检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2017年第1期12卷 38-41页

作者：王慧齐文静何黎郭宝平张文宝李军新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转... 详细信息

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,采用SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,Western blot鉴定其免疫反应性。结果 PCR扩增EgM123基因片段长度为594bp,经酶切分析和测序鉴定证明pET28a-EgM123原核表达载体构建正确。重组质粒转化BL21在37℃条件下,经IPTG(终浓度为0.4mmol/L)诱导3h,获得分子质量单位约为29ku的EgM123蛋白,与理论值相符。该蛋白能被EgM123-GST免疫兔抗血清识别。结论成功构建了pET28a-EgM123原核表达载体,表达蛋白具有免疫反应性,为研制包虫病疫苗奠定了基础。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫 EgM123 蛋白表达疫苗

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Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原基因在泡球蚴感染中期小鼠肝脏中的表达及意义

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中国病原生物学杂志 2012年第9期7卷 653-656页

作者：王俊华魏绪法张传山吕国栋姜涛卢晓梅温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬... 详细信息

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬液,建立疾病动物模型;对照组以同样方法注射等量生理盐水。于感染中期第12周,颈椎脱臼处死小鼠,实验组取病变组织和病变邻近肝组织,对照组取注射部位所在肝组织以及临近肝组织,用4%甲醛固定,常规石蜡包埋,HE、Masson染色后观察形态学改变和肝纤维化程度。取病变临近肝组织,提取总RNA,反转录合成cDNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Col1a1、Col3a1、Col4a1基因的表达,计量结果用相对单位(AU)表示。结果泡球蚴感染组和对照组Collal基因表达量分别为(2.155±0.809)AU和(1.000±0.221)AU,差异有统计学意义(t=3.427,P<0.05);Col3a1基因表达量分别为(18.641±10.244)AU和(1.000±0.412)AU,差异有统计学意义(t=10.324,P<0.01);Col4a1基因表达量分别为(0.894±0.495)AU和(1.000±0.381)AU,差异无统计学意义(t=1.932,P>0.05)。Masson染色检查泡球蚴感染组肝纤维化评分为2.72±1.04,对照组为1.0,差异有统计学意义(t=4.105,P<0.05)。结论在泡球蚴感染小鼠中期,引起肝纤维化的胶原主要为Ⅲ型和Ⅰ型。

关键词：胶原泡球蚴肝纤维化实时荧光定量PCR

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细粒棘球绦虫DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2基因的克隆及序列分析

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中国病原生物学杂志 2012年第7期7卷 510-512,526页

作者：吕国栋叶建蔚张传山王俊华李亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息... 详细信息

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析,半定量反转录PCR分析其在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中的表达情况。结果 EgPolD2基因开放阅读框为1 218bp,编码405个氨基酸,等电点为4.74。NCBI保守功能区分析软件预测EgPolD2蛋白第113～378个氨基酸为MPP_PolD2_C结构域。登陆GenBank进行Blast比对,EgPolD2与曼氏血吸虫SmPolD2基因同源性为32.1%,与线虫和人等其他物种PolD2基因同源性在18.3%～22.8%之间。进化树分析表明EgPolD2与SmPolD2相聚集,与其他物种同源性较低。半定量RT-PCR显示,EgPolD2在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中均有表达,且表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功克隆出细粒棘球绦虫EgPolD2新基因,为进一步研究抗细粒棘球绦虫药物靶标奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 EgPolD2 序列分析

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棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1/PD-L1与相关细胞因子的水平变化

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第4期30卷 421-423页

作者：李艳华王晶胡晓安庞楠楠辛燕魏琴马秀敏丁剑冰新疆医科大学基础医学院新疆医科大学附属中医医院呼吸生理病理实验室新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室基地

目的检测包虫患者血清中可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)及其配体sPD-L1,Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-6以及Th17细胞因子IL-17的分泌水平,探讨它们在包虫病感染过程中的相关作用。方法采用细胞因子磁珠阵列测定(CBA)法检测包虫... 详细信息

目的检测包虫患者血清中可溶性程序性死亡分子1(sPD-1)及其配体sPD-L1,Th1型细胞因子IFN-γ、Th2型细胞因子IL-6以及Th17细胞因子IL-17的分泌水平,探讨它们在包虫病感染过程中的相关作用。方法采用细胞因子磁珠阵列测定(CBA)法检测包虫患者血清中Th1、Th2、Th17细胞因子的分泌水平;ELISA检测可溶性PD-1、PD-L1的表达水平。结果与健康对照组相比,棘球蚴病患者血清中可溶性PD-1的浓度略升高但低于sPD-L1,sPD-L1浓度升高明显,Th2、Th17细胞相关细胞因子的分泌水平明显升高(P<0.01),而Th1细胞相关细胞因子分泌水平未见明显变化(P>0.05)。结论棘球蚴病感染过程中存在Th1/Th2的表达失衡,而炎性细胞Th17细胞参与机体免疫调节。sPD-1与sPD-L1通过动态平衡参与机体免疫调控,促进棘球蚴免疫逃逸。

关键词：可溶性PD-1 可溶性PD-L1 包虫病细胞因子

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细粒棘球蚴EgG1Y162基因进化分析、表达及鉴定

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中国生物工程杂志 2016年第4期36卷 78-87页

作者：祖力皮也·吐尔逊曹春宝温浩丁剑冰德力夏提·依米提新蠼重大疾病医学实验室一省部共建国家重点实验室培育基地新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054 新疆医科大学科研处乌鲁木齐830011

目的：克隆和鉴定细粒棘球蚴的Eg G1Y162基因,分析其蛋白表达和适应性进化并鉴定抗原性。方法：根据em Y162基因序列设计引物,分别从细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个发育阶段,提取基因组DNA和总RNA,mRNA反转录为c DNA,... 详细信息

目的：克隆和鉴定细粒棘球蚴的Eg G1Y162基因,分析其蛋白表达和适应性进化并鉴定抗原性。方法：根据em Y162基因序列设计引物,分别从细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个发育阶段,提取基因组DNA和总RNA,mRNA反转录为c DNA,利用PCR的方法以基因组DNA和c DNA为模板扩增Eg G1Y162基因;构建PUCm-T/Eg G1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后,测序确定其正确性。利用DNAman软件与MEGA4软件对Eg G1Y162基因特点进行分析并构建Eg G1Y162核酸序列的进化树进一步探讨其同源性。荧光定量PCR检测Eg G1Y162基因在细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个不同发育阶段的表达情况。利用定向克隆技术将Eg G1Y162抗原基因片段克隆至原核表达质粒PET-41a上,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序确定序列。IPTG初步诱导和表达Eg G1Y162-GST重组蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blot试验分析鉴定。结果：从细粒棘球绦虫的两个不同发育阶段均克隆出Eg G1Y162基因,从总DNA克隆得到片段长度1 680bp,从c DNA克隆得到片段长度459bp。相似性比较表明,Eg G1Y162基因序列与em Y162相似性为91%,而Eg G1Y162基因c DNA与em Y162相似性为95%。进一步分析显示,Eg G1Y162基因序列由3个外显子和2个内含子组成,外显子区域分别为1～70,1 064～1 380和1 577～1 648。位于疏水端1～16位氨基酸构成Eg G1Y162信号肽序列,35～115位氨基酸形成一个大的纤黏连蛋白剪接体FN3,133～152位氨基酸构成羧基端跨膜区域。测序结果显示Eg G1Y162抗原基因长度为360bp,编码120个氨基酸。通过荧光定量PCR检测,发现Eg G1Y162在成虫、生发层阶段、原头蚴和虫卵阶段均有不同程度的表达。但是Eg G1Y162在成虫中的表达量最多,相对值为19.526,差异有统计学意义（P〈0.01）,其次生发层阶段,为5.122,再次在原头蚴阶段,相对值为5.083,而在虫卵阶段最少,为1.6588。构建的PET-41a/Eg G1Y162原核表达质粒,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测表明Eg G1Y162-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为44k Da处有表达条带。Western blot分析显示阳性印迹条带,分子量为44k Da,Eg G1Y162重组蛋白能与细粒棘球蚴感染40天后犬的血清发生反应;与包虫病患者血清也有阳性反应。结论：成功克隆Eg G1Y162抗原基因,序列对比分析显示Eg G1Y162的c DNA与em Y162的c DNA具有很高的相似性,基因的差异性主要存在于内含子区域,Eg G1Y162抗原基因是一种新的基因。Eg G1Y162在成虫中的表达量最多。成功诱导表达出Eg G1Y162重组蛋白,并且Eg G1Y162重组蛋白具有很好的抗原性。

关键词： EgG1Y162 抗原进化树荧光定量PCR 原核表达

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细粒棘球蚴Eg95重组表位蛋白的免疫特性研究

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中国病原生物学杂志 2016年第3期11卷 242-245页

作者：兰希王倩刘玉梅张春桃冯宁闫怡姜涛温浩丁剑冰马秀敏新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的研究Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3表位蛋白的抗原性,为细粒棘球蚴多表位疫苗的研制奠定基础。方法构建细粒棘球蚴Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3抗原原核表达载体并体外诱导表达重组蛋白,纯化后免疫家兔,制备Eg95抗原多克隆抗体,采用Western blo... 详细信息

目的研究Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3表位蛋白的抗原性,为细粒棘球蚴多表位疫苗的研制奠定基础。方法构建细粒棘球蚴Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3抗原原核表达载体并体外诱导表达重组蛋白,纯化后免疫家兔,制备Eg95抗原多克隆抗体,采用Western blot检测Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3抗原与Eg95多抗的反应性;分别用重组蛋白Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3免疫BALB/c小鼠,采用ELISA检测小鼠血清特异IgG水平,MTT法检测脾淋巴细胞增殖。结果用Western blot检测重组蛋白Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3均能与Eg95多抗血清反应,以Eg95-2和Eg95-3反应性较强。用Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3重组抗原免疫小鼠后,随着免疫次数的增加和时间的延长,小鼠血清IgG水平升高,小鼠脾淋巴细胞在体外经ConA和Eg95抗原刺激诱导发生增殖。结论构建的3个表位均为Eg95的有效抗原表位,用重组抗原Eg95-1、Eg95-2、Eg95-3免疫小鼠后均可诱导以产生IgG为主的体液免疫应答,因此构建的3个表位蛋白抗原可用于细粒棘球蚴多表位肽疫苗的研制。

关键词：细粒棘球蚴 Eg95 表位疫苗免疫应答

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寄生虫病疫苗研究新进展

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中国病原生物学杂志 2014年第11期9卷 I0003-I0004,F0003页

作者：兰希赵慧丁剑冰马秀敏新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

寄生虫病严重危害人畜健康,给畜牧业造成巨大经济损失。目前用于寄生虫病控制的最有效手段仍然是疫苗接种。本文对寄生虫病传统疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗到现在研究最多的表位疫苗等新型疫苗进行简要综述,旨在为寄生虫病的防控提供... 详细信息

寄生虫病严重危害人畜健康,给畜牧业造成巨大经济损失。目前用于寄生虫病控制的最有效手段仍然是疫苗接种。本文对寄生虫病传统疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗到现在研究最多的表位疫苗等新型疫苗进行简要综述,旨在为寄生虫病的防控提供参考。

关键词：寄生虫病疫苗进展综述

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调节性B细胞在感染免疫中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2014年第4期9卷 381-383页

作者：刘学磊刘玉梅丁剑冰马秀敏新疆医科大学第一附属医院、新疆重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

B细胞主要通过呈递抗原和产生抗体发挥免疫调节作用。近年来研究发现部分B细胞具有调节功能,这部分B细胞被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)。Bregs可通过产生白细胞介素10(IL-10)和(或)转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性... 详细信息

B细胞主要通过呈递抗原和产生抗体发挥免疫调节作用。近年来研究发现部分B细胞具有调节功能,这部分B细胞被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)。Bregs可通过产生白细胞介素10(IL-10)和(或)转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受,抑制过度炎症反应,加快炎症的恢复。相关研究表明Bregs在寄生虫、细菌、病毒感染中发挥重要作用。本文综述了Bregs的生物学特征、功能、微信号调节及其在感染性疾病中所发挥的作用机制及相关研究进展。

关键词：调节性B细胞感染免疫 IL-10 TGF-β 综述

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沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构及B、T细胞表位分析

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山东医药 2016年第23期56卷 20-22页

作者：阿曼古丽.牙生兰希伊慧霞古丽扎尔.阿不都纳斯尔彭珊珊冯宁闫怡李慧君马秀敏新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的分析沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构及B、T细胞表位。方法采用计算机在线预测网站PSIPRED V3.3对沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原蛋白的二级结构进行预测和分析;采用BCEpred和ABCpred网络软件对沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表... 详细信息

目的分析沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构及B、T细胞表位。方法采用计算机在线预测网站PSIPRED V3.3对沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原蛋白的二级结构进行预测和分析;采用BCEpred和ABCpred网络软件对沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位进行预测和分析;采用SYFPEITHI在线软件对沙眼衣原体主要外膜蛋白的MHC-Ⅰ类HLA-A 0201限制性T细胞表位进行预测和分析。结果沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原蛋白的二级结构中无规则卷曲结构占32.49%、α螺旋结构占41.62%、β-折叠结构占19.80%。沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的B细胞表位氨基酸序列位点分别为41~50、92~101、51~60、306~315、260~269和160~169,MHC-Ⅰ类HLA-A 0201限制性T细胞表位氨基酸序列位点分别为201~209、379~387、3~11、126~134和177~185。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原的二级结构中无规则卷曲结构、α螺旋结构所占比例高,有6个B细胞表位和5个T细胞表位。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白抗原表位 T细胞表位 B细胞表位

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细粒棘球绦虫AgB5抗原表位的生物信息学预测

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中国病原生物学杂志 2015年第1期10卷 38-41页

作者：刘学磊刘玉梅曹文艳兰希彭珊珊王倩丁剑冰马秀敏新疆医科大学第一附属医院、新疆重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的应用计算机在线预测软件分析细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构,预测其可能形成的B细胞表位和T细胞表位,为研制安全、高效的新型包虫病基因疫苗奠定基础,也为包虫病的免疫学治疗提供新的理论依据。方法采用计算机在线预测软件SOPM... 详细信息

目的应用计算机在线预测软件分析细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构,预测其可能形成的B细胞表位和T细胞表位,为研制安全、高效的新型包虫病基因疫苗奠定基础,也为包虫病的免疫学治疗提供新的理论依据。方法采用计算机在线预测软件SOPMA对细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构进行预测和分析;采用LEPS和ABC Pred网络软件结合其表面特性、亲水性、柔韧性、可及性、可塑性等对其B细胞表位进行预测和分析;采用IEBD和SYFPEITHI在线软件对细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的MHC-I类HLA-A 0201限制性T细胞表位进行预测和分析。结果采用计算机在线预测软件预测细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白的二级结构中α螺旋结构占76.47%,β-折叠占5.88%,无规则卷曲占17.65%。结合其表面特性、亲水性、柔韧性、可及性以及可塑性等分析得出分值较高的3个B细胞表位区域,分别为：6~14、28~33和48~52氨基酸序列,较易形成B细胞表位;通过MHC-I类HLA-A 0201限制性T细胞表位分析得出分值较高的4个T细胞表位区域,分别为：9~13、24~29、38~45和51~59氨基酸序列,较易形成T细胞表位。结论通过生物信息网络技术方法分析确定细粒棘球绦虫AgB5抗原蛋白分别存在3个B细胞抗原表位和4个T细胞抗原表位,可为细粒棘球绦虫AgB抗原性研究和高效表位疫苗研发提供参考,为临床包虫病的免疫诊断、药物治疗提供新的靶标。

关键词：细粒棘球绦虫抗原B 抗原表位生物信息学

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