检索结果-内蒙古大学图书馆

中国地方病学杂志 2006年第5期25卷 561-564页

作者：张春桃王俊芳林仁勇张彤王星卢晓梅王俨张琰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PC... 详细信息

目的比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用。方法PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒：①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接；②PCR扩增产物经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接。结果先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功。而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功。结论TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆人原核表达载体的效率。

关键词：克隆分子 DNA 重组质粒

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细粒棘球绦虫egG1Y162抗原基因的克隆及序列分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第2期27卷 177-179页

作者：曹春宝马秀敏丁剑冰贾海英吾拉木·马木提马海梅温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011

根据多房棘球绦虫emY162基因序列设计引物,利用PCR以细粒棘球绦虫原头蚴和成虫的基因组DNA和cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162和PUCm-T/egG1Y162cDNA重组质粒,经PCR、酶切及测序后,进行序列分析。细粒棘球绦虫2个不同发... 详细信息

根据多房棘球绦虫emY162基因序列设计引物,利用PCR以细粒棘球绦虫原头蚴和成虫的基因组DNA和cDNA为模板扩增egG1Y162基因,构建PUCm-T/egG1Y162和PUCm-T/egG1Y162cDNA重组质粒,经PCR、酶切及测序后,进行序列分析。细粒棘球绦虫2个不同发育阶段均克隆出egG1Y162基因,从基因组DNA和cDNA克隆得到的片段长度分别为1680bp和459bp,登录号分别为AB458258和AB458259。

关键词：细粒棘球绦虫 egG1Y162 克隆序列分析

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细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白的免疫反应性

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第2期27卷 107-110页

作者：吕国栋刘涛林仁勇王星王俊华任智慧温浩卢晓梅新疆医科大学第一附属医院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用... 详细信息

目的利用基因工程方法表达细粒棘球绦虫抗原B重组蛋白(rAgB),并分析其免疫反应性。方法将rAgB基因片段插入原核表达载体pET41a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得重组蛋白rAgB-GST。用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析柱(GST-sepharose4B)纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫反应性,并用免疫胶体金包虫诊断试剂盒作为对照。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET41a-rAgB构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白rAgB-GST的相对分子质量(Mr)为40800,纯化蛋白含量为78.4%。Westernblotting分析结果显示,重组蛋白rAgB-GST检测细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清的阳性率分别为79.2%(95/120)和51.1%(23/45),但与卫氏并殖吸虫病患者、华支睾吸虫病患者血清以及健康人血清反应均为阴性。rAgB-GST的敏感性和特异性分别为79.2%(95/120)和81.0%(98/121),均略高于免疫胶体金棘球蚴病诊断试剂盒的敏感性(72.8%,75/103)和特异性(76.9%,30/39)。结论重组rAgB-GST蛋白可被细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血清识别,有较好的免疫反应性。

关键词：细粒棘球绦虫重组抗原B 免疫诊断

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慢性囊型包虫病患者外周血单个核细胞中TLR2、4、7mRNA表达水平的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第3期31卷 273-278页

作者：单骄宇吐尔洪江·吐逊王俊华张志李亮张雪张传山刘涛林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室

目的探讨慢性囊型包虫病（CE）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体（TLRs）2、4、7基因表达变化及血清IL-10的表达情况.方法采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测42例慢性CE患者与28例健康对照组（NC）外周血中TLR2、4、7 mRN... 详细信息

目的探讨慢性囊型包虫病（CE）患者外周血单个核细胞（PBMC）Toll样受体（TLRs）2、4、7基因表达变化及血清IL-10的表达情况.方法采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测42例慢性CE患者与28例健康对照组（NC）外周血中TLR2、4、7 mRNA的表达,GAPDH作为内参基因;应用ELISA方法检测两组血清中IL-10的浓度.t检验比较两组间TLR2、4、7及IL-10的表达差异;TLR2、4、7的表达水平间及它们与血清IL-10水平间的相关性分析采用线性相关分析.结果慢性CE组的TLR2、TLR4、TLR7的mRNA相对表达量均比NC组的表达增高,其中CE组的TLR2是NC组的7.3倍,TLR4是NC组的3.6倍,TLR7是NC组的3.6倍.CE组的TLR2、TLR4、TLR7 mRNA相对表达量分别是1.0729±0.4006、5.0976±1.6682、0.6481±0.2574;NC组的TLR2、TLR4、TLR7 mRNA的相对表达量分别是0.1468±0.0435、1.4067 ±0.3279、0.1804±0.0568.与NC组相比,CE组的TLR2、TLR4的差异均具有统计学意义（P值分别为0.0287、0.033）,而TLR7则无统计学意义（P=0.0862）.慢性CE组、NC组外周血清IL-10分别为（17.6770±1.6298）pg/ml、（9.4898±0.7049）pg/ml,且慢性CE组与NC组的IL-10比较,差异具有统计学意义（P=0.0002）;在慢性CE组中,外周血PBMC的TLR2与TLR4在mRNA相对表达水平上呈正相关（r=0.1135,P=0.036）,其他均无相关.结论 TLR2、TLR4参与了慢性囊型包虫病的发生发展过程,TLR2、TLR4可作为囊型包虫抗原的受体,与不同抗原成分相互作用,调节宿主的免疫应答,同时在血清IL-10分泌增高的作用下共同促使机体向Th2型免疫应答方向发展,从而对囊型包虫感染所产生的免疫逃避发挥着重要作用.

关键词：慢性囊型包虫病 Toll样受体外周血单个核细胞转录水平

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泡球蚴感染对Balb/c小鼠肝脏TGF-β1及其信号蛋白表达的影响

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免疫学杂志 2011年第3期27卷 215-220页

作者：李瑶林仁勇徐琦魏绪法王俊华张传山温浩丁剑冰新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的观察泡球蚴(Em)感染对Balb/c小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体TβRⅠ/Ⅱ和信号蛋白Smad2/3表达的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,泡状棘球蚴原头蚴混悬液肉眼直视注射肝脏诱导小鼠肝泡球蚴感染模型,对照组... 详细信息

目的观察泡球蚴(Em)感染对Balb/c小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体TβRⅠ/Ⅱ和信号蛋白Smad2/3表达的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,泡状棘球蚴原头蚴混悬液肉眼直视注射肝脏诱导小鼠肝泡球蚴感染模型,对照组以相同方法注射生理盐水。于感染第60天处死小鼠,取肝脏组织。用RT-PCR检测肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达;Western blot和免疫组织化学技术检测肝组织TGF-β1、TβRⅠ(TGFβⅠ型受体)、TβRⅡ(TGFβⅡ型受体)、Smad2/3在肝内的表达及定位;HE和Masson染色,光镜下观察肝组织病理改变和肝组织纤维化程度。结果与对照组小鼠比较,Em感染小鼠肝组织内TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高。Em感染后TGF-β1、Smad2/3蛋白表达增加。TGF-β1、TβRⅠ与Smad2/3阳性反应主要位于肝细胞浆,TβRⅡ主要在肝细胞膜表达,上述指标在两组间表达具有显著性差异。结论在Em感染的肝组织中TGF-β1、TβR及Smad2/3蛋白表达均增高。TGF-β1/Smads信号蛋白参与了Em感染致肝纤维化及肝损伤过程。Em感染可能通过TGF-β1/Smads通路介导宿主与寄生虫间的共生。

关键词：泡球蚴 TGF-β1 TβR TGF-β1/Smads信号

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CEUS评价大鼠肝泡状棘球蚴病灶血流灌注的动态演变

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中国介入影像与治疗学 2017年第9期14卷 566-570页

作者：曾红春王颖鑫王俊华韩伟刘文亚新疆医科大学第一附属医院超声诊断科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院影像中心新疆乌鲁木齐830011

目的探讨CEUS评价不同时期大鼠肝泡状棘球蚴病(HAE)血流灌注的价值。方法采用CEUS观察70只成功感染HAE的大鼠在接种后不同时期(9、28、50周)的血流灌注特征,并与病理结果对照。结果接种9周时55个(55/70,78.57%)病灶表现为高回声,15个(15... 详细信息

目的探讨CEUS评价不同时期大鼠肝泡状棘球蚴病(HAE)血流灌注的价值。方法采用CEUS观察70只成功感染HAE的大鼠在接种后不同时期(9、28、50周)的血流灌注特征,并与病理结果对照。结果接种9周时55个(55/70,78.57%)病灶表现为高回声,15个(15/70,21.43%)病灶表现为混合性回声,病理表现为乳白色单/多囊泡样结构。随接种时间的延长(28、50周),病灶最大径逐渐增大,病灶内部实性成分及钙化灶逐渐增多,部分病灶可出现液化坏死。镜下病灶周边纤维组织逐渐增厚,周边见微血管聚集区。接种9周时CEUS显示病灶呈环状强化及分隔样强化,28周及50周时呈环状强化或伴细线样强化及无强化。CEUS后病灶边缘增强带最大宽度与病灶最大径比值随接种时间延长而逐渐减小(P=0.02)。结论接种后不同时期大鼠HAE病灶的超声征象渐趋复杂,坏死区及钙化灶增加,CEUS可显示不同时期病灶周边及内部的血流灌注特征。

关键词：泡状棘球蚴肝超声检查

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PCR方法诊断家犬感染细粒棘球绦虫的特异性及在临床诊断中的应用价值

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中国地方病学杂志 2006年第5期25卷 565-567页

作者：张亚楼 Jean Mathieu Bart 温浩马旭东苗玉清陈雪鸿新疆医科大学第一附属医院新疆维吾尔自治区包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的验证PCR方法检测终宿主家犬感染细粒棘球绦虫的特异性及其在临床诊断中的应用价值。方法取感染细粒棘球绦虫家犬粪便,显微镜下计数细粒棘球绦虫虫卵,稀释后PCR检测其敏感性。同时取家犬小肠内水泡带绦虫、多头绦虫、羊绦虫,将其DNA... 详细信息

目的验证PCR方法检测终宿主家犬感染细粒棘球绦虫的特异性及其在临床诊断中的应用价值。方法取感染细粒棘球绦虫家犬粪便,显微镜下计数细粒棘球绦虫虫卵,稀释后PCR检测其敏感性。同时取家犬小肠内水泡带绦虫、多头绦虫、羊绦虫,将其DNA与细粒棘球绦虫DNA一起进行PCR扩增,观察其特异性。对133 bp的目标条带进行序列测定,对比分析。结果PCR检测终宿主家犬感染细粒棘球绦虫具有高度的灵敏性,即使粪便中有1个虫卵(8pg的DNA),也能测出,但扩增后特异性较差,无法利用扩增带型进行诊断。4种寄生虫均具有相同的133 bp DNA重复序列,在400 bp均可检测出相同条带。结论PCR方法检测终宿主感染细粒棘球绦虫DNA重复序列尽管有优良的灵敏性,因其特异性差,不适合用于临床诊断和推广。

关键词：细粒棘球绦虫聚合式酶链反应特异性灵敏性终宿主

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早期大鼠肝泡状棘球蚴病模型的超声表现与病理对照

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中国介入影像与治疗学 2015年第8期12卷 508-511页

作者：曾红春王俊华刘文亚王颖鑫韩伟新疆医科大学第一附属医院超声诊断科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院影像中心新疆乌鲁木齐830011

目的探讨大鼠早期肝泡状棘球蚴病模型的超声特征。方法对接种肝泡状棘球蚴9周且健康存活的157只大鼠进行超声检查,记录大鼠早期肝泡状棘球蚴病的超声表现,并与病理结果对照。评价超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病的效能。结果超声筛查早... 详细信息

目的探讨大鼠早期肝泡状棘球蚴病模型的超声特征。方法对接种肝泡状棘球蚴9周且健康存活的157只大鼠进行超声检查,记录大鼠早期肝泡状棘球蚴病的超声表现,并与病理结果对照。评价超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病的效能。结果超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病模型敏感度(130/139,93.53%)和特异度(15/18,83.33%)均较高。早期大鼠肝泡状棘球蚴病灶超声主要表现为高回声(114/142,80.28%),19.72%(28/142)的病灶表现为混合性回声。病灶大体病理表现为米黄色或乳白色囊泡样结构,呈针尖样或多囊泡状,内含囊液;HE染色呈中央红染纤维结构,周边环以微小血管及炎性细胞。结论早期大鼠肝泡状棘球蚴病灶的超声主要表现为高回声伴或不伴无回声及低回声囊泡样结构,超声筛查早期大鼠肝泡状棘球蚴病模型具有很高的敏感度。

关键词：泡状棘球蚴肝超声检查

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大鼠肝泡球蚴病灶浸润增殖区微血管密度与超声造影的相关性研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第3期32卷 200-204页

作者：宋涛李海涛杨凌菲姚兰辉温浩新疆医科大学第一附属医院超声诊断科乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫外科、新疆包虫病临床研究所、新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830011

目的研究大鼠肝泡球蚴病(HAE)模型超声造影特征性表现与微血管密度(MVD)的相关性,评价HAE周边浸润增殖区的造影增强的病理学依据。方法采用开腹直视下肝脏穿刺接种泡状棘球蚴组织混悬液的方法 (0.2 ml/只,约含原头节800个),建立泡球蚴Wi... 详细信息

目的研究大鼠肝泡球蚴病(HAE)模型超声造影特征性表现与微血管密度(MVD)的相关性,评价HAE周边浸润增殖区的造影增强的病理学依据。方法采用开腹直视下肝脏穿刺接种泡状棘球蚴组织混悬液的方法 (0.2 ml/只,约含原头节800个),建立泡球蚴Wistar大鼠模型30只。接种后3个月B超检查大鼠,记录病灶位置、大小、形态、边界、内部回声和血流情况等。超声造影分析病灶的增强模式和强度。处死大鼠,取病灶组织和周围肝组织制备切片,苏木素-伊红(HE)染色观察HAE病灶的组织结构;免疫组织化学染色观察HAE病灶周边浸润增殖区和周围肝组织的微血管中CD34的表达情况,显微镜下计数阳性细胞,并进行染色强度评分。分析MVD与肝泡球蚴病灶浸润增殖区超声增强的相关性。结果 B超结果显示,30只大鼠中共23只感染成功,获得HAE病灶27个;病灶最大直径为2.24 cm,平均为(0.97±0.48)cm;病灶呈圆形、类圆形或不规则形;内部回声较复杂,周边以中高回声为主,中央多呈低回声,甚至呈无回声,病灶亦可呈蜂窝状;24个病灶周边出现点状血流信号,所有病灶内部均未见明显的血流信号。超声造影结果显示,HAE病灶于超声造影动脉相早期出现周边环状增强者25个,周边环状增强内部出现蜂窝状造影剂充盈缺损区者2个;病灶增强模式表现为快速增强而缓慢消退,即"快进慢退型"。病灶HE染色结果显示,泡球蚴结构基本正常,囊泡群周边形成假结节,大量淋巴细胞形成肉芽肿。免疫组化实验结果表明,HAE病灶周边浸润区微血管呈棕褐色,其CD34阳性表达率为99.2%(118/119),其中强阳性者17.6%(21/119),中度阳性者73.1%(87/119),弱阳性者8.4%(10/119),阴性者0.8%(1/119);周围肝组织内CD34的阳性表达率为25.2%(30/119),无强阳性者,中度阳性者4.2%(5/119),弱阳性者21.0%(25/119),阴性者74.8%(89/119)。MVD与HAE病灶浸润增殖区造影增强超声图像的平均灰阶值和周围肝组织平均灰阶值的比值之间的相关性分析显示,HAE病灶浸润增殖超声造影增强的灰阶强度与MVD之间呈正相关(r=0.238,P<0.05)。结论大鼠HAE病灶周边在超声造影后的环状增强区与MVD呈正相关,对了解HAE周边浸润增殖区的微血供状态有较大的临床价值。

关键词：超声检查造影剂声诺维泡球蚴病肝微血管密度

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细粒棘球蚴重组抗原B诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 111-116页

作者：单骄宇纪卫政吐尔洪江.吐逊李亮张传山林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室乌鲁木齐830054

目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴重组抗原B(rAgB)体外诱导小鼠骨髓源树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的情况。方法从小鼠股骨中分离出骨髓细胞,进行小鼠重组巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)的诱导,培养并获得CD11c+树突状细胞。应用倒置显微镜和扫描电镜观察树突状细胞形态,采用流式细胞术检测其表面标志物;用混合淋巴细胞反应(MLR)观察树突状细胞对T淋巴细胞的增殖能力。培养至第6天,收集未成熟树突状细胞进行流式细胞术检测;另向部分未成熟树突状细胞中加脂多糖(LPS)刺激24 h后,收集成熟树突状细胞,进行流式细胞术检测。在获得的未成熟树突状细胞中分别加入RPMI 1640完全培养液(为阴性对照组)、重组小鼠γ干扰素(rmIFN-γ,1 000 U/ml,为IFN-γ组)和rAgB(终浓度15μg/ml,为rAgB组),培养24 h后,通过细胞免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot-ting)检测各组树突状细胞IDO的表达情况。结果获得纯度为80%的CD11c+树突状细胞,在倒置显微镜和扫描电镜下均观察到典型树突状细胞。经LPS刺激的成熟树突状细胞的CD40、CD80和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子I-A/I-E的阳性表达率与未成熟树突状细胞的相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MLR结果显示,诱导形成的树突状细胞具有刺激T淋巴细胞增殖的能力。细胞免疫组织化学方法检测结果显示,阴性对照组、阳性对照组和rAgB组的IDO阳性表达率分别为(4.544±1.752)%、(20.464±4.452)%和(11.148±1.966)%,3组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blotting结果表明,3组IDO蛋白与相应甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的灰度值之比分别为(0.229±0.085)、(0.794±0.114)和(0.573±0.129),其中rAgB组与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),与IFN-γ组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论细粒棘球蚴重组抗原B在体外具有诱导树突状细胞表达吲哚胺2,3-双加氧酶的功能。

关键词：细粒棘球蚴重组抗原B 树突状细胞吲哚胺2,3-双加氧酶免疫耐受

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