检索结果-内蒙古大学图书馆

中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1339-1348页

作者：黄巧艳李伟王鑫昆邢凤塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑c... 详细信息

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR 2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR 2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR 2基因序列大小为2641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1343 bp和CDS区1155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR 2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR 2基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且在初情期后的表达量最高;垂体中PROKR 2基因表达量无显著变化(P>0.05);子宫中PROKR 2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05);卵巢和输卵管中PROKR 2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR 2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

关键词：多浪羊 PROKR 2基因克隆初情期表达

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棉副产品全混合发酵饲料工艺参数优化

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饲料研究 2024年第12期47卷 97-104页

作者：王明根白天天朱振宇杨成赵林波刘俊峰卢冬郭雪峰塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

试验旨在探索棉副产品全混合发酵饲料工艺参数,为提高棉副产品综合利用效率、解决新疆南疆地区饲料不足的问题提供思路。试验采用3×5双因素设计,设置28.57%(C1)、31.51%(C2)和34.21%(C3)3个玉米粉添加组,每组分别添加1.0(B1)、2.0(... 详细信息

试验旨在探索棉副产品全混合发酵饲料工艺参数,为提高棉副产品综合利用效率、解决新疆南疆地区饲料不足的问题提供思路。试验采用3×5双因素设计,设置28.57%(C1)、31.51%(C2)和34.21%(C3)3个玉米粉添加组,每组分别添加1.0(B1)、2.0(B2)、3.0(B3)、4.0(B4)、5.0 g(B5)屎肠球菌冻干粉,每组3个重复,加水预发酵2 d,测定pH值后加入棉副产品全混合饲料的其他部分,控制水分含量为70%,室温下发酵30 d,开封后测定发酵品质、营养成分、游离棉酚(FG)及有机酸含量。结果表明:全部发酵饲料感官品质较好,C1B3、C2B3、C2B4组为优等。不同玉米粉添加量对干物质、粗蛋白、酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量影响极显著(P<0.01);不同屎肠球菌添加量对干物质、粗蛋白、酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量影响极显著(P<0.01);玉米粉和屎肠球菌交互作用对粗蛋白含量有极显著影响(P<0.01),对酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量有显著影响(P<0.05)。不同屎肠球菌添加量对FG含量影响显著(P<0.05)。不同玉米粉添加量对乳酸(LA)、丁酸(BA)和总挥发性脂肪酸含量影响极显著(P<0.01),不同屎肠球菌添加量对LA、乙酸(AA)、丙酸(PA)和总挥发性脂肪酸含量影响极显著(P<0.01),玉米粉和屎肠球菌交互作用仅对LA、AA和总挥发性脂肪酸含量具有极显著影响(P<0.01)。采用隶属函数法综合对各项指标进行评估,C3B3发酵效果最佳。研究表明,添加34.21%玉米粉、3.0 g屎肠球菌、17.20%棉籽粕、28.35%棉花秸秆、19.38%棉籽壳、0.66%预混料、0.07%CaCO3和0.13%NaCl,含水量控制为70%时,棉副产品全混合饲料发酵效果较好。

关键词：屎肠球菌棉副产品发酵效果工艺优化

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新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及对氟苯尼考纳米凝胶的药物敏感性研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第6期 59-65页

作者：冷楠楠刘燕窦蕊鞠牧洁刘金环陈伟罗万和塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300

为了研究氟苯尼考纳米凝胶对新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的抑菌效果,试验从新疆南疆地区某奶牛场的乳房炎患病奶牛乳样中分离纯化金黄色葡萄球菌,采用生化试验、PCR扩增及测序等方法进行细菌鉴定,并通过比较氟苯尼考原料药、氟苯尼... 详细信息

为了研究氟苯尼考纳米凝胶对新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的抑菌效果,试验从新疆南疆地区某奶牛场的乳房炎患病奶牛乳样中分离纯化金黄色葡萄球菌,采用生化试验、PCR扩增及测序等方法进行细菌鉴定,并通过比较氟苯尼考原料药、氟苯尼考纳米凝胶和氟苯尼考注射液对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌圈直径(DIZ)、最小抑菌浓度(MIC)和抑菌曲线分析氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌效果。结果表明:从乳样中分离到一株细菌,该分离株革兰氏染色、镜检后呈蓝紫色并排列成葡萄串状,触酶、血浆凝固酶和甘露醇发酵试验结果均为阳性,其基因组DNA中能扩增出金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因,16S rDNA基因序列与金黄色葡萄球菌的相似性为99.7%,判断该分离菌为金黄色葡萄球菌。氟苯尼考原料药、氟苯尼考纳米凝胶和氟苯尼考注射液对金黄色葡萄球菌分离株和金黄色葡萄球菌ATCC 29213株均产生抑菌作用,DIZ大小为氟苯尼考纳米凝胶>氟苯尼考注射液>氟苯尼考原料药,均表现为高度敏感,其中氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株和金黄色葡萄球菌ATCC 29213株的DIZ均显著高于氟苯尼考原料药和氟苯尼考注射液(P<0.05)。3种药物对金黄色葡萄球菌分离株的MIC分别为4μg/mL、2μg/mL和4μg/mL。1μg/mL氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌效果与2μg/mL氟苯尼考原料药和氟苯尼考注射液相当,当氟苯尼考纳米凝胶的浓度为4μg/mL时金黄色葡萄球菌分离株不再生长。说明从新疆南疆地区成功分离出一株乳源金黄色葡萄球菌;相比于氟苯尼考原料药和氟苯尼考注射液,氟苯尼考纳米凝胶对该分离株具有较好的抑菌效果。

关键词：金黄色葡萄球菌氟苯尼考纳米凝胶抑菌活性奶牛乳房炎菌株分离

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枯草芽孢杆菌与黑曲霉对甜高粱秸秆发酵效果的影响

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中国畜牧杂志 2024年第2期60卷 323-328页

作者：董宇蔡宏宇马艳王娇陈凤柏梁耀孙禹张苏江塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室塔里木大学塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室新疆阿拉尔843300

试验旨在探究枯草芽孢杆菌与黑曲霉对甜高粱秸秆发酵品质的影响。以切短至1~2 cm甜高粱秸秆为原料,采用单因素设计,分为4个试验组,分别为对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组(枯草芽孢杆菌:黑曲霉为1:1),添加量为2 mL/100 g,菌... 详细信息

试验旨在探究枯草芽孢杆菌与黑曲霉对甜高粱秸秆发酵品质的影响。以切短至1~2 cm甜高粱秸秆为原料,采用单因素设计,分为4个试验组,分别为对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组(枯草芽孢杆菌:黑曲霉为1:1),添加量为2 mL/100 g,菌液浓度控制在1×10^(8)个细菌/mL,每组3个重复。分别在15、30、45d取样,通过感官评定、营养价值、发酵品质、有氧稳定性等指标进行综合分析。结果表明:试验组对甜高粱秸秆的感官品质均起到改善作用;在15、30、45 d时试验组粗蛋白质含量高于对照组(P<0.05),在30、45 d时中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量低于对照组(P<0.05);在30、45 d时黑曲霉组、菌+霉组pH低于对照组、枯草芽孢杆菌组(P<0.05),在45d时枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组氨态氮/总氮低于对照组(P<0.05),在15、30、45 d时菌+霉组乳酸与乙酸含量高于对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组(P<0.05);随着有氧暴露时间的延长,对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组pH呈上升趋势(P<0.05),干物质含量呈先上升再下降趋势(P<0.05),枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组pH和干物质含量低于对照组(P<0.05)。可见,在发酵第45天,菌+霉组能显著改善甜高粱秸秆感官品质、提高营养价值与发酵品质、延长其有氧稳定性时间。

关键词：甜高粱秸秆枯草芽孢杆菌黑曲霉发酵品质

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棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮的营养价值研究

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饲料研究 2024年第2期47卷 106-110页

作者：李龙龙路顺萍陈雪文方雷伊敏江·阿卜杜热伊木卢冬张苏江新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

试验旨在探究棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮的营养特性及饲用价值。试验分为3组,对照组(CK组)使用全株玉米青贮,A组、B组棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣按1∶1混合青贮,每组3个重复,发酵90 d后取样,分析青贮饲料的发酵品质... 详细信息

试验旨在探究棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮的营养特性及饲用价值。试验分为3组,对照组(CK组)使用全株玉米青贮,A组、B组棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣按1∶1混合青贮,每组3个重复,发酵90 d后取样,分析青贮饲料的发酵品质、营养特性及饲用价值等指标。结果显示,与CK组相比,A组和B组青贮饲料的pH值升高(P<0.05),费氏评分降低(P<0.05);A组和B组的粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量升高(P<0.05),非纤维性碳水化合物(NFC)含量降低(P<0.05)。A组饲料相对饲喂价值(RFV)和粗饲料相对质量(RFQ)高于B组(P<0.05)。与CK组相比,A组和B组的体外产气量降低,其中A组的体外产气量高于B组。A组和B组的干物质降解率(IVDMD)低于CK组(P<0.05)。研究表明,棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮饲料的饲用价值仍低于全株玉米青贮饲料,但A组与CK组的饲用价值较接近,应用潜力较高。

关键词：棉花秸秆全株玉米甜菜渣混合青贮发酵品质营养特性饲用价值

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新疆克孜勒河4种裂腹鱼形态差异比较

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水生态学杂志 2024年第4期45卷 99-107页

作者：张瑞赵贺聂竹兰王俊辉林慧莉秦凯瑞蔡汝铭塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地新疆阿拉尔843300

对新疆克孜勒河(Kizil River)流域4种裂腹鱼形态差异和生长特性进行比较分析,从形态特征上为群体的划分提供科学数据,为裂腹鱼的培育和种质资源保护提供理论依据。以2020年7月-2021年8月采自克孜勒河塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulp... 详细信息

对新疆克孜勒河(Kizil River)流域4种裂腹鱼形态差异和生长特性进行比较分析,从形态特征上为群体的划分提供科学数据,为裂腹鱼的培育和种质资源保护提供理论依据。以2020年7月-2021年8月采自克孜勒河塔里木裂腹鱼(Schizothorax biddulphi)、宽口裂腹鱼(Schizothorax eurystomus)、厚唇裂腹鱼(Schizothorax irregularis)和斑重唇鱼(Diptychus maculates)共126尾个体为研究对象,通过传统形态测量学和基于地标点的几何形态测量学分析方法比较克孜勒河4种裂腹鱼的生长特性与形态差异。结果显示:4种裂腹鱼共有13个形态特征的平均值存在显著差异,且主要集中于头部、躯干部和尾部;利用tpsRegr软件的网格变形分析,4种裂腹鱼的形态差异主要体现在头部和尾部,其中斑重唇鱼鱼体较为纤细,头部偏小;通过主成分分析发现厚唇裂腹鱼、塔里木裂腹鱼和宽口裂腹鱼形态较为相近,而斑重唇鱼明显独立成一组群;聚类分析结果显示塔里木裂腹鱼群体和厚唇裂腹鱼群体首先聚为一支,再与宽口裂腹鱼聚为一支,最后与斑重唇鱼聚类。研究结果显示4种裂腹鱼群体存在形态差异,且与其地理分布密切相关。

关键词：裂腹鱼形态特征地标点法多变量形态测量学克孜勒河

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吐鲁番戈壁滩耐热微生物及产酶能力

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微生物学通报 2024年第9期51卷 3438-3453页

作者：李丽霞文凤罗丹刘琴夏占峰塔里木大学、生命科学与技术学院、新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300

【背景】吐鲁番盆地干燥少雨、夏季气温高、紫外线辐射强,普通微生物难以存活,是发掘耐热微生物资源的宝地。【目的】获得吐鲁番盆地耐热微生物资源,探索其产耐热酶能力,促进新疆耐热微生物资源的开发和应用。【方法】以吐鲁番戈壁滩表... 详细信息

【背景】吐鲁番盆地干燥少雨、夏季气温高、紫外线辐射强,普通微生物难以存活,是发掘耐热微生物资源的宝地。【目的】获得吐鲁番盆地耐热微生物资源,探索其产耐热酶能力,促进新疆耐热微生物资源的开发和应用。【方法】以吐鲁番戈壁滩表层沙土样品为实验对象,利用不同营养水平的6种培养基,经50℃培养分离耐热菌株,揭示吐鲁番戈壁滩表层耐热微生物的种类,并检测菌株在高温下产淀粉酶、纤维素酶、木聚糖酶、葡聚糖酶及蛋白酶的能力。【结果】共分离获得41株耐热细菌,分布在芽孢杆菌科(Bacillaceae)的6个属,分别是芽孢杆菌属(Bacillus)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、短短芽孢杆菌属(Brevibacillus)、厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)、好氧芽孢杆菌属(Aeribacillus)和热芽孢杆菌属(Caldibacillus)。分离到的41株耐热菌中有29株产淀粉酶,29株产纤维素酶,33株产木聚糖酶,37株产葡聚糖酶,37株产蛋白酶。菌株TRM81951、TRM81961、TRM81969具有同时产多种酶的能力;菌株TRM81953、TRM81988、TRM81972和TRM81957分别具有较强的产淀粉酶、木聚糖酶、葡聚糖酶和蛋白酶能力。【结论】吐鲁番戈壁滩生存着多种耐热芽孢杆菌,通过酶活性筛选发现吐鲁番戈壁滩耐热菌株具有很强的产水解酶能力,有利于在低营养环境中获取营养物质。

关键词：吐鲁番戈壁滩耐热微生物分离鉴定产酶能力

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新疆阿克苏地区鸭源鸡杆菌的分离鉴定和生物学特性分析

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 46-53页

作者：郝斌张家浩黎双李雪娇陈鑫刘淑华梁樊鑫侯梦哲李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为确定引起新疆维吾尔自治区阿克苏地区某鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的原因,本试验对采集自该鸡场病鸡的组织进行细菌分离和培养,对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列鉴定,并进行药敏试验和动物回归试验。结果显示,从病鸡... 详细信息

为确定引起新疆维吾尔自治区阿克苏地区某鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的原因,本试验对采集自该鸡场病鸡的组织进行细菌分离和培养,对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列鉴定,并进行药敏试验和动物回归试验。结果显示,从病鸡病料中分离获得1株革兰阴性杆菌;生化试验结果显示,该分离菌株能分解乳糖和果糖等,过氧化氢酶、甘露醇和氧化酶等反应呈阳性;16S rRNA基因核苷酸序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鸭源鸡杆菌同源性>99.9%;药敏试验结果显示,该分离菌株对四环素、氯霉素和环丙沙星等10种抗菌药耐药;动物回归试验结果显示,23周龄开产母鸡经生殖道接种分离菌株后采食量减少、产蛋量下降,剖检主要表现为输卵管炎、卵泡充血和变形等生殖道病变,与自然发病鸡一致;同居雏鸡与人工感染雏鸡分别在同居第2天和人工感染后第4天,可从上颚裂中分离出鸭源鸡杆菌,注射高浓度分离菌株可致雏鸡死亡。结果表明,引起该鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的病原为鸭源鸡杆菌。本试验结果为治疗和防控鸭源鸡杆菌提供借鉴,为鸭源鸡杆菌的进一步研究提供了参考材料。

关键词：鸭源鸡杆菌分离与鉴定 16S rRNA 耐药性分析

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稀释培养基结合添加诺氟沙星挖掘塔克拉玛干沙漠微生物资源

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微生物学通报 2024年第6期51卷 2110-2126页

作者：文凤刘淑芳吴佳敏吴思源扎米拉·吐尔江李丽霞罗晓霞夏占峰塔里木大学生命科学与技术学院、新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300

【背景】塔克拉玛干沙漠属于典型高温干旱极端环境,该地区的微生物经过长期的环境适应,物种分布极具地域特色。【目的】获得塔克拉玛干沙漠极端环境可培养微生物资源,并探索不同稀释浓度培养基结合添加诺氟沙星对塔克拉玛干沙漠微生物... 详细信息

【背景】塔克拉玛干沙漠属于典型高温干旱极端环境,该地区的微生物经过长期的环境适应,物种分布极具地域特色。【目的】获得塔克拉玛干沙漠极端环境可培养微生物资源,并探索不同稀释浓度培养基结合添加诺氟沙星对塔克拉玛干沙漠微生物分离培养的影响。【方法】采用不同稀释浓度的高氏一号培养基、LB培养基和R2A培养基,添加诺氟沙星终浓度为0.015μg/mL,分离培养塔克拉玛干沙漠微生物并对分离株进行药敏试验。【结果】共分离鉴定246株菌,分属于4个门6个纲21个目29个科58个属221个种。优势菌门为Firmicutes、Actinobacteria;优势菌纲为Bacilli、Actinomycetia;优势菌目为Bacillales、Streptomycetales;优势菌科为Bacillaceae、Streptomycetaceae;优势菌属为Streptomyces、Bacillus和Nocardiopsis。其中有80株菌最大相似度低于98.65%为疑似潜在新物种,2株菌最大相似度低于95.00%为疑似潜在新属。对分离获得的221个菌株进行了药敏试验,43株菌对诺氟沙星表现出抗药性,其中Streptomyces占主导;25株菌对诺氟沙星表现出中等耐药性。【结论】不同稀释浓度培养基结合添加诺氟沙星有利于塔克拉玛干沙漠极端环境微生物的分离培养,经分离培养获得了大量的极端环境微生物菌种资源,发现了大量微生物新物种及耐药性菌株,为后续挖掘耐药性菌株和探索极端环境微生物资源提供了研究基础。

关键词：塔克拉玛干沙漠微生物稀释培养基诺氟沙星药敏试验

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绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的原核表达、生物信息学分析及鼠源多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2024年第22期 85-93,134,135页

作者：邓博文刘晓艳王永飞靳玲李江斌哈尔勒哈·阿曼太蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团农一师畜牧兽医工作站新疆阿拉尔843300 新疆焉耆回族自治县畜牧兽医局新疆焉者841100

为了解绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的免疫原性和生物学功能,并获得其鼠源多克隆抗体,试验先以绵羊肺炎支原体基因组DNA为模板,PCR扩增DnaJ基因,将该基因片段插入原核表达载体pET-42b中构建重组质粒pET42b-DnaJ,将重组质粒pET42b-DnaJ转化至B... 详细信息

为了解绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白的免疫原性和生物学功能,并获得其鼠源多克隆抗体,试验先以绵羊肺炎支原体基因组DNA为模板,PCR扩增DnaJ基因,将该基因片段插入原核表达载体pET-42b中构建重组质粒pET42b-DnaJ,将重组质粒pET42b-DnaJ转化至BL21(DE3)感受态细胞中,获得重组菌pET42b-DnaJ/BL21(DE3);然后用IPTG对重组菌进行诱导表达,对表达的重组蛋白进行可溶性分析、鉴定和纯化;随后采用生物信息学软件对绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白进行生物信息学分析(亲水性、跨膜区域、B细胞抗原表位、磷酸化位点、二级结构、三级结构、亚细胞定位预测);最后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,并分别通过间接ELISA方法和Western-blot方法检测绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白鼠源多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明:诱导后的重组表达菌在41.5 ku处出现目的条带,与预期大小相符;重组蛋白主要以包涵体形式表达,可与鼠抗His标签抗体特异性结合,纯化后重组蛋白在正确位置出现单一的特异性条带,质量浓度为0.24 mg/mL。经生物信息学分析,绵羊支原体DnaJ蛋白亲水性区域分布在第1~10,12~18,20~30,32~57,61~91,108~129,141~182,190~198,204~228,230~239,247~262,264~281,291~308,311~318,321~337,347~358,361~376位氨基酸位点;为膜外蛋白,无跨膜区域;存在13个B细胞抗原表位,分别分布在5~24,26,28,30~90,111~128,137~209,211~221,246~254,267~273,302~314,323~333,346~356,360~372位氨基酸位点;共存在67个磷酸化位点,其中包含35个丝氨酸位点、18个苏氨酸位点和14个酪氨酸位点;二级结构主要为无规则卷曲和α-螺旋,然后依次为延伸链、β-转角,参与这4种二级结构构成的氨基酸分别占氨基酸总量的48.40%、25.40%、19.79%、6.42%;预测的三级结构与二级结构结果一致;亚细胞定位于细胞质中。制备的绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白鼠源多克隆抗体效价为1∶12800,能与重组蛋白特异性结合。说明绵羊肺炎支原体DnaJ蛋白获得了成功表达,该蛋白具有良好的免疫原性,由其制备的鼠源多克隆抗体效价较高、特异性较好。

关键词：绵羊肺炎支原体 DnaJ 原核表达生物信息学多克隆抗体

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