检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2025年第1期43卷 76-83页

作者：邓冰清阿迪莱·多力坤李寅时阿比旦·艾尼瓦尔孙胜肖雯颖葛聪蕙唐娜姜涛王慧张传山李静新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学实验动物中心新疆乌鲁木齐830011 新疆地区高发疾病研究教育部重点实验室(新疆医科大学) 新疆乌鲁木齐830054 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心) 国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室(中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所)上海200025

目的了解多房棘球蚴感染小鼠腹膜腔免疫细胞迁移及分化的变化,探讨其发挥免疫功能的机制。方法裂解增强绿色荧光蛋白(EGFP)小鼠脾组织,分离EGFP示踪免疫细胞。C57BL/6J小鼠腹腔注射2.5×10^(7)个示踪免疫细胞,5 d后经肝门静脉穿刺接... 详细信息

目的了解多房棘球蚴感染小鼠腹膜腔免疫细胞迁移及分化的变化,探讨其发挥免疫功能的机制。方法裂解增强绿色荧光蛋白(EGFP)小鼠脾组织,分离EGFP示踪免疫细胞。C57BL/6J小鼠腹腔注射2.5×10^(7)个示踪免疫细胞,5 d后经肝门静脉穿刺接种3000个多房棘球蚴原头节。感染19周后,取感染小鼠肝、脾组织,冷冻切片后4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色,免疫荧光观察示踪免疫细胞的分布。分离感染小鼠外周血、肝、脾和腹膜腔免疫细胞,流式细胞术检测EGFP示踪免疫细胞在不同组织的迁移分布和细胞分型,以及细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)的分泌情况。结果免疫荧光结果显示,EGFP示踪细胞主要迁移至小鼠脾组织。肝组织中各型示踪淋巴细胞占比从高到低依次为CD8^(+)T细胞(79.63±5.00)%、CD4^(+)T细胞(7.08±4.00)%、B细胞(2.01±1.00)%(F=396.20,P<0.01);脾组织中各型淋巴细胞占比从高到低依次为CD8^(+)T细胞(73.97±3.56)%、CD4^(+)T细胞(11.92±5.02)%、B细胞(3.86±0.32)%(F=349.00,P<0.01);腹膜腔中各型淋巴细胞占比从高到低依次为CD8^(+)T细胞(45.27±4.53)%、CD4^(+)T细胞(34.60±8.00)%、B细胞(15.03±6.38)%(F=16.90,P<0.05)。肝、脾、腹膜腔中的示踪CD4^(+)T细胞数量分别为2700±3120、14407±11958、3376±1481,示踪CD8^(+)T细胞数量分别为26407±22190、109179±92692、4245±798,示踪B细胞数量分别为698±719、5794±4971、1476±840,3种示踪淋巴细胞均主要分布在脾组织中(F=2.51、3.03、2.62,均P>0.05)。肝组织中各型髓系细胞占比从高到低依次为树突状细胞(3.94±1.33)%、单核细胞(3.79±1.80)%、巨噬细胞(3.13±1.85)%、嗜酸粒细胞(2.40±1.81)%、骨髓来源抑制性细胞(0.76±0.17)%、中性粒细胞(0.67±0.04)%(F=3.21,P<0.05);脾组织中各型髓系细胞占比从高到低依次为树突状细胞(1.86±0.89)%、单核细胞(0.41±0.09)%、巨噬细胞(0.23±0.03)%、中性粒细胞和骨髓来源抑制性细胞[均(0.13±0.14)%]、嗜酸粒细胞(0.04±0.04)%(F=42.70,P<0.01);外周血中组织中各型髓系细胞占比从高到低依次为树突状细胞(0.37±0.28)%、单核细胞(0.22±0.27)%、巨噬细胞(0.22±0.21)%、中性粒细胞和骨髓来源抑制性细胞[均(0.17±0.08)%]、嗜酸粒细胞(0.05±0.08)%(F=0.92,P>0.05)。肝组织的示踪CD4^(+)T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(41.17±19.92)%、(30.70±3.35)%、(2.78±4.81)%(F=8.22,P<0.05);示踪CD8^(+)T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(64.17±3.17)%、(24.85±15.66)%、(5.67±6.35)%(F=27.08,P<0.01)。脾组织的示踪CD4^(+)T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(52.43±19.43)%、(27.67±18.99)%、(4.77±2.23)%(F=6.88,P<0.05);示踪CD8^(+)T细胞中,分泌TNF-α、IFN-γ、IL-4的细胞分别占(40.53±17.79)%、(38.97±18.04)%、(3.23±3.09)%(F=6.15,P<0.05)。腹膜腔的示踪CD4^(+)T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(64.33±6.82)%、(46.43±13.44)%、(4.03±3.51)%(F=36.04,P<0.01);示踪CD8^(+)T细胞中,分泌IFN-γ、TNF-α、IL-4的细胞分别占(53.57±19.17)%、(21.47±8.54)%、(6.13±8.63)%(F=10.24,P<0.05)。结论多房棘球蚴感染小鼠腹膜腔内免疫细胞主要迁移至脾组织,细胞类型以CD8^(+)T细胞和树突状细胞为主。T细胞主要分泌IFN-γ,呈Th1型免疫应答。

关键词：多房棘球蚴病腹膜腔免疫细胞迁移 CD8^(+)T细胞

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人外周血树突状细胞体外稳定培养方法的建立及与磁珠法的比较

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中国地方病学杂志 2010年第5期29卷 572-577页

作者：单骄宇刘弓伯吐尔洪江·吐尔逊张雪阿尔孜古丽·吐逊林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-... 详细信息

目的建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）诱导获得DCs.倒置显微镜观察细胞形态变化,并分别在第3、5、6天用台盼蓝染色法进行细胞活力检测;经过1、2、5 h的贴壁培养后,应用流式细胞仪检测单核细胞表面CD14、CD1a、HLA-DR的表达以确定最佳贴壁时间;经人重组细胞因子诱导培养后,对所获得的细胞检测CD14、CD1a、CD86、CD83、HLA-DR的表达.采用同种混合淋巴细胞反应,评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果经贴壁2 h后诱导培养的DCs形态较典型.磁珠分选法获得的DCs第5、6天细胞活力[（53.333±5.774）%、（38.333±7.638）%]明显低于第3天[（68.667±3.215）%,P均＜0.05];贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天的细胞活力[（92.667±3.055）%、（94.000±1.000）%和（94.667±1.528）%]比较,差异无统计学意义（F=0.737,P＞0.05）;贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天细胞活力均高于磁珠分选法（t值分别为9.374、12.021、12.527,P均＜0.05）.PBMC经磁珠分选前后CD14的阳性表达率分别为（32.457±12.351）%、（41.914±14.858）%,二者比较差异无统计学意义（t=1.295,P＞0.05）.单核细胞表面CD14的阳性表达率在培养2 h时[（35.267±4.658）%]高于培养1、5 h时[（15.033±6.189）%、（21.233±4.895）%,P均＜0.05].培养第6天,DCs表面CD14的阳性表达率[（2.200±1.356）%]较第1天[（32.328±14.517）%]明显下降（t=5.467,P＜0.05）,CD1a的阳性表达率[（43.371±16.250）%]较第1天[（12.300±6.223）%]显著升高（t=2.545,P＜0.05）;而CD86、CD83、HLA-DR的阳性表达率[（16.857±5.686）%、（9.343±5.230）%、（72.800±17.881）%]与第1天[（12.550±16.758）%、（6.250±1.323）%、（64.671±15.588）%]比较,差异无统计学意义（t值分别为0.652、1.137、0.907,P均＞0.05）.同种混合淋巴细胞反应,随着淋巴细胞的增多,增殖能力下降.磁珠分选法中,DCs与淋巴细胞的比例为1：50、1：100时,细胞增殖能力（1.502±0.055、1.507±0.029）较1：10时（1.859±0.049）降低（P均＜0.05）;贴壁培养法中,DCs与淋巴细胞的比例为1：100时,细胞增殖能力（1.545±0.066）较1：10时（2.015±0.301）降低（P＜0.05）.在DCs与淋巴细胞的比例相同时,两种方法得到的DCs在刺激T淋巴细胞方面的能力相近（P＞0.05）.结论与磁珠分选法比较,贴壁培养2 h后的人外周血PBMC再行诱导可获得形态与功能较优的DCs,且此法稳定、简便、经济,是一种适于基础、临床研究的DCs体外培养方法.

关键词：树突细胞细胞培养技术细胞因子类流式细胞术淋巴细胞培养试验混合

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5对引物检测犬棘球蚴病感染方法评价

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中国地方病学杂志 2007年第5期26卷 487-489页

作者：张亚楼温浩马旭东苗玉清陈雪鸿林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的评估5对引物检测犬棘球蚴病感染的PCR方法并建立可将多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）区分的方法。方法选用引物BG1／3、Bretange：1／2、Eg1f／1r、EM—H15／H17和Cabrera：1／2，扩增稀释的细粒棘球绦... 详细信息

目的评估5对引物检测犬棘球蚴病感染的PCR方法并建立可将多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）区分的方法。方法选用引物BG1／3、Bretange：1／2、Eg1f／1r、EM—H15／H17和Cabrera：1／2，扩增稀释的细粒棘球绦虫虫卵DNA，进行敏感度测定。对水泡带绦虫、多头绦虫、羊绦虫、多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫G1型和G6型进行PCR扩增，测定引物的特异度。结果 5对引物在体外均能检测出1个虫卵的稀释度。Cabrera：1／2引物能在6种寄生虫样本中扩增出相同片段大小的条带：Bretange：1／2引物可以扩增出多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫G1型和G6型；BG1／3引物可以在多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫G1型中扩增出1条带，在细粒棘球绦虫G6型中扩增出2条带：Eg1f／1r可以在细粒棘球绦虫G1型和G6型中扩增出相同片段大小的条带；EM—H15／H17可以在多房棘球绦虫和细粒棘球绦虫G6型中扩增出相同的条带。结论 5对引物中BG1／3具有较强的特异性，其余4对引物特异性不强；利用BG1／3和Eg1f／1r、EM—H15／H17组合可以方便区分细粒棘球绦虫G1型、G6型和多房棘球绦虫。

关键词：棘球蚴病聚合酶链反应敏感性与特异性

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实时荧光定量PCR检测多房棘球蚴感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因方法的建立

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中国地方病学杂志 2009年第6期28卷 593-596页

作者：王俊华刘涛王慧吕国栋卢晓梅王星姜涛温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的建立多房棘球蚴（泡球蚴）感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因（Serpina3g）实时荧光定量PCR（RT—qPCR）的检测方法及与常规RT—PCR检测方法的比较。方法肉眼直视下肝脏穿刺注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型，3个... 详细信息

目的建立多房棘球蚴（泡球蚴）感染小鼠肝脏丝氨酸蛋白酶抑制基因（Serpina3g）实时荧光定量PCR（RT—qPCR）的检测方法及与常规RT—PCR检测方法的比较。方法肉眼直视下肝脏穿刺注射100μl泡球蚴组织匀浆液建立泡球蚴感染小鼠模型，3个月后将小鼠处死，Trizol法提取肝脏总RNA，反转录获得cDNA。依据Serpina3g的编码基因（NM_009251）保守序列，通过Primer5软件设计定量引物，以β—actin作为内参。以健康小鼠肝脏获得的cDNA依次10倍梯度稀释制备标准品（1×10^2～1×10^6pg），利用SYBR Green RT-qPCR方法检测Serpina3g基因，然后根据cDNA浓度与循环值（Ct）的线性关系，绘制标准曲线，确定RT—qPCR检测的最佳条件和重复性；并将RT—qPCR结果与常规RT—PCR琼脂糖凝胶电泳结果进行特异性、灵敏度和定量等方面的比较。结果筛选出Serpina3g基因定量引物，最佳退火温度为56．g℃；RT—qPCR无非特异性扩增，标准品及样品熔解温度均在80．5℃，熔解峰单一；标准曲线斜率为-2．833（效率），相关系数r=0．996：5个不同梯度的样本（1×10^2～1×10^6pg）重复检测5次均为阳性，变异〈5％；mRNA检出限为1×10^2pg，总RNA在1×10^2-1×10^6pg内均可以进行扩增；常规RT-PCR方法mRNA检出限仅为1×10^6pg。结论成功建立了小鼠源Serpina3g的RT—qPCR检测方法，在特异性、灵敏度、重复性和定量方面优于常规RT—PCR。

关键词：多房棘球蚴绦虫实时荧光定量聚合酶链式反应丝氨酸蛋白酶抑制基因

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细粒棘球绦虫原头蚴和成虫发育调控基因Ras GTPase的克隆及序列分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第1期27卷 91-93页

作者：吕国栋王俊华卢晓梅温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

应用RT-PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴和成虫中克隆出Eg Ras GTPase基因,分别命名为Eg Ras-pro(GenBank登录号为EU560397)和Eg Ras-adult(GenBank登录号为EU560398)。生物信息学分析表明两者cDNA长度均为552bp,编码184个氨基酸... 详细信息

应用RT-PCR方法分别从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴和成虫中克隆出Eg Ras GTPase基因,分别命名为Eg Ras-pro(GenBank登录号为EU560397)和Eg Ras-adult(GenBank登录号为EU560398)。生物信息学分析表明两者cDNA长度均为552bp,编码184个氨基酸,等电点(pI)为6.54,彼此间仅有2个碱基和1个氨基酸的差别。同源性比对分析结果显示,Eg Ras-pro和Eg Ras-adult与多房棘球绦虫Ras(EmRas)基因的同源性分别高达98.4%和98.9%;与其他种类的寄生虫、酵母、果蝇及人类的Ras GTPase基因的同源性为53.9%～78.8%。进化树分析发现Eg Ras-pro和EgRas-adult与EmRas和血吸虫Ras(SmRas)相聚集。本研究首次从新疆株细粒棘球绦虫两个发育阶段(原头蚴和成虫)中克隆出Eg Ras GTPase基因,其序列具有较高的保守性。

关键词：细粒棘球绦虫 Ras GTPase 序列分析

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细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 111-116页

作者：单骄宇纪卫政吐尔洪江.吐逊李亮张传山林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室乌鲁木齐830054

目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态,采用流式细胞术检测其表面标志物;用混合淋巴细胞反应(MLR)观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天,收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测;另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖(LPS)刺激24 h后,收集成熟树突状细胞,进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液(为阴性对照组)、重组小鼠γ干扰素(rmIFN-γ,1 000 U/ml,为IFN-γ组)和rAgB(终浓度15μg/ml,为rAgB组),培养24 h后,通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot-ting)检测各组树突状细胞IDO的表达情况。结果获得纯度为80%的CD11c+树突状细胞,在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子I-A/I-E的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MLR结果显示,诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为(4.544±1.752)%、(20.464±4.452)%和(11.148±1.966)%,3组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果表明,3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的灰度值之比分别为(0.229±0.085)、(0.794±0.114)和(0.573±0.129),其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与IFN-γ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功能。

关键词：细粒棘球蚴重组抗原B 树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶免疫耐受

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999例包虫病住院患者经济负担分析

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中华流行病学杂志 2010年第7期31卷 835-836页

作者：王乐冯晓辉段新宇温浩新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室

包虫病为人畜共患寄生虫病，在农、牧区已成为当地居民因病致贫、因病返贫的主要原因之一。为探讨造成包虫病患者经济负担的影响因素和卫生决策者提供参考依据，本研究利用2004--2008年乌鲁木齐市某三级医院包虫病住院患者资料，分析其... 详细信息

包虫病为人畜共患寄生虫病，在农、牧区已成为当地居民因病致贫、因病返贫的主要原因之一。为探讨造成包虫病患者经济负担的影响因素和卫生决策者提供参考依据，本研究利用2004--2008年乌鲁木齐市某三级医院包虫病住院患者资料，分析其经济负担。

关键词：囊型包虫病疾病经济负担人力资本法

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泡球蚴感染小鼠肝脏中IL-10和TGF-β1的动态变化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第1期30卷 32-35页

作者：赵慧白雪聂晓涵王江涛王西完庞楠楠李玉娇马秀敏温浩丁剑冰新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830011 新疆医科大学乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础学院乌鲁木齐830011

目的观察泡球蚴感染小鼠肝脏中白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β1)的动态变化。方法将60只雌性BALB/c小鼠随机均分为实验组和对照组,实验组腹腔注射活原头节悬液0.2ml(约含400个原头节),对照组腹腔注射等量生理盐水,分别... 详细信息

目的观察泡球蚴感染小鼠肝脏中白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β1)的动态变化。方法将60只雌性BALB/c小鼠随机均分为实验组和对照组,实验组腹腔注射活原头节悬液0.2ml(约含400个原头节),对照组腹腔注射等量生理盐水,分别于接种后2、8、30、90、180和360d各处死5只小鼠,取肝组织进行病理学检查,并用免疫组织化学法检测肝组织中IL-10和TGF-β1的表达情况。结果实验组小鼠,腹腔和肝小叶出现多处直径不等的小囊泡,随感染时间的延长逐渐增多增大,与周围肝组织分界不明显。HE染色显示,实验组小鼠肝脏出现炎症细胞浸润,泡球蚴纤维囊壁与肝细胞和囊壁之间炎症反应带的形成等不同程度的病理改变;对照组小鼠肝小叶结构完整,偶见少量炎症细胞浸润,肝细胞胞浆疏松化和脂肪变性。实验组小鼠肝组织表达水平随着泡球蚴感染时间的延长而逐渐上升,感染后90d,实验组小鼠肝组织中IL-10和TCF-β1的表达水平均达高峰,细胞阳性率分别为(16.39±1.73)%和(23.69±2.29)%,与对照组比较[(1.09±0.10)%和(0.98±0.09)%]差异均有统计学意义(P<0.01),而且之后均维持在较高水平。结论小鼠泡球蚴感染中晚期,IL-10和TGF-β1表达水平均提高,其免疫抑制作用不利于清除和控制肝脏中泡球蚴。

关键词：泡球蚴 CD4^+CD25^+调节性T细胞细胞因子

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两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较

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中国地方病学杂志 2006年第5期25卷 561-564页

作者：张春桃王俊芳林仁勇张彤王星卢晓梅王俨张琰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PC... 详细信息

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。

关键词：克隆分子 DNA 重组质粒

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细粒棘球绦虫egG1Y162抗原基因的克隆及序列分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第2期27卷 177-179页

作者：曹春宝马秀敏丁剑冰贾海英吾拉木·马木提马海梅温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011

根据多房棘球绦虫emY162基因序列设计引物,利用PCR以细粒棘球绦虫原头蚴和成虫的基因组DNA和cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162和PUCm-T/egG1Y162cDNA重组质粒,经PCR、酶切及测序后,进行序列分析。细粒棘球绦虫2个不同发... 详细信息

根据多房棘球绦虫emY162基因序列设计引物,利用PCR以细粒棘球绦虫原头蚴和成虫的基因组DNA和cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162和PUCm-T/egG1Y162cDNA重组质粒,经PCR、酶切及测序后,进行序列分析。细粒棘球绦虫2个不同发育阶段均克隆出egG1Y162基因,从基因组DNA和cDNA克隆得到的片段长度分别为1680bp和459bp,登录号分别为AB458258和AB458259。

关键词：细粒棘球绦虫 egG1Y162 克隆序列分析

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