检索结果-内蒙古大学图书馆

低蛋白质饲粮补加过瘤胃赖氨酸对多浪羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵参数及氮代谢的影响

动物营养学报 2024年第3期36卷 1756-1768页

作者：王明根朱振宇杨成俄广旭邓沭洋王继姝卢冬郭雪峰塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

本试验旨在研究低蛋白质饲粮补加过瘤胃赖氨酸(RPLys)对多浪羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵参数及氮代谢的影响。将9只体况相近且安装永久性瘘管的多浪羊羯羊,采用3×3拉丁方设计,随机分为3组:CK组(饲喂14%蛋白质水平的饲粮)... 详细信息

本试验旨在研究低蛋白质饲粮补加过瘤胃赖氨酸(RPLys)对多浪羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵参数及氮代谢的影响。将9只体况相近且安装永久性瘘管的多浪羊羯羊,采用3×3拉丁方设计,随机分为3组:CK组(饲喂14%蛋白质水平的饲粮)、DP组(饲喂12%蛋白质水平的饲粮)、LP组(饲喂12%蛋白质水平饲粮+14.0 g/d RPLys)。试验分3期进行,每期28 d,其中预试期15 d,正试期13 d。结果表明:1)各组间的初重及干物质采食量(DMI)无显著差异(P>0.05),LP组的平均日增重(ADG)极显著高于CK组和DP组(P<0.01),CK组和DP组的ADG差异不显著(P>0.05),LP组的料重比(F/G)显著低于CK组和DP组(P<0.05),CK组和DP组的F/G差异不显著(P>0.05)。2)各组间干物质(DM)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和粗脂肪(EE)表观消化率差异不显著(P>0.05);LP组粗蛋白质(CP)表观消化率极显著高于CK组和DP组(P<0.01),CK组CP表观消化率极显著高于DP组(P<0.01);LP组有机物(OM)表观消化率极显著高于CK组和DP组(P<0.01),CK组和DP组OM表观消化率差异不显著(P>0.05)。3)低蛋白质饲粮补加RPLys对多浪羊瘤胃氨态氮(NH3⁃N)、丁酸(BA)和戊酸(VA)含量无显著影响(P>0.05);DP组和LP组微生物蛋白(MCP)含量极显著高于CK组(P<0.01);LP组乙酸(AA)和丙酸(PA)含量极显著高于CK组和DP组(P<0.01),CK组和DP组AA和PA含量差异不显著(P>0.05);CK组乙酸/丙酸极显著高于LP组(P<0.01);LP组总挥发性脂肪酸(TVFA)含量极显著高于CK组和DP组(P<0.01),CK组和DP组TVFA含量差异不显著(P>0.05)。4)各组间多浪羊进食氮、尿氮、粪氮、总排出氮、沉积氮、氮利用率和氮生物学价值均差异不显著(P>0.05),但与CK组相比,DP组与LP组的粪氮有降低的趋势(0.05

关键词：低蛋白质饲粮过瘤胃赖氨酸表观消化率瘤胃发酵参数氮代谢

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绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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畜牧与兽医 2024年第7期56卷 78-84页

作者：刘晓艳王永飞邓博文哈尔勒哈·阿曼太蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到... 详细信息

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：肺炎支原体 30S rpsE基因原核表达多克隆抗体

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一株盐碱绿藻的SE培养基优化

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新疆农业科学 2023年第10期60卷 2509-2520页

作者：陈凤董宇蔡宏宇张苏江雷曼红孙禹塔里木大学/新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

【目的】优化一株盐碱绿藻的SE培养基,为盐碱藻分子生物学资源的研究提供理论依据。【方法】对塔里木大学校园内东湖中分离纯化的一株盐碱绿藻进行培养基筛选,通过形态观察及分子鉴定,研究CaCl_(2)·2H_(2)O、KH_(2)PO_(4)、NaCl、N... 详细信息

【目的】优化一株盐碱绿藻的SE培养基,为盐碱藻分子生物学资源的研究提供理论依据。【方法】对塔里木大学校园内东湖中分离纯化的一株盐碱绿藻进行培养基筛选,通过形态观察及分子鉴定,研究CaCl_(2)·2H_(2)O、KH_(2)PO_(4)、NaCl、NaNO_(3)、MgSO_(4)·7H_(2)O以及pH对其生长的影响,并进行系统发育分析。【结果】盐碱绿藻为椭圆形藻。CaCl_(2)·2H_(2)O最适浓度为0.050 g/L,可溶性糖为24.34%,可溶性蛋白为16.55%,总叶绿素为2.000 g/L。KH_(2)PO_(4)最适浓度为0.175 g/L,可溶性糖为10.53%,可溶性蛋白为7.7%,总叶绿素为3.607 g/L。NaCl最适浓度为0.100 g/L,可溶性糖为11.82%,可溶性蛋白为8.57%,总叶绿素为3.385 g/L。NaNO_(3)最适浓度为0.250 g/L,可溶性糖为10.64%,可溶性蛋白为6.10%,总叶绿素为2.731g/L。MgSO_(4)·7H_(2)O最适浓度为0.375 g/L,可溶性糖为12.32%,可溶性蛋白为9.9%,总叶绿素为1.790 g/L。pH最适浓度为9.0,可溶性糖为16.57%,可溶性蛋白为9.46%,总叶绿素为1.985 g/L。1号藻的序列与新颖拟绿球藻属(Pseudochlorococcum sp.)聚簇成一支亲缘关系很相近。【结论】确定了1号盐碱绿藻的分类地位以及SE培养基优化后CaCl_(2)·2H_(2)O的浓度为0.050 g/L,KH_(2)PO_(4)的浓度为0.175 g/L,NaCl的浓度为0.100 g/L,NaNO_(3)的浓度为0.250 g/L,MgSO_(4)·7H_(2)O的浓度为0.375 g/L和pH为9.0。

关键词：盐碱绿藻 18S rDNA 形态特性培养基优化

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核桃腐烂病拮抗菌Pseudomonas chlororaphis的筛选、鉴定及其防病促生效果

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果树学报 2025年第1期42卷 170-184页

作者：刘志金单路路玛丽艳姑丽·吐尔迪李彤康启航张锐董宁陈小飞塔里木大学农学院·南疆有害生物综合治理兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学园艺与林学学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团林业和草原工作总站乌鲁木齐830013

【目的】为有效控制核桃腐烂病的发生与发展,从新疆温宿县核桃园土壤中分离既对核桃腐烂病有很好防效,又对核桃种子萌芽具有促进作用的拮抗细菌。【方法】通过稀释涂布平板法进行分离培养、平皿对峙筛选,通过形态学和分子生物学方法进... 详细信息

【目的】为有效控制核桃腐烂病的发生与发展,从新疆温宿县核桃园土壤中分离既对核桃腐烂病有很好防效,又对核桃种子萌芽具有促进作用的拮抗细菌。【方法】通过稀释涂布平板法进行分离培养、平皿对峙筛选,通过形态学和分子生物学方法进行鉴定,以及通过室内离体枝条、盆栽和田间盆栽试验探究防病促生作用。【结果】筛选出1株生防菌WS-04,通过形态学观察、生理生化特性测定及分子鉴定,最终确定菌株WS-04为绿针假单胞菌Pseudomonas chlororaphis。研究发现WS-04能使病原菌菌丝发生断裂和解体,使菌丝无法正常生长,对核桃腐烂病菌Cytospora chysosperma的抑菌效果达87.00%,其发酵液对核桃腐烂病的防效也达到84.96%,还具有一定的热稳定性。经过拮抗菌株发酵滤液浸泡处理的核桃种子,萌芽率和发芽率与对照相比都有显著提高(p<0.05),且有效地降低了坏种率。菌株发酵滤液能促进核桃幼苗苗高、主根长、须根数、叶片面积和干质量的显著增加,其依次增加了25.40%、83.33%、48.02%、24.76%和98.40%。【结论】从核桃园土壤中分离并筛选出一株具有广谱抗菌且对核桃种子和幼苗具有促生作用的生防细菌。研究成果为核桃腐烂病的生物防治提供了新的菌株来源。

关键词：核桃腐烂病拮抗细菌促生作用

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盐、碱胁迫下高丹草苗期生理特征及转录组学分析

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生物技术通报 2023年第6期39卷 199-207页

作者：孔德真段震宇王刚张鑫席琳乔新疆农垦科学院作物研究所谷物品质与遗传改良兵团重点实验室石河子832000 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

高丹草(Sorghum bicolor×S. sudanense hybrids)具有抗旱和耐盐碱特性,逐渐成为畜牧业重要的饲料作物,明确高丹草耐盐、耐碱分子调控机制对高丹草分子辅助育种具有重要意义。本文对高丹草种子进行不同浓度的NaCl和Na_(2)CO_(3)胁迫... 详细信息

高丹草(Sorghum bicolor×S. sudanense hybrids)具有抗旱和耐盐碱特性,逐渐成为畜牧业重要的饲料作物,明确高丹草耐盐、耐碱分子调控机制对高丹草分子辅助育种具有重要意义。本文对高丹草种子进行不同浓度的NaCl和Na_(2)CO_(3)胁迫,统计不同浓度下发芽率变化;高丹草幼苗进行200 mmol/L的NaCl和Na_(2)CO_(3)胁迫处理,不同时间段对整株幼苗可溶性糖、脯氨酸(PRO)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)生理指标测定和转录组学表达分析。结果表明,相同浓度中性盐(NaCl)胁迫高丹草种子发芽率、根长均大于碱性盐(Na_(2)CO_(3))胁迫。随着胁迫时间延长,POD和CAT在中性盐胁迫时表现出逐渐下降趋势,碱性盐胁迫时呈逐渐增加趋势;PRO、可溶性糖和T-SOD在中性盐胁迫表现出逐渐增大趋势,碱性盐胁迫时表现出逐渐减小趋势。转录组学分析发现,在中性盐胁迫6、12和24 h后,分别鉴定出241个、293个和149个DEG,碱性盐胁迫后,分别鉴定出664个、641个和728个DEG。GO和KEGG聚类分析显示,盐和碱胁迫处理下参与氧化还原酶合成、渗透胁迫、细胞膜组分、细胞氧化解毒等相关DEG在高丹草苗期生长过程中应对盐碱胁迫响应发挥关键性作用,DEG主要集中在激素信号转导、光合代谢、氧化还原、糖代谢、核酸修复、苯丙烷生物合成等过程与非生物胁迫或逆境相关。盐碱胁迫条件下,高丹草幼苗应对环境刺激通过激素信号转导和氧化还原酶解毒。糖代谢和还原酶合成转运在耐盐碱品种中起到了重要作用。

关键词：高丹草盐碱胁迫转录组生理特性

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绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 689-699页

作者：王永飞邓博文刘晓艳哈尔勒哈·阿曼太郭嘉栋周正国蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 阿克苏职业技术学院阿克苏843000

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu... 详细信息

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

关键词：绵羊肺炎支原体重叠延伸PCR EF-Tu基因多克隆抗体

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饲粮中添加机采棉渣对肉兔生长性能、屠宰性能、肉品质和血清生化指标的影响

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动物营养学报 2025年第4期37卷 2627-2637页

作者：路顺萍吴启辉赵明鑫万婕王娇陈雪文张苏江塔里木大学动物科学与技术学院农业农村部环塔里木畜草资源利用重点实验室(部省共建)新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院阿拉尔843300

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平机采棉渣对肉兔生长性能、屠宰性能、器官指数、肉品质和血清生化指标的影响。选择120只体重相近的健康35日龄断奶伊拉肉兔,随机分为4组,分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、10%、20%和30%机采棉渣的... 详细信息

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平机采棉渣对肉兔生长性能、屠宰性能、器官指数、肉品质和血清生化指标的影响。选择120只体重相近的健康35日龄断奶伊拉肉兔,随机分为4组,分别饲喂在基础饲粮中添加0(对照组)、10%、20%和30%机采棉渣的饲粮,每组5个重复,每个重复6只(公母各占1/2)。预试期7 d,正试期60 d。结果表明:1)饲粮中添加机采棉渣对肉兔平均日采食量、腹泻率和死亡率均无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,10%机采棉渣添加组终末体重和显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05)。2)10%机采棉渣添加组肉兔宰前活重和全净膛率显著高于20%和30%机采棉渣添加组(P<0.05),半净膛重和全净膛重显著高于对照组和30%机采棉渣添加组(P<0.05),半净膛率显著高于其他各组(P<0.05)。3)饲粮中添加机采棉渣对肉兔心脏指数、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数均无显著影响(P>0.05)。30%机采棉渣添加组肝脏指数显著高于对照组以及10%和20%机采棉渣添加组(P<0.05),10%和20%机采棉渣添加组肝脏指数与对照组相比无显著差异(P>0.05)。4)饲粮中添加机采棉渣对肉兔背最长肌pH、肉色、滴水损失和剪切力均无显著影响(P>0.05)。10%机采棉渣添加组背最长肌蒸煮损失显著低于对照组和30%机采棉渣添加组(P<0.05)。5)30%机采棉渣添加组肉兔血清尿素氮含量显著高于对照组和10%机采棉渣添加组(P<0.05),且对照组与10%机采棉渣添加组之间差异不显著(P>0.05);20%和30%机采棉渣添加组血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加适宜水平机采棉渣可提高肉兔生长性能,改善屠宰性能和肉品质,对器官指数和血清生化指标无负面影响,以添加10%为宜。

关键词：机采棉渣肉兔生长性能屠宰性能肉品质血清生化指标

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基于Illumina Bovine SNP 50K芯片对比利时蓝牛的遗传规律解析

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黑龙江畜牧兽医 2024年第20期 45-52,62,125,126页

作者：王雪艳李小鹏韩亚辉刘悦欣陶雪雨韩志鹏杨睿智张成龙周稳徐新如刘书东塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

为了研究大型肉牛比利时蓝牛生长发育的遗传规律,筛选优异基因,试验基于Illumina Bovine SNP 50K芯片数据,采用PLINK软件对270头比利时蓝牛常染色体数据进行基因组长纯合片段(ROH)检测并基于选择信号分析,通过核苷酸多态性检测取前5%的... 详细信息

为了研究大型肉牛比利时蓝牛生长发育的遗传规律,筛选优异基因,试验基于Illumina Bovine SNP 50K芯片数据,采用PLINK软件对270头比利时蓝牛常染色体数据进行基因组长纯合片段(ROH)检测并基于选择信号分析,通过核苷酸多态性检测取前5%的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,基于牛参考基因组(ARS-UCD1.2)对结果SNPs进行基因注释,对候选基因进行GO功能注释与KEGG信号通路富集分析,并计算染色体上ROH长度占基因组总长度的比例(FROH)。结果表明:在全部270个个体数据中共检测出1893个ROH片段,平均长度13.2311 Mb,平均FROH为0.0392;得到与生长发育相性状相关的基因有NEB、TET2、NEK11、NCKAP1、MYH15、EIF4A2、bta-miR-1248-1、DCAF8、PRORP、DOCK3、SYT15、MYEF2、ZDHHC13,与公牛生育能力相关的基因有CFAP61、DNAL1、BAG1。说明通过对比利时蓝牛生长发育性状相关分子标记的解析可以为比利时蓝牛遗传改良提供理论指导。

关键词：比利时蓝牛 Illumina Bovine SNP 50K芯片长纯合片段选择信号分析基因注释基因功能富集分析

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新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的药物敏感性研究

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黑龙江畜牧兽医 2023年第17期 122-127,133,141页

作者：冷楠楠任强陈伟罗万和塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

为了探索新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的敏感性,试验采用微量肉汤稀释法测定了氟苯尼考注射液对表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),对表皮葡萄球菌生长、生物被膜形成的抑制作用... 详细信息

为了探索新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的敏感性,试验采用微量肉汤稀释法测定了氟苯尼考注射液对表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),对表皮葡萄球菌生长、生物被膜形成的抑制作用及表面疏水性的影响,测定了氟苯尼考注射液的体外抑菌效果及其对表皮葡萄球菌细胞膜完整性的影响。结果表明:氟苯尼考注射液对表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株的MIC值分别为4,2μg/mL,MBC值分别为16,8μg/mL。与未加氟苯尼考注射液的菌液相比,0.5μg/mL氟苯尼考注射液可显著抑制表皮葡萄球菌生长,0.25μg/mL氟苯尼考可显著抑制其生物被膜的形成(P<0.05),浓度>2μg/mL时抑制效果极显著(P<0.01),呈浓度依赖性;氟苯尼考注射液可降低表皮葡萄球菌细胞表面疏水性,呈浓度依赖性。当氟苯尼考注射液浓度为1/2 MIC时,可在体外显著抑制表皮葡萄球菌ATCC 35984生长(P<0.05);当浓度高于1 MIC时,可极显著抑制表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株生长(P<0.01)。当氟苯尼考注射液浓度>1/2 MIC时,其可损伤表皮葡萄球菌的细胞膜完整性。说明新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的药物敏感性较好,氟苯尼考可能是通过降低表皮葡萄球菌细胞表面疏水性和损伤表皮葡萄球菌的细胞膜完整性来发挥抑菌和杀菌作用的。

关键词：新疆南疆地区表皮葡萄球菌氟苯尼考注射液药物敏感性抗菌活性生物被膜

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多浪羊PROKR 2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1339-1348页

作者：黄巧艳李伟王鑫昆邢凤塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑c... 详细信息

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR 2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR 2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR 2基因序列大小为2641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1343 bp和CDS区1155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR 2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR 2基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且在初情期后的表达量最高;垂体中PROKR 2基因表达量无显著变化(P>0.05);子宫中PROKR 2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05);卵巢和输卵管中PROKR 2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR 2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

关键词：多浪羊 PROKR 2基因克隆初情期表达

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