检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2016年第12期11卷 1089-1093页

作者：杨舒婷张传山李亮毕晓娟林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院临床研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的研究肝泡型包虫病患者肝脏细胞Gadd45β(growth arrest and DNA damage gene 45β)及细胞周期调控相关基因的表达及意义。方法采集24例肝泡型包虫病患者肝脏标本,分为病灶旁组织(Close)和远端组织(Distance)。用重组TGF-β1(1ng/ml... 详细信息

目的研究肝泡型包虫病患者肝脏细胞Gadd45β(growth arrest and DNA damage gene 45β)及细胞周期调控相关基因的表达及意义。方法采集24例肝泡型包虫病患者肝脏标本,分为病灶旁组织(Close)和远端组织(Distance)。用重组TGF-β1(1ng/ml)及泡球蚴匀浆蛋白(1mg/ml)刺激体外培养的HL-7702人肝细胞,分别于30min、1h、6h、12h、24h、48h收集细胞。患者肝脏标本及刺激后收集的细胞均采用Trizol法提取RNA,反转录cDNA,通过实时荧光定量PCR检测目的基因表达并进行分析。结果近旁组织PCNA,TGF-β1,cyclinA1,cyclinE基因相对表达量分别为1.934±1.337、1.155±0.5138、1.367±0.8087、1.384±1.116、1.580±1.005、1.899±1.173和1.478±1.189,显著高于远端组织(1.00±0.00)且差异有统计学意义(P<0.05),而Gadd45β,cyclinB1,cyclinD差异无统计学意义(P>0.05)。用重组TGF-β1(1ng/ml)及泡球蚴匀浆蛋白(1mg/ml)刺激体外培养的HL-7702人肝细胞,引起Gadd45β,cyclinA1,cyclinE表达上调。结论泡球蚴匀浆蛋白刺激,可引起肝细胞Gadd45β及细胞周期相关蛋白表达上调,参与细胞抗凋亡过程。泡球蚴感染晚期,肝脏中仍存在细胞周期素(cyclins)参与的细胞增殖,但同时TGF-β1高表达,并通过Smads信号通路促进肝纤维化相关蛋白表达,促成肝脏泡型包虫病晚期病理变化。

关键词：泡型包虫病 Gadd45β 细胞周期泡球蚴

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细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析

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畜牧兽医学报 2015年第7期46卷 1215-1223页

作者：赵莉石保新李军张壮志马正海张旭薛晶金映红张文宝新疆畜牧科学院兽医研究所乌鲁木齐830000 新疆医科大学第一附属医院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆大学生命科学与技术学院重点实验室乌鲁木齐830046

细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线... 详细信息

细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对测序结果进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果显示:对PSC-CW和PSC-AW文库进行扩增,分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR鉴定结果表明,这些克隆均插入200~1 000bp片段。测序结果显示从PSC-CW和PSC-AW SSH文库中分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个出现频率较高的基因,其余12个基因仅出现1次,其中5个为未知基因,已知基因分别编码细胞色素C氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白质。PSC-AW SSH文库中得到10个基因,其中2个出现频率较高基因,8个基因仅出现1次,4个为未知基因,6个已知基因分别编码基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白质。本研究筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运功能的相关基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。

关键词：细粒棘球绦虫抑制差减杂交特异性基因

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泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究

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中国寄生虫病防治杂志 2005年第1期18卷 33-36页

作者：王俨林仁勇丁剑冰卢晓梅张静萍王星梁晓慧张亚楼张琰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达... 详细信息

　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,克隆入原核表达载体 pET 41a(+),构建原核表达质粒 pET41a Em18;转化大肠埃希菌BL21(DE3),酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经 IPTG诱导表达 rEm18 GST重组蛋白和GST重组蛋白,用谷光甘肽 Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化,通过 SDS PAGE和Western blot试验分析鉴定。　结果　测序表明构建的 pET41a Em18 原核表达质粒均为正确连接,插入 Em18 基因片断为486 bp。SDS PAGE检测表明Em18基因以 rEm18 GST重组蛋白的方式得到成功表达,在相对分子质量单位 50ku处有表达条带;Western blot分析显示,rEm18 GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。　结论　成功构建了 pET41a Em18原核表达质粒,获得的 rEm18 GST重组蛋白具有生物活性和抗原性,有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。

关键词：泡球蚴 Em18基因原核表达鉴定

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阿苯达唑脂质体治疗66例人体包虫病的疗效观察

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地方病通报 2004年第1期19卷 16-19,F004页

作者：李海涛柯山邵英梅杨文光温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的　综合评价阿苯达唑脂质体 (L -ABZ)治疗人体包虫病的疗效 ,并进行安全性考察 ,为该药在临床的应用提供客观依据。方法　临床治疗了 66例包虫病患者 ,其中囊型包虫病 5 6例、泡型包虫病 10例 ,口服阿苯达唑脂质体 10mg·kg-1 &#... 详细信息

目的　综合评价阿苯达唑脂质体 (L -ABZ)治疗人体包虫病的疗效 ,并进行安全性考察 ,为该药在临床的应用提供客观依据。方法　临床治疗了 66例包虫病患者 ,其中囊型包虫病 5 6例、泡型包虫病 10例 ,口服阿苯达唑脂质体 10mg·kg-1 ·d-1 ,一天两次 ,连续服用 ,疗程 3～ 12个月 ,通过影像学指标观察 ,结合临床症状和体征及生化指标进行综合评价 ,动态随访 3～ 2 4个月。按治愈率、有效率、部分有效率、无效率以及总有效率判断疗效 ,并对单囊型及与多子囊型以及原发、复发病人进行对照分析。结果　共治愈 2 0例 ( 2 0 /66) ,治愈率为 3 0 . 3 %;有效 2 9例 ( 2 9/66) ,有效率 43 . 9%;部分有效 10例 ( 10 /66) ,部分有效率 15 . 1%;无效 7例 ( 7/66) ,无效率 10 . 6%;总有效率为 89. 3 %( 5 9/66)。其中 ,单囊型的治愈率明显高于多子囊型 ,但二者的有效率无显著性差异 (P <0 . 1) ;而原发、复发病人的治疗阿苯达唑脂质体的疗效无明显差异 (P >0 . 1) ;泡型包虫病患者 ,约 5 0 %病例临床疗效明显。在安全性观察中 ,主观症状阳性率为 13 . 6%( 9/66) ,生化指标阳性率为 12 . 1%( 8/66)。结论　阿苯达唑脂质体口服液是目前有效的一种抗包虫病新药剂型 ,具有疗效较高 ,低毒、副作用小。

关键词：包虫病阿苯达唑脂质体药物治疗学疗效观察

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大鼠泡型包虫病灶切除手术前后Th17细胞的变化特点及作用

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中国病原生物学杂志 2013年第9期8卷 799-802,826页

作者：商少华巫姜李涛吐尔洪江·吐逊林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心新疆乌鲁木齐830054 第四军医大学晒京医院血管内分泌外科陕西西安710032

目的榆测包虫病灶切除术前、术后Th17相关细胞因子（IL-17、IL-23）的表达，探明包虫病灶切除术前、术后免疫状态变化情况。方法将SD大鼠分为健康对照组、泡球蚴感染对照组和泡球蚴病手术组（简称手术组），分别于腹股沟注射感染泡球蚴... 详细信息

目的榆测包虫病灶切除术前、术后Th17相关细胞因子（IL-17、IL-23）的表达，探明包虫病灶切除术前、术后免疫状态变化情况。方法将SD大鼠分为健康对照组、泡球蚴感染对照组和泡球蚴病手术组（简称手术组），分别于腹股沟注射感染泡球蚴（健康对照组用中理盐水代替），3月后将感染成功的大鼠纳入试验。对手术组大鼠切除皮下包虫病灶，术后第1～7d各处死大鼠6只，第7d处死健康对照组和泡球蚴感染对照组大鼠各6只，采集下腔静脉血液和肝脏组纵，分别用ELISA法检测血清和肝匀浆组织IL-17和IL-23水平，用Real—timeRT—PCR检测肝脏IL-17mRNA和IL-23mRNA表达水平。结果包虫病大鼠血清IL-17和IL-23分别为（8．38±1．04）pg／ml和（352．69±25．04）pg／ml，健康对照组分别为（17．14±1．21）pg／ml和（450．05±29．37）pg／ml，差异有统计学意义（P〈0．05）；手术组术后分别于第2d和第3d开始增高，于第6d和第7d开始趋于正常。包虫病大鼠肝匀浆IIL-17和IL-23分别为（7．68±2．21）pg／ml和（336．65±28．73）pg／ml，健康对照组分别为（16．88±2．36）pg／ml和（446．68±24．53）pg／ml，差异有统计学意义（P〈0．05）：于术组术后分别于第3d和第4d开始增高，IL-17于第7d趋于正常，IL23第7d仍低于健康对照组。包虫病大鼠肝IL-17mRNA和IL-23mRNA分别为（0．32±0．08）pg／ml和（0．96±0．79）pg／ml，健康对照组分别为（0．73±0．97）pg／ml和（1.57±0．73）pg／ml，羞异有统计学意义（P〈0．05）；手术组术后分别于第1d和第3d开始增高．于第4d和第6d开始趋于正常。结论IL-17和IL-23为Th17细胞发挥功能的主要细胞因子。包虫病灶切除后，包虫寄生所致的IL-17和IL-23抑制状态能存较短时间内恢复并趋于正常，进而可能对其他感染或者移植器官产生趋于日常的免疫排斥反应。

关键词：泡型包虫病辅助性T-17细胞白介素17 白介素-23

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LAG3分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响

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中国人兽共患病学报 2024年第6期40卷 529-536页

作者：郑旭然邓冰清康雪娇李寅时阿比旦·艾尼瓦尔余倩孜比姑·肉素阿迪莱·多力坤王茂林王慧张传山李静新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院、省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室、新疆维吾尔自治区包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆地区高发疾病研究教育部重点实验室(新疆医科大学) 乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区地方病分子生物学重点实验室乌鲁木齐830054

目的探究淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3,LAG3)分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响。方法将野生型(C57-wild-type, WT)和LAG3基因敲除(LAG3-knockout, LAG3-KO)小鼠经肝门静脉注射泡球蚴原头节,... 详细信息

目的探究淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3,LAG3)分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响。方法将野生型(C57-wild-type, WT)和LAG3基因敲除(LAG3-knockout, LAG3-KO)小鼠经肝门静脉注射泡球蚴原头节,感染12周免疫组织化学染色观察小鼠肝脏CD19和α-SMA表达及定位,流式细胞术检测小鼠肝脏B细胞及其各亚群和表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子的表达情况。结果泡球蚴感染12周小鼠肝脏LAG3-KO组CD19阳性区及面积占比略高于WT组,但差异均无统计学意义。α-SMA在LAG3-KO组阳性区及面积占比显著高于WT组(t=-3.224、-3.227,P均<0.05)。LAG3-KO组肝脏B细胞表达CD80和MHC-Ⅱ分子的比例显著上调,差异具有统计学意义(t=-2.379、-3.321,P均<0.05)。LAG3-KO组B2细胞占比显著高于WT组,差异有统计学意义(t=-2.695,P<0.05)。LAG3-KO组B1b细胞表达CD80比例亦显著上调,差异具有统计学意义(t=-5.315,P<0.001),而B2细胞表达CD80比例显著低于WT组,且差异具统计学意义(t=2.806,P<0.05)。LAG3-KO组B2细胞表达MHC-Ⅱ分子显著上调,且具统计学差异(t=-4.227,P<0.01)。结论泡球蚴感染中期12周,LAG3分子影响小鼠肝脏B细胞亚群及功能,并以B2型淋巴细胞尤为显著,LAG3对B细胞的活化以及MHC-Ⅱ类分子表达产生抑制作用,提示其可能参与泡球蚴感染下的B细胞耗竭。

关键词：泡球蚴淋巴细胞活化基因-3 B细胞 B细胞亚群

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维吾尔族和汉族CD55和CD59流式细胞学测定与分析

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疾病预防控制通报 2011年第1期26卷 35-37页

作者：张雪王俊华张静萍卢晓梅林仁勇段新宇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的建立CD55、CD59流式细胞学检测平台,并探讨329例维吾尔、汉不同民族CD55、CD59表达差异。方法使用流式细胞仪对样本外周血CD55、CD59进行检测,对加入试剂量和抗体孵育时间进行摸索,对计量资料采用Multinomial Logistic回归分析。结... 详细信息

目的建立CD55、CD59流式细胞学检测平台,并探讨329例维吾尔、汉不同民族CD55、CD59表达差异。方法使用流式细胞仪对样本外周血CD55、CD59进行检测,对加入试剂量和抗体孵育时间进行摸索,对计量资料采用Multinomial Logistic回归分析。结果 CD55、CD59检测值呈现出随着试剂量增加而先增加后趋于平稳的趋势,在保证检测结果准确的前提下,为了节约成本,选择加入试剂量为10μl;随着孵育时间的延长,检测值呈现先增加后稍有降低的趋势,在抗体充分结合的前提下,为避免长时间对荧光造成淬灭的现象,选择抗体孵育时间为15min;通过对329例检测结果进行分析,发现CD55在维吾尔族和汉族人群中表达差异有统计学意义(P=0.044),与年龄、性别无关,而CD59的表达在不同的性别中稍有差异(P=0.044),与年龄、民族无关。结论分析结果提示膜蛋白缺失存在遗传易感性,这一新发现为PNH等一些血液病的研究提供了新的方向,为其临床治疗提供理论基础和新的思路。

关键词：维吾尔族汉族 CD55 CD59 流式细胞术

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细粒棘球绦虫抗原EgAgB8／1和EgAgB8／3亚单位基因在虫体发育过程中的阶段性表达

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中国病原生物学杂志 2009年第5期4卷 355-358页

作者：张海涛马秀敏吾拉木·马木提马海梅贾海英曹春宝丁剑冰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病VIP实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的研究细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB)8 ku 1和3亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/3)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分... 详细信息

目的研究细粒棘球绦虫抗原B(EgAgB)8 ku 1和3亚单位基因家族成员(EgAgB8/1、EgAgB8/3)在虫体发育各阶段(虫卵、棘球蚴生发层、原头蚴及成虫)基因表达的差异,为包虫感染中间宿主和终末宿主的免疫学诊断筛选期特异性优势表达抗原。方法分别从细粒棘球绦虫成虫、虫卵、原头蚴和棘球蚴生发层提取总RNA,用Avian Myelo-blastosis Virus Reverse Transcriptase XL反转录成cDNA,根据EgAgB8/1和EgAgB8/3序列设计跨越内含子的基因特异性引物。基因表达差异应用SYBR GreenⅠreal-time PCR进行定量分析,并用内参对照基因actinⅡ来标准化定量结果。结果Real-time PCR检测显示,EgAgB8/1在棘球蚴生发层大量表达,SQ/Actin=68.874;EgAgB8/3在成虫阶段大量表达,SQ/Actin=1 905.512。结论EgAgB 2个亚单位基因的表达在虫体发育各个阶段显现出明显差异。提示EgAgB8/1可作为包虫感染中间宿主免疫学诊断最佳候选目的抗原,而EgAgB8/3可作为包虫感染终末宿主免疫学诊断的靶抗原。EgAgB 2个亚单位基因的阶段差异表达可能与其虫体发育不同阶段特有的生物学功能有关。

关键词：细粒棘球绦虫抗原B亚单位荧光定量PCR 表达

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细粒棘球蚴egG1Y162抗原基因的克隆及蛋白质序列分析

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中国病原生物学杂志 2008年第12期3卷 903-906页

作者：曹春宝马秀敏丁剑冰贾海英吾拉木·马木提张海涛朱明马海梅吕国栋温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病VIP实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的克隆细粒棘球蚴egG1Y162基因序列并进行蛋白序列对比分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴提取mRNA,mRNA反转录为cDNA。设计特异引物,以cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后进行序列分析。结... 详细信息

目的克隆细粒棘球蚴egG1Y162基因序列并进行蛋白序列对比分析。方法从细粒棘球蚴原头蚴提取mRNA,mRNA反转录为cDNA。设计特异引物,以cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后进行序列分析。结果egG1Y162 cDNA为459bp,编码153个氨基酸;同源性比较表明,egG1Y162 cDNA与emY162同源性为95%,与eg95的同源性为30.61%。结论成功克隆egG1Y162抗原基因,egG1Y162蛋白质氨基酸序列与emY162有很高的相似性,但同其他抗原蛋白质序列存在明显差异,所以egG1Y162是一种新的抗原基因。

关键词：细粒棘球蚴 egG1Y162 cDNA 序列分析

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细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及生物学功能鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 220-224页

作者：王慧李军张富春张文宝温浩新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆大学生命科学与技术学院

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pP... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(Echinococcus granulosus thioredoxin peroxidase,EgTPx),并检测其抗氧化活性。方法从包囊中分离原头蚴,抽提总RNA,采用RT-PCR获取EgTPx的cDNA片段并克隆至分泌型表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K-EgTPx,电穿孔法转化毕赤酵母菌株GSll5,在MD平板上筛选His+克隆,采用梯度浓度G418抗性筛选高拷贝转化子,提取酵母基因组DNA,采用PCR鉴定Mut表型,阳性克隆经甲醇诱导表达EgTPx蛋白,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并检测其抗氧化活性。结果酶切和测序证实重组表达质粒pPIC9K-EgTPx构建正确,表达的目的蛋白分子质量单位约为22ku,该蛋白可被鼠抗EgTPx多抗识别,且具有较强的抗氧化活性。结论在毕赤酵母表达系统中成功表达了EgTPx,该蛋白具有免疫反应性和抗氧化活性。

关键词：细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶毕赤酵母分泌表达抗氧化

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