检索结果-内蒙古大学图书馆

中华预防医学杂志 2013年第8期47卷 757-761页

作者：郑树涛刘涛刘清鲁芒高向朋伊力亚尔·夏合丁林仁勇卢晓梅新疆医科大学第一附属医院新疆维吾尔自治区重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院胸外科

目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在食管鳞癌细胞Ecal09中的可能作用。方法构建p38ct特异性的shRNA干扰载体，瞬时转染Ecal09细胞，运用qRT—PCR、免疫印迹分别检测p38ct干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTr和流式细... 详细信息

目的探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在食管鳞癌细胞Ecal09中的可能作用。方法构建p38ct特异性的shRNA干扰载体，瞬时转染Ecal09细胞，运用qRT—PCR、免疫印迹分别检测p38ct干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果；运用MTr和流式细胞仪检测p38ct干扰后Ecal09细胞增殖，细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变。作为平行反向验证，转染含有p38c~全长cDNA的真核过表达质粒，运用免疫印迹检测p38ct过表达后在蛋白水平上的表达效果；运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖，细胞周期和凋亡的变化；运用细胞划痕实验检测p38ct的变化后细胞迁移能力的改变。结果p38ct基因在受干扰后，测定其蛋白水平表达水平（22．970±2．857）较空质粒组（35．658±2．286）降低，差异具有统计学意义（t=-4．475，P〈0．01）。观察Ecal09细胞的增殖变化，发现干扰48h后吸光度值（0．951±0．086）大于对照组细胞（0．811±0．012）（t=3．20，P〈0．05），表明Ecal09细胞增殖加快。观察细胞周期和凋亡变化发现，干扰48h后凋亡率（17．400±5．495）较空质粒组（1．000±O．721）增加（t=40．06，P〈0．01）；干扰72h后细胞迁移速度（0．034±0．031）较空质粒组（0．278±0．021）加快（t=-5．79，P〈0．01），表明浸润能力增加。p38ct在过表达后，检测到其内源性p38α蛋白表达水平（41．1704-2．357）高于对照组（35．658±2．286）（t=4．41，P=0．005）；48h过表达组吸光值（0．472±0．089）与对照组细胞吸光值（0．81l±0．012）相比，细胞增殖受到抑制（t=-7．50，P〈0．01），细胞生长活动在Gl期受阻（t=4．80，P〈0．01），并且其细胞凋亡（32．233±1．457）高于空质粒组（1．000±0．721）（t=17．20，P〈0．01），细胞迁移[（0．770±0．054）mm]较空质粒组[（0．278±O．021）mm]减慢并且浸润受到抑制（t=11．00，P〈0．01）。结论p38αMARK抑制食管鳞癌细胞Eeal09的发生发展过程。

关键词：食管鳞癌 p38α RNA干扰过表达

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转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化

引用

中国组织工程研究 2015年第51期19卷 8234-8240页

作者：毕晓娟张传山李亮吕国栋林仁勇新疆医科大学第一附属医院/临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830011 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830011

背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用... 详细信息

背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比。结果与结论:通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)%,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)%,细胞计数总量约2.5×106/只。实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mR NA表达水平明显升高(P<0.05)。结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子。

关键词：组织工程肝细胞转化生长因子β1 组织构建肝星状细胞肝纤维化原代培养分离鉴定胶原蛋白平滑肌肌动蛋白α 国家自然科学基金

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p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

引用

全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：郑树涛刘涛刘清鲁芒高向朋伊力亚尔·夏合丁林仁勇卢晓梅 830011乌鲁木齐新疆医科大学第一附属医院新疆维吾尔自治区重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆医科大学第一附属医院胸外科

目的：探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在食管鳞癌细胞Eca109中的可能作用.方法：构建p38α特异性的shRNA干扰载体,瞬时转染Eca109细胞,运用qRT-PCR,免疫印记分别检测p38α干扰后在mRNA,蛋白水平上的沉默效果;运用MTT和流式细胞仪检... 详细信息

目的：探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在食管鳞癌细胞Eca109中的可能作用.方法：构建p38α特异性的shRNA干扰载体,瞬时转染Eca109细胞,运用qRT-PCR,免疫印记分别检测p38α干扰后在mRNA,蛋白水平上的沉默效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α干扰后Eca109细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变.作为平行反向验证,转染含有p38α全长cDNA的真核过表达质粒,运用免疫印记检测p38α过表达后在蛋白水平上的表达效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α的变化后细胞迁移能力的改变.结果：p38α基因在受干扰后,Western-blotting测定其蛋白水平表达(22.970±2.857)较空质粒组(35.658±2.286)降低,差异具有统计学意义(t=-4.475,P＜0.01).观察Eca109细胞的增殖变化,发现干扰48 h后其吸光度值(0.951±0.086)大于对照组细胞(0.811±0.012)(t=3.201,P＜0.05),表明Eca109细胞增殖加快.观察细胞周期和凋亡变化发现,干扰48 h后凋亡率(17.400±5.495)较空质粒组(1.000±0.721)增加(t=40.060,P＜0.01);同时干扰72 h后细胞迁移速度(0.034±0.031)较空质粒组(0.278±0.021)加快(t=-5.793,P＜0.01),浸润能力增加.p38α在过表达后,Western-blotting法检测到了其内源性p38α蛋白表达(41.170±2.357)较对照组(35.658±2.286)增加(t=4.412,P=0.005);过表达组48 h后吸光值(0.472±0.089)与对照组细胞吸光值(0.811±0.012)相比,细胞增殖受到抑制(t=-7.501,P＜0.01),细胞阻滞在G1期(t=4.800,P＜0.01)并且其细胞凋亡情况(32.233±1.457)较空质粒组(1.000±0.721)增加(t=17.198,P＜0.01),;细胞迁移(0.770±0.054)情况较空质粒组(0.278±0.021)减慢并且浸润受到抑制(t=10.997,P＜0.01).结论：p38α在食管鳞癌的病理发生发展中起着抑癌基因的作用.

关键词：食管鳞癌 p38α RNA干扰过表达

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