检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2006年第6期22卷 979-983页

作者：庄淑珍李菁菁郑耀虎张富春新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3geneofLaguruslagurus,lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连... 详细信息

ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3geneofLaguruslagurus,lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对lZP3mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-lZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-basedtransfectionmethod,HD法)共注射小鼠,半定量RT-PCR和real-timePCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中lZP3mRNA的表达情况,以筛选干扰lZP3mRNA的有效靶位点。结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hela细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰lZP3mRNA的表达。研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法。

关键词： RNA干扰靶位点共转染尾静脉大容量快速注射法

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

优化密码子提高草原兔尾鼠ZP3融合蛋白的原核表达

引用

细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 700-703页

作者：李轶杰张富春张钰王焱冰新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的:探讨提高草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(LZP3)基因在原核细胞中表达的水平。方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP3基因上3个稀有的密码子簇,将LZP3基因中7个稀有的密码子更换成大肠杆菌(***)最常用的相应密码子。将获得的LZP... 详细信息

目的:探讨提高草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(LZP3)基因在原核细胞中表达的水平。方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP3基因上3个稀有的密码子簇,将LZP3基因中7个稀有的密码子更换成大肠杆菌(***)最常用的相应密码子。将获得的LZP3突变基因(LZP3m)插入pGEX4T-1中,构建重组表达载体。以重组体转化***21(DE3)菌株进行表达。结果:LZP3m基因的表达量比野生型LZP3基因明显提高。结论:通过密码子优化,能显著提高LZP3基因在原核细胞中的表达水平。

关键词：草原兔尾鼠卵透明带3 重叠PCR 密码子优化原核表达

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备

引用

细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 727-730页

作者：王芸吕国栋薛娜张富春马纪新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达。表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot进行检测。结果:SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38000的可溶性融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶5000,Western blot证实BL21/pGEX-4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合。结论:在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础。

关键词：昆虫抗冻蛋白原核表达抗血清蛋白印迹抗冻蛋白基因抗血清制备原核表达载体纯化 Western

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

spaA嵌合体核酸疫苗增强抗体水平的研究

引用

细胞与分子免疫学杂志 2009年第11期25卷 984-986,990页

作者：陈开旭李轶杰张富春曹文尧李江伟新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的:探讨提高丹毒丝菌表面抗原A(spaA)N端核酸疫苗免疫应答的策略。方法:通过基因重组构建含人α胰岛素抑制剂(AAT)的信号肽、大鼠寡聚软骨基质蛋白(COMP)片段、丹毒丝菌spaA基因N末端及3分子的C3d序列的真核细胞表达质粒pcDNA3-AAT-CO... 详细信息

目的:探讨提高丹毒丝菌表面抗原A(spaA)N端核酸疫苗免疫应答的策略。方法:通过基因重组构建含人α胰岛素抑制剂(AAT)的信号肽、大鼠寡聚软骨基质蛋白(COMP)片段、丹毒丝菌spaA基因N末端及3分子的C3d序列的真核细胞表达质粒pcDNA3-AAT-COMP-spaAN-C3d3(pcD-ACSC)和pcDNA3-spa(pcD-S)。肌注免疫LCR小鼠后,RT-PCR检测小鼠体内丹毒丝菌spaAN基因的瞬时表达,ELISA检测小鼠血清spaA抗体水平的变化,以丹毒丝菌XJ1249评价免疫小鼠的保护效果。结果:免疫第4周时pcD-ACSC核酸疫苗激发了较高水平的SpaAN抗体而pcD-S核酸疫苗激发的抗体水平与对照相比差异不显著;同时pcD-ACSC核酸疫苗具有70%保护效果,pcD-S核酸疫苗则不具保护效果。结论:通过融合高表达分泌蛋白信号肽、增加抗原溶解度的序列和分子佐剂C3d3能显著提高spaAN的抗体水平,为丹毒丝菌spaA核酸疫苗的应用奠定基础。

关键词：表面保护抗原A 丹毒丝菌核酸疫苗

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型上游调控区DNA多态性分析

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第11期26卷 1000-1004页

作者：余勐马正海王艳萍热西旦张富春新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

目的探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV-16)上游调控区(upstream regulatory region,URR)的变异及其与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生的关系。方法从19份中国新疆南部地区维吾尔族... 详细信息

目的探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV-16)上游调控区(upstream regulatory region,URR)的变异及其与新疆维吾尔族妇女宫颈癌发生的关系。方法从19份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA,以此DNA为模板,PCR扩增HPV-16 URR DNA片段,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV-16 URR DNA多态性。结果PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV-16 URR阳性率为89．47％(17/19)；测序和序列分析表明,与HPV-16原型比较,HPV-16 URR核苷酸多处发生变异,URR在核苷酸水平上形成11种突变模式(XJU-1～XJU-11),XJU-1和XJU-4突变模式各占23．53％(4/17),其余各突变模式均占5．88％(1/17),各模式与HPV-16 URR原型比较,同源性在98．50％～99．68％之间。在各位点的突变中,7192位(G→T)、7520位(G→A)的突变(100％,17/17)在新疆地区趋于恒定,该两处突变在亚裔美洲型(AA)中普遍存在,与病毒感染及宫颈癌发生相关；7729位(A→C)、7843位(A→G)、7792位(C→T)的突变可显著提高启动子的转录活性；其余突变尚未见报道,部分突变为新疆地区分离的HPV-16 URR所特有。结论中国新疆南部HPV-16 URR基因发生变异,HPV-16 URR的突变与HPV-16的系统发生以及新疆维吾尔族妇女高发宫颈癌存在一定关系。

关键词：人乳头状瘤病毒16型宫颈癌上游调控区多态性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染

引用

细胞与分子免疫学杂志 2008年第7期24卷 663-667页

作者：刘立鸿许璐李轶杰张富春马正海新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-... 详细信息

目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确。重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录。重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达。Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达。结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础。

关键词：密码子优化 HPV16衣壳基因共表达真核载体细胞转染

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

拟南芥AtNHX2启动子的克隆及表达模式分析(英文)

引用

生物化学与生物物理进展 2004年第12期31卷 1114-1118页

作者：李金耀徐莉马纪周洁张富春新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 浙江大学生命科学院植物生理学与生物化学国家重点实验室

AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员 ,编码了一种液泡膜中的Na+ /H+ 反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用 .采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约 2 8kb的DNA片段 ,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA13... 详细信息

AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员 ,编码了一种液泡膜中的Na+ /H+ 反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用 .采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约 2 8kb的DNA片段 ,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA130 1 1中 ,通过基因枪轰击洋葱表皮瞬时表达的方法 ,初步检测启动子的活性 .将重组质粒pCAMBIA130 1 1/AtNHX2promoter转化拟南芥并筛选纯合子 .AtNHX2promoter GUS分析显示AtNHX2在所有的组织中均有表达 ,包括根尖 .在保卫细胞中检测到了强烈的GUS表达 ,这一结果表明 ,AtNHX2对特殊细胞的pH调控和K+ 自身稳定方面起着重要的作用 .AtNHX2启动子的活性可被NaCl抑制 ,并且抑制的强度和NaCl的浓度成正相关 .30 0mmol/LKCl处理可增强启动子的活性 ,说明NaCl和KCl是在转录水平上调控AtNHX2的表达 .在老叶中GUS活性比在新叶中GUS活性强 ,这说明了AtNHX2优先将有毒的离子积累在老叶中 ,从而有利于植物的正常发育 .在根毛细胞中也观测到了强烈的GUS活性 ,这就暗示了AtNHX2在扩大的液泡中储存Na+ .

关键词： AtNHX2启动子,瞬时表达,表达模式分析,盐胁迫

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

手术应激反应的新概念——神经免疫内分泌学说

引用

国外医学（麻醉学与复苏分册） 1995年第4期16卷 193-195页

作者：刘忠渊张富春赵干钟哲王宾新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室

神经免疫内分泌学说认为神经内分泌系统与免疫系统间存在双向调节、交互影响的基础,更引人关注的是,免疫系统通过释放细胞因子、分泌内分泌激素、感受抗原刺激等三方面发挥调节神经内分泌反应的功能。在手术应激反应的研究中不能忽视免... 详细信息

神经免疫内分泌学说认为神经内分泌系统与免疫系统间存在双向调节、交互影响的基础,更引人关注的是,免疫系统通过释放细胞因子、分泌内分泌激素、感受抗原刺激等三方面发挥调节神经内分泌反应的功能。在手术应激反应的研究中不能忽视免疫系统的参与作用及围术期多种因素对其影响。

关键词：外科手术应激反应神经系统免疫系统内分泌

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

小分子肽制备抗体方法的研究进展

引用

细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 312-314页

作者：郑树涛刘忠渊张富春新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐新疆乌鲁木齐830046

许多生理调节所必须的因子都是很小的肽类,生物技术的发展也促进了大量小分子基因工程肽类药物的出现,因而小分子肽的分离、纯化与鉴定技术日趋重要。小分子肽的界限划分迄今未有明确定义,一般认为小分子肽的相对分子质量(Mr)均在3000以... 详细信息

许多生理调节所必须的因子都是很小的肽类,生物技术的发展也促进了大量小分子基因工程肽类药物的出现,因而小分子肽的分离、纯化与鉴定技术日趋重要。小分子肽的界限划分迄今未有明确定义,一般认为小分子肽的相对分子质量(Mr)均在3000以下[1]。在小分子肽的生物学功能、鉴定与其相互作用的蛋白质的研究中,特异性抗体是一重要的研究工具[2]。鉴于小分子肽仅有反应原性,免疫原性较弱,因此在小分子肽制备抗血清过程中采取多种方法。1偶联载体和佐剂由于小分子肽仅有反应原性,免疫原性较弱或无免疫原性,通常需与大Mr载体蛋白偶联制备完全抗原(免疫原),借助载体蛋白的T细胞表位获得免疫原性,以便刺激机体产生抗体[3]。制备完全抗原肽时常用的载体有牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、兔血清白蛋白(RSA)、鸡卵清蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HSA)、多聚赖氨酸(PLL)等。BSA是常用的多肽载体,但由于BSA经常被用做检测试验的阻断剂而使得该方法生产的抗体在应用上存在着一定的局限性。因为与BSA偶联的多肽刺激产生的抗血清也含有针对BSA的抗体,一次可能导致假阳性结果。KLH具有更高的抗原性,是最为常用的多肽偶联载体。虽然K...

关键词：小分子肽抗体制备佐剂偶联

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

W544F定点突变提高苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的稳定性

引用

高等学校化学学报 2008年第10期29卷 1999-2002页

作者：王发祥夏立秋丁学知赵新民单世平莫湘涛张友明喻子牛湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室长沙410081 华中农业大学生命科学与技术学院农业微生物国家重点实验室武汉430070

W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的... 详细信息

W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的原毒素对紫外照射、胰蛋白酶处理和室温存贮的稳定性相对于野生Cry1Ac都有一定程度的提高;经原子力显微镜观察,发现W544F产生的晶体两个顶点间的垂直距离比野生型Cry1Ac约长0.6μm,且晶体表面不及野生型光滑;此外,W544F与野生Cry1Ac的杀虫活性相似,但经过紫外光照射9 h后,其保留的杀虫活性比野生型高4倍以上.W544F突变较好地解决了Cry1Ac毒素蛋白田间应用不持久的问题,具有重要的应用价值.

关键词： Cry1Ac蛋白定点突变色氨酸苯丙氨酸稳定性

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：