG)菌株rBCG-EgG1Y162。方法通过基因工程技术将细粒棘球绦虫抗原EgG1Y162的编码基因与大肠埃希菌(***)-分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV361重组,并转化***后进行扩增。重组质粒pMV-EgG1Y162经PCR和双酶切鉴定后,进行测序。将鉴定正确的rpMV-EgG1Y162通过电穿孔技术转化至感受态BCG菌株中,构建rBCG-EgG1Y162。经PCR和双酶切鉴定正确后,扩增培养2周,并于45℃放置30 min,诱导目的蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达情况,并以兔抗原核表达重组蛋白EgG1Y162血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果重组质粒rpMV-EgG1Y162经PCR扩增和双酶切后,均获得约360 bp的EgG1Y162目的基因片段,与预期片段长度一致,测序结果表明插入序列正确。将其通过电穿孔转化BCG菌株后,rBCG-EgG1Y162生长良好,经酶切和PCR鉴定正确。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的表达产物的相对分子质量(Mr)约为71 000。结论构建和表达了细粒棘球绦虫rBCG-EgG1Y162菌株。

关键词：细粒棘球绦虫 EgG1Y162 重组卡介苗

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PD-1与CTLA-4在泡球蚴感染小鼠肝脏中的动态变化研究

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免疫学杂志 2013年第12期29卷 1018-1023页

作者：李艳华张峰波赵慧周晓涛胡晓安马秀敏魏琴丁剑冰新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地

目的研究负性协同刺激分子PD-1和CTLA-4表达水平在泡球蚴持续性感染小鼠肝脏中的变化特点,探讨其在泡球蚴感染中的免疫作用。方法将90只雌性Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组通过腹腔接种原头蚴悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,对... 详细信息

目的研究负性协同刺激分子PD-1和CTLA-4表达水平在泡球蚴持续性感染小鼠肝脏中的变化特点,探讨其在泡球蚴感染中的免疫作用。方法将90只雌性Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组通过腹腔接种原头蚴悬液制备泡球蚴感染小鼠模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。分别在接种2、8、30、90、180和330 d收集标本。用HE染色观察肝脏病理变化;免疫组化法和实时荧光定量PCR检测PD-1和CTLA-4在肝脏的表达及分布。结果肝脏泡球蚴持续性感染中,PD-1和CTLA-4在感染早期少量表达;感染中晚期表达水平均明显升高,而且均维持一定的高水平。结论 PD-1与CTLA-4表达的增加可能促进泡球蚴感染病情的发展,参与泡球蚴的免疫逃避并利于泡球蚴在机体内的长期寄生。

关键词： PD-1 CTLA-4 多房棘球绦虫感染

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细粒棘球蚴egG1Y162疫苗对小鼠免疫应答的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第3期29卷 226-231页

作者：刘晓霞马海梅朱明张丽娜曹春宝周晓涛丁剑冰新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院省部共建国家重点实验室培育基地新疆重大疾病医学重点实验室乌鲁木齐830011

目的观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测抗体滴度,并检测各组血清抗体IgG的动态变化。第10周用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT法)检测免疫小鼠脾淋巴细胞体外刺激后的增殖反应,用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法检测脾细胞凋亡率。结果 egG1Y162疫苗免疫组小鼠在第2周免疫后检测到抗体,在免疫第10周,抗体滴度可达到1∶25 600。血清抗体IgG在免疫第2～10周不断升高,并在免疫第10周达到最高水平。MTT法显示egG1Y162疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在体外能被egG1Y162疫苗特异性刺激增生。疫苗刺激后疫苗组增殖水平显著高于对照组、佐剂组和正常组(P<0.05)。AnnexinV-FITC和PI双染色法结果显示实验组小鼠脾细胞原液和ConA刺激细胞凋亡发生率均显著低于对照组(P<0.01),每组ConA刺激脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液培养(P<0.01)。结论细粒棘球绦虫egG1Y162疫苗可诱导小鼠产生高效价抗体并可刺激脾淋巴细胞增殖活化、抑制脾细胞凋亡,特异性抗体反应和脾淋巴细胞增殖活化促进机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应,共同协调诱导机体产生免疫应答反应。

关键词：细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫应答抗体滴度 IgG 细胞增殖细胞凋亡

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共刺激分子OX40在抗感染免疫中的作用

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免疫学杂志 2013年第10期29卷 903-906页

作者：李艳华丁剑冰张韬张耀新新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地

正性共刺激分子OX40与多种疾病(如肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应等)的发生、发展有关,能促进T细胞的活化和细胞因子的分泌。调节性T细胞通过免疫抑制与免疫耐受机制影响疾病的发展。本文主要就OX40/OX40L与调节性T细胞的关联性及... 详细信息

正性共刺激分子OX40与多种疾病(如肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应等)的发生、发展有关,能促进T细胞的活化和细胞因子的分泌。调节性T细胞通过免疫抑制与免疫耐受机制影响疾病的发展。本文主要就OX40/OX40L与调节性T细胞的关联性及其在病毒、细菌、真菌、寄生虫等病原体引起的感染性疾病中的调节机制的研究进展进行简要综述。

关键词： OX40 Treg 感染性疾病

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多房棘球蚴EM18基因片段的克隆与生物信息学预测

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中国人兽共患病学报 2013年第1期29卷 23-26页

作者：刘献飞王红英周晓涛贾海英刘晓霞林仁勇丁剑冰新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院省部共建国家重点实验室培育基地新疆重大疾病医学重点实验室乌鲁木齐830011

目的寻找EM18抗原表位。方法用逆转录PCR方法从多房棘球蚴的RNA扩增EM18基因片段,运用各软件对EM18的二级结构和表面特性、亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位。经3DLigandsite服务器结构预测其... 详细信息

目的寻找EM18抗原表位。方法用逆转录PCR方法从多房棘球蚴的RNA扩增EM18基因片段,运用各软件对EM18的二级结构和表面特性、亲水性、理化性质、可及性、免疫原性和可塑性等方面进行分析,预测其抗原表位。经3DLigandsite服务器结构预测其编码的蛋白质的3D结构。结果 EM18存在潜在的抗原表位,B细胞表位区域:28-43、49-55、59-64、69-79、85-91、99-111、119-129、135-144。结论运用生物信息学方法确定EM18存在8个抗原表位,对进一步研究EM18的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义。

关键词：多房棘球蚴 EM18 生物信息学

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