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As_2O_3联合γ分泌酶抑制剂对HepG_2细胞凋亡的诱导作用及其机制

吉林大学学报（医学版） 2015年第3期41卷 470-475页

作者：周明王雪雯杨莉宋海林段晶晶石河子大学医学院新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子832002

目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果... 详细信息

目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果选取无细胞毒剂量As2O3和MW167(As2O30.25mg·L-1、MW167 10μmol·L-1)分组干预HepG2细胞48h;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法检测Notch-1、Bcl-2和Caspase-3mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞均可抑制细胞增殖,呈剂量效应关系;无细胞毒剂量As2O3和MW167处理不同分组HepG2细胞48h后,与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞凋亡率升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Bcl-2、Notch-1mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),其中以联合组降低最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Caspase-3mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显。结论:As2O3可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与通过Notch信号通路下调细胞中Bcl-2、Notch-1基因和蛋白表达水平以及上调细胞中Caspase-3基因和蛋白表达水平有关联。

关键词： HepG2细胞 γ分泌酶抑制剂三氧化二砷细胞凋亡

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钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用

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中国病理生理杂志 2017年第10期33卷 1773-1780页

作者：王腊梅钟华唐娜庞丽娟张春军何芳石河子大学医学院新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 石河子大学医学院病理生理教研室新疆石河子832002 石河子大学医学院病理教研室新疆石河子832002

目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受... 详细信息

目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。

关键词：基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 钙敏感受体一氧化氮

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血管平滑肌细胞中ERK通路与TGF-β1/Smad通路的相互作用

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中国应用生理学杂志 2010年第1期26卷 15-18页

作者：钟华何芳胡清华王振焕邓峰美孙志萍李增春新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室石河子大学医学院病理生理教研室石河子大学医学院医学机能实验中心石河子832002 华中科技大学同济医学院病理生理学系卫生部呼吸系疾病重点实验室武汉430030

目的:探讨血管平滑肌细胞(VSMC)中TGF-β/Smad与ERK信号转导通路是否存在相互调节关系。方法:原代培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,分四组:①对照组,②TGF-β1组,③ERK阻断剂(PD98059)组和④TGF-β1+ERK阻断剂(PD98059)组。分别用Western ... 详细信息

目的:探讨血管平滑肌细胞(VSMC)中TGF-β/Smad与ERK信号转导通路是否存在相互调节关系。方法:原代培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,分四组:①对照组,②TGF-β1组,③ERK阻断剂(PD98059)组和④TGF-β1+ERK阻断剂(PD98059)组。分别用Western blot法检测VSMC内Smad2/3、ERK1/2蛋白表达及磷酸化Smad2/3、磷酸化ERK1/2蛋白含量,RT-PCR方法测VSMC中Smad2、Smad3mRNA的表达。结果:①与对照组相比,TGF-β1组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量增多(P<0.05),ERK阻断剂组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量减少(P<0.05),TGF-β1+ERK阻断剂组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量无差异;与TGF-β1组相比,TGF-β1+ERK阻断剂组P-Smad2/3、P-ERK1/2蛋白含量减少(P<0.05)。各组间Smad2/3、ERK1/2蛋白表达无差异。②各组的Smad2、Smad3mRNA表达无差异。结论:TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化依赖ERK通路激活,但ERK通路对Smad2/3蛋白和mRNA表达水平无影响。

关键词： ERK 血管平滑肌细胞 TGF-β_1

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实时荧光PCR检测EGFR基因在新疆卡波西肉瘤中的表达

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公共卫生与临床医学 2009年第3期5卷 160-163页

作者：张慧杨磊刘建勇周剑石河子大学医学院新疆地方与民族高发病重点实验室-生化教研室新疆石河子832002

目的检测EGFR基因在新疆卡波西肉瘤（Kaposi’s Sarcoma，KS）中的表达并分析其与KS发生发展的关系。方法应用SYBR Green I作为荧光染料，以GAPDH作内参照，建立检测EGFR mRNA表达的实时荧光PCR反应体系，对经病理活检证实的7例KS肿瘤... 详细信息

目的检测EGFR基因在新疆卡波西肉瘤（Kaposi’s Sarcoma，KS）中的表达并分析其与KS发生发展的关系。方法应用SYBR Green I作为荧光染料，以GAPDH作内参照，建立检测EGFR mRNA表达的实时荧光PCR反应体系，对经病理活检证实的7例KS肿瘤组织和瘤旁正常组织中EGFR mRNA的表达水平进行检测。结果KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织（t=-3．865，P〈0．05），并且结果有统计学意义。KS肿瘤组织中EGFR的相对表达量为0．34±0．31，瘤旁组织中为1．24±0．78（P=0．008）。结论所建立的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法可以成功地检测EGFR基因的表达量。KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织，差异有统计学意义。

关键词：卡波氏肉瘤人类8型疱疹病毒表皮生长因子受体实时定量聚合酶链反应

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实时荧光PCR检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤中的表达

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世界感染杂志 2009年第2期9卷 90-93页

作者：张慧杨磊刘建勇周剑石河子大学医学院新疆地方与民族高发病重点实验室-生化教研室新疆石河子832002

目的检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤（Kaposi’s Sarcoma，KS）中的表达并分析其-9KS发生发展的关系。方法应用SYBRGreenI作为荧光染料，以GAPDH作内参照，建立检测EGFRmRNA表达的实时荧光PCR反应体系，对经病理活检证实的7例KS肿瘤组织... 详细信息

目的检测EGFR基因在新疆卡波氏肉瘤（Kaposi’s Sarcoma，KS）中的表达并分析其-9KS发生发展的关系。方法应用SYBRGreenI作为荧光染料，以GAPDH作内参照，建立检测EGFRmRNA表达的实时荧光PCR反应体系，对经病理活检证实的7例KS肿瘤组织和瘤旁正常组织中EGFRmRNA的表达水平进行检测。结果KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织（t=-3．865，P〈0．05），并且结果有统计学意义。KS肿瘤组织中EGFR的相对表达量为0．34±0．31，瘤旁组织中为1．24±0．78（P=0．008）。结论所建立的SYBRGreenI实时定量PCR方法可以成功地检测EGFR基因的表达量。KS肿瘤组织中EGFR表达水平低于瘤旁正常组织，差异有统计学意义。

关键词：卡波氏肉瘤人类8型疱疹病毒表皮生长因子受体实时定量聚合酶链反应

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抗砷细胞内荧光物质激光共聚焦显微镜检测

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中国公共卫生 2009年第6期25卷 710-711页

作者：郭淑丽罗先道杨丽程建兵杨磊石河子大学医学院一新疆地方病与民族高发病省部共建重点实验室生化教研室新疆石河子832002 杭州师范大学医药卫生管理学院

目的应用激光共聚焦显微镜检测抗砷细胞内荧光物质含量。方法用荧光染料Rhodamine-123对抗砷细胞进行荧光染色30min,分别用维拉帕米(Verapamil)、亚砷酸钠处理细胞,单纯Rhodamine-123的抗砷细胞为对照组。应用激光共聚焦显微镜采集Rhoda... 详细信息

目的应用激光共聚焦显微镜检测抗砷细胞内荧光物质含量。方法用荧光染料Rhodamine-123对抗砷细胞进行荧光染色30min,分别用维拉帕米(Verapamil)、亚砷酸钠处理细胞,单纯Rhodamine-123的抗砷细胞为对照组。应用激光共聚焦显微镜采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列,并且记录12,24,36,48,60h等不同时段细胞内荧光强度。结果实验组细胞染色48h后,Verapamil实验组荧光强度分别为(38.940±0.3648),(38.153±0.533),均明显高于同时间段对照组的荧光强度,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论激光共聚焦显微成像技术可用于抗砷细胞拮抗效果实时定量检测。

关键词：抗砷活细胞荧光染料激光共聚焦显微镜

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Orai3参与了HUVECs外钙敏感受体介导的钙内流和NO生成

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中国病理生理杂志 2014年第1期30卷 1-10页

作者：王腊梅钟华赵慧王静庞丽娟孙志萍何芳新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室石河子大学医学院石河子大学医学院病理生理教研室石河子大学医学院病理教研室石河子大学医学院医学机能实验中心新疆石河子832002

目的:研究Ca2+通道蛋白Orai3在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)外钙敏感受体(CaR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的作用和机制。方法:(1)利用转染技术将构建的Orai3干扰质粒(Orai3 shRNA)转染HUVECs,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果... 详细信息

目的:研究Ca2+通道蛋白Orai3在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)外钙敏感受体(CaR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的作用和机制。方法:(1)利用转染技术将构建的Orai3干扰质粒(Orai3 shRNA)转染HUVECs,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,实时定量RT-PCR和Western blotting检测Orai3 shRNA转染后Orai3 mRNA和蛋白的表达以及抑制效率。(2)取第2~5代细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组(Orai3shRNA组)、未转染组即空白对照组(control组)和空质粒组(vehicle组),将上述3组细胞分别与CaR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(阻断ROC、激活SOC)孵育,用荧光探针Fura-2/AM和DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化。结果:(1)实时定量RT-PCR及Western blotting检测结果显示:与control组相比较,shOrai3-77干扰后,Orai3 mRNA的表达明显降低(抑制率为84.5%,P<0.05),Orai3蛋白的表达亦明显降低(抑制率为70.68%,P<0.05)。(2)[Ca2+]iΔratio值和NO净荧光强度值的测定结果显示:与control组及vehicle组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai3 shRNA转染组中[Ca2+]iΔratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05),而vehicle组无显著差异(P>0.05)。结论:在HUVECs中Orai3参与了CaR经SOC和ROC激活介导的钙内流和NO生成。

关键词： Orai3蛋白一氧化氮钙人脐静脉内皮细胞

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Neuritin对神经元作用的研究进展

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现代生物医学进展 2009年第21期9卷 4152-4154页

作者：黎兴毅高蕊黄瑾新疆地方与民族高发病重点实验室省新疆石河子832002 新疆石河子大学医学院生化教研室

Neuritin作为神经营养因子,可促进神经细胞树突和轴突的生长和分支,以及调节神经元回路的形成,在神经再生和可塑性中起着重要作用。它由一条编码糖基磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白基因编码,表达产物主要分布于神经系统中,其中以齿状回最高,其... 详细信息

Neuritin作为神经营养因子,可促进神经细胞树突和轴突的生长和分支,以及调节神经元回路的形成,在神经再生和可塑性中起着重要作用。它由一条编码糖基磷脂酰肌醇锚定的糖蛋白基因编码,表达产物主要分布于神经系统中,其中以齿状回最高,其次为海马,大脑皮层和小脑。Neuritin作为神经活动和神经营养素发挥作用的共同下游因子,在促进突触成熟、防止神经细胞凋亡和保护运动神经元等方面具有重要作用。本文就Neuritin的生物学特性及其在神经再生领域的研究做一综述。

关键词： Neuritin 神经元神经可塑性神经再生

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新疆哈萨克族转化生长因子β1基因多态性及其血浆水平与原发性高血压的关系

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中华医学遗传学杂志 2010年第4期27卷 463-468页

作者：赵丹胡清华邓峰美钟华郭淑霞石晓鹏杨建峰何芳新疆石河子大学医学院病理生理学教研室/新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室 832002 新疆石河子大学医学院预防医学系 832002 郧阳医学院生理学教研室华中科技大学同济医学院病理生理学系

目的研究新疆哈萨克族原发性高血压（essential hypertension,EH）患者转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）＋869T/C、＋915G/C基因多态性及血浆水平与EH的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和... 详细信息

目的研究新疆哈萨克族原发性高血压（essential hypertension,EH）患者转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）＋869T/C、＋915G/C基因多态性及血浆水平与EH的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和基因测序对新疆哈萨克族365名EH患者及435名正常对照组进行基因分型,用双抗体夹心法测量TGF-β1血浆浓度.结果＋915G/C位点基因型GG、GC及等位基因G、C频率依次为97.9%、2.1%、98.77%、1.23%,EH组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;＋869T/C位点基因型TT、TC、CC及等位基因T、C在对照组中频率依次为25.97%、46.67%、27.36%、49.3%、50.7%,CC基因型及C等位基因频率在EH组中高于对照组（41.60%vs.27.36%、62.2%vs.50.7%）,差异有统计学意义（P＜0.05）,C等位基因携带者EH患病风险高于T等位基因携带者（OR=1.6O,P=0.00）.＋869T/C与＋915G/C存在连锁不平衡,其形成的单倍型C-G在EH组中频率高于对照组（61.6%vs.49.8%,P＜0.05）.＋869T/C及＋915G/C基因型、等位基因在EH组和对照组中TGF-β1血浆水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论新疆哈萨克族TGFβ1＋915G/C基因变异频率很低,且不存在纯合变异,＋869位点C等位基因可能是哈萨克族EH的遗传易感基因,＋869T/C与＋915G/C多态性位点存在连锁不平衡,两者构成的单倍型C-G是EH危险性因素.

关键词：转化生长因子-β1 基因多态性血浆水平高血压中国哈萨克族

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胱硫醚β-合成酶基因标签单核苷酸多态性与新疆哈萨克族原发性高血压的关联性

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中华检验医学杂志 2011年第7期34卷 646-649页

作者：张春军石晓鹏邓峰美钟华杨建峰王刚王振焕陈雄英赵丹何芳新疆石河子大学医学院病理生理教研室/新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室石河子832002 河北省武安市医院病理科湖北省十堰市郧阳医学院生理学教研室

近年研究发现血浆HCY水平升高与EH有着密切的联系。CBS和MTHFR是HCY代谢过程中的2个关键酶，除营养因素外，CBS和MTHFR基因缺陷对血浆总HCY水平的影响可间接导致EH，这已成为研究热点；而CBS作为HCY代谢途径中的关键酶之一，当其缺陷时... 详细信息

近年研究发现血浆HCY水平升高与EH有着密切的联系。CBS和MTHFR是HCY代谢过程中的2个关键酶，除营养因素外，CBS和MTHFR基因缺陷对血浆总HCY水平的影响可间接导致EH，这已成为研究热点；而CBS作为HCY代谢途径中的关键酶之一，当其缺陷时可导致高同型半胱氨酸血症。目前，许多研究表明，CBS基因多态性与心脑血管疾病发生有关。目前，有关SNP与疾病的关联研究，除在SNP位点选择上注意了功能区（启动子和外显子）外，由于不同连锁标记间还存在LD。为增加基因分型的有效性，还需进行tSNP与疾病的关联性研究。

关键词：单核苷酸多态性原发性高血压新疆哈萨克族酶基因胱硫醚高同型半胱氨酸血症 MTHFR SNP位点

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