检索结果-内蒙古大学图书馆

细粒棘球蚴MAPKK样激酶及其下游成员ERK和P38酵母双杂交载体的构建与自激活鉴定

中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 207-210,215页

作者：张传山杨乐王丽敏李亮王俊华吕国栋林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成员ERK、P38酵母双杂交载体,并检测融合蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性. 方法采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,生理盐水冲洗5次,TRIzol... 详细信息

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成员ERK、P38酵母双杂交载体,并检测融合蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性. 方法采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,生理盐水冲洗5次,TRIzol法提取原头蚴总RNA,取1μg RNA反转录cDNA.以cDNA为模板,PCR分别扩增EgMKK1、EgERK和EgP38基因片段,分别经限制性内切酶EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和SalⅠ双酶切,酶切片段连接至酵母双杂交载体pGADT7或pGBKT7,经酶切及测序鉴定正确后,应用PEG/LiAc法将重组载体转化入感受态酵母菌株Y2HGold,利用固体培养基筛选,检测融合蛋白对酵母菌株生长的毒性作用及自激活活性.结果经PCR扩增,分别获得目的基因EgMKK1、EgERK和EgP38.构建的重组酵母双杂交载体pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK及pGBKT7-EgP38经双酶切,分别得到1 017 bp、1 086 bp和1 107 bp目的基因片段,大小与预测值相符.重组酵母双杂交载体转化Y2HGold酵母菌在SD/-Trp平板上形成直径为1.5～2.0 mm的菌落,与原始载体pGADT7或pGBKT7转化酵母菌菌落大小一致;重组酵母双杂交载体转化酵母菌在SD/-Trp和SD/-Leu平板均有直径约2 mm白色菌落生长,而SDO/X/A和DDO/X/A固体培养基平板上无蓝色菌落生长. 结论成功构建了酵母双杂交载体pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK和pGBKT7-EgP38,其表达蛋白对酵母菌Y2 HGold无毒性和自激活作用,为进一步研究EgMKK1与其下游成员EgERK、EgP38之间的相互作用奠定了基础.

关键词：细粒棘球绦虫 MAPK 酵母双杂交毒性自激活

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棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1/PD-L1与相关细胞因子的水平变化

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第4期30卷 421-423页

作者：李艳华王晶胡晓安庞楠楠辛燕魏琴马秀敏丁剑冰新疆医科大学基础医学院新疆医科大学附属中医医院呼吸生理病理实验室新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室基地

目的检测包虫患者血清中可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)及其配体sPD-L1,Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-6以及Th17细胞因子IL-17的分泌水平,探讨它们在包虫病感染过程中的相关作用。方法采用细胞因子磁珠阵列测定(CBA)法检测包虫... 详细信息

目的检测包虫患者血清中可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)及其配体sPD-L1,Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-6以及Th17细胞因子IL-17的分泌水平,探讨它们在包虫病感染过程中的相关作用。方法采用细胞因子磁珠阵列测定(CBA)法检测包虫患者血清中Th1、Th2、Th17细胞因子的分泌水平;ELISA检测可溶性PD-1、PD-L1的表达水平。结果与健康对照组相比,棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1的浓度略升高但低于sPD-L1,sPD-L1浓度升高明显,Th2、Th17细胞相关细胞因子的分泌水平明显升高(P<0.01),而Th1细胞相关细胞因子分泌水平未见明显变化(P>0.05)。结论棘球蚴病感染过程中存在Th1/Th2的表达失衡,而炎性细胞Th17细胞参与机体免疫调节。sPD-1与sPD-L1通过动态平衡参与机体免疫调控,促进棘球蚴免疫逃逸。

关键词：可溶性PD-1 可溶性PD-L1 包虫病细胞因子

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细粒棘球绦虫Eg95抗原表位的生物信息学预测

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中国人兽共患病学报 2011年第10期27卷 892-896,900页

作者：李玉娇王晶赵慧贾海英李博马秀敏温浩丁剑冰新疆医科大学第一附属医院新疆重点实验室乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属中医医院乌鲁木齐830000 新疆自治区人民医院乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011

目的应用软件和在线网络分析Eg95的蛋白二级结构,预测B细胞表位和T细胞表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效的表位疫苗奠定基础。方法采用DNAStar软件和在线网站IEDB、SYFPEITHI等对Eg95的B细胞表位和T细胞表位进行预测。结果 Eg9... 详细信息

目的应用软件和在线网络分析Eg95的蛋白二级结构,预测B细胞表位和T细胞表位,为确定和筛选优势表位,研制安全、高效的表位疫苗奠定基础。方法采用DNAStar软件和在线网站IEDB、SYFPEITHI等对Eg95的B细胞表位和T细胞表位进行预测。结果 Eg95存在潜在的抗原表位,B细胞表位区域:16-38,41-48,50-67,68-90,92-100,103-113,120-132。分值高的T细胞表位区域:6-14,14-22,48-56,4-12,98-106,142-150,146-154。结论运用生物信息学方法确定Eg95存在7个抗原表位,对进一步研究Eg95的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义。

关键词： Eg95 抗原表位生物信息学

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Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原基因在泡球蚴感染中期小鼠肝脏中的表达及意义

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中国病原生物学杂志 2012年第9期7卷 653-656页

作者：王俊华魏绪法张传山吕国栋姜涛卢晓梅温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬... 详细信息

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬液,建立疾病动物模型;对照组以同样方法注射等量生理盐水。于感染中期第12周,颈椎脱臼处死小鼠,实验组取病变组织和病变邻近肝组织,对照组取注射部位所在肝组织以及临近肝组织,用4%甲醛固定,常规石蜡包埋,HE、Masson染色后观察形态学改变和肝纤维化程度。取病变临近肝组织,提取总RNA,反转录合成cDNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Col1a1、Col3a1、Col4a1基因的表达,计量结果用相对单位(AU)表示。结果泡球蚴感染组和对照组Collal基因表达量分别为(2.155±0.809)AU和(1.000±0.221)AU,差异有统计学意义(t=3.427,P<0.05);Col3a1基因表达量分别为(18.641±10.244)AU和(1.000±0.412)AU,差异有统计学意义(t=10.324,P<0.01);Col4a1基因表达量分别为(0.894±0.495)AU和(1.000±0.381)AU,差异无统计学意义(t=1.932,P>0.05)。Masson染色检查泡球蚴感染组肝纤维化评分为2.72±1.04,对照组为1.0,差异有统计学意义(t=4.105,P<0.05)。结论在泡球蚴感染小鼠中期,引起肝纤维化的胶原主要为Ⅲ型和Ⅰ型。

关键词：胶原泡球蚴肝纤维化实时荧光定量PCR

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细粒棘球蚴囊液对HepG2肝癌细胞系细胞周期的影响

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中国病原生物学杂志 2012年第2期7卷 124-128页

作者：李朝旺赵晋明张传山吕国栋王俊华李静范金亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的... 详细信息

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的表达水平,并与无FCS组比较。结果 Western blot检测显示,15%、30%HCF组p-ERK分别在换液培养3h和30min高表达(P<0.05),PCNA分别在3h和12h高表达(P<0.05),cyclin-D1在3h高表达(P<0.05),cyclin-A分别在3h和12h高表达(P<0.05),15%HCF组cyclin-E在3h高表达(P<0.05),15%、30%HCF组cyclin-B1在各时间点表达量微弱(P<0.05)。结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害,且对其增殖有一定的促进作用。

关键词：细粒棘球蚴囊液肝细胞细胞周期细胞增殖

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细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123的克隆、表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2017年第1期12卷 38-41页

作者：王慧齐文静何黎郭宝平张文宝李军新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转... 详细信息

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,采用SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,Western blot鉴定其免疫反应性。结果 PCR扩增EgM123基因片段长度为594bp,经酶切分析和测序鉴定证明pET28a-EgM123原核表达载体构建正确。重组质粒转化BL21在37℃条件下,经IPTG(终浓度为0.4mmol/L)诱导3h,获得分子质量单位约为29ku的EgM123蛋白,与理论值相符。该蛋白能被EgM123-GST免疫兔抗血清识别。结论成功构建了pET28a-EgM123原核表达载体,表达蛋白具有免疫反应性,为研制包虫病疫苗奠定了基础。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫 EgM123 蛋白表达疫苗

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细粒棘球绦虫DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2基因的克隆及序列分析

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中国病原生物学杂志 2012年第7期7卷 510-512,526页

作者：吕国栋叶建蔚张传山王俊华李亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息... 详细信息

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析,半定量反转录PCR分析其在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中的表达情况。结果 EgPolD2基因开放阅读框为1 218bp,编码405个氨基酸,等电点为4.74。NCBI保守功能区分析软件预测EgPolD2蛋白第113～378个氨基酸为MPP_PolD2_C结构域。登陆GenBank进行Blast比对,EgPolD2与曼氏血吸虫SmPolD2基因同源性为32.1%,与线虫和人等其他物种PolD2基因同源性在18.3%～22.8%之间。进化树分析表明EgPolD2与SmPolD2相聚集,与其他物种同源性较低。半定量RT-PCR显示,EgPolD2在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中均有表达,且表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功克隆出细粒棘球绦虫EgPolD2新基因,为进一步研究抗细粒棘球绦虫药物靶标奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 EgPolD2 序列分析

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细粒棘球蚴egG1Y162疫苗对小鼠免疫应答的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第3期29卷 226-231页

作者：刘晓霞马海梅朱明张丽娜曹春宝周晓涛丁剑冰新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院省部共建国家重点实验室培育基地新疆重大疾病医学重点实验室乌鲁木齐830011

目的观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测抗体滴度,并检测各组血清抗体IgG的动态变化。第10周用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT法)检测免疫小鼠脾淋巴细胞体外刺激后的增殖反应,用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法检测脾细胞凋亡率。结果 egG1Y162疫苗免疫组小鼠在第2周免疫后检测到抗体,在免疫第10周,抗体滴度可达到1∶25 600。血清抗体IgG在免疫第2～10周不断升高,并在免疫第10周达到最高水平。MTT法显示egG1Y162疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在体外能被egG1Y162疫苗特异性刺激增生。疫苗刺激后疫苗组增殖水平显著高于对照组、佐剂组和正常组(P<0.05)。AnnexinV-FITC和PI双染色法结果显示实验组小鼠脾细胞原液和ConA刺激细胞凋亡发生率均显著低于对照组(P<0.01),每组ConA刺激脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液培养(P<0.01)。结论细粒棘球绦虫egG1Y162疫苗可诱导小鼠产生高效价抗体并可刺激脾淋巴细胞增殖活化、抑制脾细胞凋亡,特异性抗体反应和脾淋巴细胞增殖活化促进机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应,共同协调诱导机体产生免疫应答反应。

关键词：细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫应答抗体滴度 IgG 细胞增殖细胞凋亡

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泡球蚴组织蛋白处理对人肝星状细胞α-SMA和COL1A1表达及TGF-β/Smad信号通路的影响

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中国病原生物学杂志 2017年第10期12卷 956-960页

作者：毕晓娟张传山李亮马洋洋吕国栋吐尔干·艾力邵英梅林仁勇新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心肝胆包虫外科

目的探讨泡球蚴组织蛋白在肝星状细胞活化中的作用。方法用不同浓度泡球蚴组织蛋白体外刺激人肝星状细胞,以PBS处理作为阴性对照,TGF-β1处理肝星状细胞作为阳性对照,分别采用qRT-PCR和Western blot检测肝星状细胞中COL1A1、α-SMA和TGF... 详细信息

目的探讨泡球蚴组织蛋白在肝星状细胞活化中的作用。方法用不同浓度泡球蚴组织蛋白体外刺激人肝星状细胞,以PBS处理作为阴性对照,TGF-β1处理肝星状细胞作为阳性对照,分别采用qRT-PCR和Western blot检测肝星状细胞中COL1A1、α-SMA和TGF-β/Smad信号通路基因及蛋白表达水平。结果 60和600μg/ml泡球蚴蛋白处理肝星状细胞后α-SMA mRNA相对表达量分别为2.16±0.33和2.72±0.49,COL1A1mRNA相对表达量分别为1.73±0.12和5.39±0.14;TGF-β1处理肝星状细胞后α-SMA mRNA相对表达量为13.43±0.27,COL1A1mRNA相对表达量为18.89±2.59;PBS阴性对照组α-SMA基因相对表达量1.07±0.42,COL1A1基因相对表达量1.00±0.02。不同浓度泡球蚴蛋白组和TGF-β1处理组与PBS阴性对照组相比α-SMA及COL1A1mRNA相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);肝星状细胞泡球蚴组织蛋白处理组与TGF-β1处理组α-SMA和COL1A1的蛋白水平较阴性对照组显著升高(P<0.05)。TGFβ-RII基因相对表达量在600μg/ml泡球蚴组织蛋白处理组为1.71±0.08,与PBS阴性对照组1.09±0.43相比差异具有统计学意义(P<0.05);Smad2基因相对表达量在TGF-β1处理组为1.68±0.29,与PBS阴性对照组1.07±0.42相比差异有统计学意义(P<0.05);Smad3基因相对表达量在600μg/ml泡球蚴组织蛋白处理组为2.41±0.84,TGF-β1处理组为1.61±0.15,与PBS阴性对照组1.00±0.09相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论泡球蚴组织蛋白中有类似TGF-β作用的能够诱发宿主肝星状细胞活化的细胞因子,该细胞因子可能参与泡球蚴感染所致宿主肝纤维化损伤。

关键词：泡球蚴肝星状细胞纤维化 COL1A1 α-平滑肌肌动蛋白

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Tim-3及其配体Galectin-9与病毒感染的关系

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基础医学与临床 2012年第9期32卷 1095-1098页

作者：赵慧王亮马秀敏丁剑冰新疆医科大学第一附属医院省部共建国家重点实验室培育基地新疆重大疾病医学重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院检验科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830011

T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)基因是Tim家族成员,与其配体半乳凝素-9(Galectin-9)结合可显著抑制T细胞的活化和增殖,并调节细胞因子的表达和分泌。Tim-3/Galectin-9参与免疫反应的调节及抗病毒免疫反应,阻断此通路可促进CD8+T细胞应... 详细信息

T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)基因是Tim家族成员,与其配体半乳凝素-9(Galectin-9)结合可显著抑制T细胞的活化和增殖,并调节细胞因子的表达和分泌。Tim-3/Galectin-9参与免疫反应的调节及抗病毒免疫反应,阻断此通路可促进CD8+T细胞应答和对病毒的控制。因此,Tim-3/Galectin-9通路可能与病毒感染慢性化有关。本文对Tim-3及其配体的生物学特性、功能及在病毒感染中的研究近况进行综述。

关键词： Tim-3 Galectin-9 病毒感染

来源：评论

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