检索结果-内蒙古大学图书馆

全国人畜共患病学术研讨会

作者：成进李文蓉谷文喜沙依兰古丽依米提新疆畜牧科学院兽医研究所新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室

用含EDTA的提取剂制备了鸡沙门氏菌外膜蛋白(OMP),经琼脂扩散试验检测,与同源株抗血清出现特异性沉淀线,与不同源株出现完全同源和部分同源的沉淀线,经SDS-PAGE分析,OMP抗原所含的蛋白质分子量介于14～67KD之间,并用电洗脱方法分别制备... 详细信息

用含EDTA的提取剂制备了鸡沙门氏菌外膜蛋白(OMP),经琼脂扩散试验检测,与同源株抗血清出现特异性沉淀线,与不同源株出现完全同源和部分同源的沉淀线,经SDS-PAGE分析,OMP抗原所含的蛋白质分子量介于14～67KD之间,并用电洗脱方法分别制备了分子量为20～30KD、30～43KD和43～67KD的OMP抗原组分,并将起用于免疫攻毒试验,结果表明,OMP铝佐剂疫苗对鸡的死亡保护率为89.4%,油乳剂疫苗组为97.5%,OMP中起主要保护作用的是分子量为30～43KD组分的蛋白质。

关键词：鸡沙门氏菌外膜蛋白免疫效果

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人胰岛素原基因转染绵羊成纤维细胞及细胞株的建立

引用

中国畜牧杂志 2004年第1期40卷 8-10页

作者：王红梅刘明军黄俊成郭志勤张富春新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830046 新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830010

从动物耳皮肤组织采样 ,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养 ,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到 10 0 %。根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5 %的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化 ,... 详细信息

从动物耳皮肤组织采样 ,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养 ,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到 10 0 %。根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5 %的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化 ,可将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。通过脂质体介导 ,以BLG -hINS(含乳球蛋白调控基因的人胰岛素原基因 )基因作为目的基因、GFP(绿色荧光蛋白 )基因作为标记基因共转染绵羊成纤维细胞 ,经G - 4 18筛选后 ,得到转染细胞。对转染的细胞分别用单细胞显微操作法和有限稀释法进行细胞克隆 ,两种方法均可得到克隆细胞。选形态正常、生长均匀的 5个细胞克隆进行PCR检测 ,结果 5个克隆均转有GFP基因 ,其中两个转有BLG -hINS基因。高代培养细胞、转染细胞和克隆细胞经核型分析后 ,染色体数目均为 2 7对 ,表明绵羊耳的成纤维细胞建立细胞株后 ,可以作为外源基因转染的有效供体细胞。

关键词：人胰岛素原基因转染绵羊成纤维细胞细胞株

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移植方法和培养液对显微注射生产转基因小鼠的影响

引用

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2003年第2期31卷 6-8页

作者：史洪才玛依拉黄俊成刘明军李建华郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000 甘肃农业大学动物科技学院甘肃兰州730000

研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 %... 详细信息

研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 % (P<0 .0 5 ) ,差异显著。用 M2和改良的 M2培养液作为显微注射及移植工作液 ,体外培养的囊胚率分别为 17%和 35 % (P<0 .0 1) ,差异极显著 ,体内发育的情况也与这一结果相似 ,妊娠率分别为 35 .9%和 6 2 .5 % (P<0 .0 5 )。表明改良的 M2培养液的成分结构更适合小鼠胚胎发育的要求。

关键词：转基因小鼠显微注射移植方法培养液动物模型

来源：评论

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细胞因子对绵羊体外受精胚胎发育的影响

引用

畜牧兽医学报 2002年第4期33卷 344-348页

作者：雷蕾张富春张家新钟喆张大铭郭志勤新疆大学生物系新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室乌鲁木齐830000

绵羊卵巢采自乌鲁木齐市屠宰场 ,卵母细胞体外成熟 2 4～ 2 5h后 ,由体外获能的附睾精子授精 ,5 0h后 ,将卵裂至 2 - 8细胞的绵羊胚胎移入添加了不同浓度细胞因子的培养液中继续培养 ,结果表明 ,加入 5、10、15 μg/ml胰岛素 (Insulin)... 详细信息

绵羊卵巢采自乌鲁木齐市屠宰场 ,卵母细胞体外成熟 2 4～ 2 5h后 ,由体外获能的附睾精子授精 ,5 0h后 ,将卵裂至 2 - 8细胞的绵羊胚胎移入添加了不同浓度细胞因子的培养液中继续培养 ,结果表明 ,加入 5、10、15 μg/ml胰岛素 (Insulin)分别得到 17 46 %、2 3 81%、2 2 95 %的囊胚率 ,与对照组 9 5 2 %相比差异显著 (P <0 0 5 )。高浓度(5 0 0 μg/ml)的粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (Granulocyte -macrophagecolonystimulatingfactor,GM -CSF)可获得2 1 82 %的囊胚率 ,与对照组 7 2 7%相比差异显著 (P <0 0 5 )。胚胎培养液中分别加入 10、10 0、5 0 0ng/ml的白细胞介素 - 3(Interleukin - 3,IL - 3)、白细胞介素 - 8(IL - 8)和神经生长因子 (Nucleargrowthfactor,NGF)与对照组相比 ,囊胚率差异不显著。本研究表明 ,胰岛素、GM -CSF对绵羊体外受精胚胎早期发育有促进作用 ,IL - 3、IL -8、NGF对绵羊胚胎的早期发育无明显作用。

关键词：细胞因子绵羊体外受精胚胎发育

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显微注射生产转人胰岛素原基因奶山羊

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中国兽医学报 2001年第3期21卷 242-254页

作者：黄俊成张健李文蓉刘明军武坚郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

将构建的绵羊β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因奶山羊。同期化超排处理供体奶山羊 1 5只 ,排卵 2 62枚 ,回收卵 2 2 1枚 ,移植 2 0 6枚注射卵 ,移植受体 68只 ,怀孕2 1只 (妊娠率 3 3 % ,其... 详细信息

将构建的绵羊β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因奶山羊。同期化超排处理供体奶山羊 1 5只 ,排卵 2 62枚 ,回收卵 2 2 1枚 ,移植 2 0 6枚注射卵 ,移植受体 68只 ,怀孕2 1只 (妊娠率 3 3 % ,其中成年母羊妊娠率为 58.62 % ,周岁母羊为 9.4 % ) ,产羔 3 3只 ,其中母羔 8只 ,公羔 2 5只。经 PCR检测及酶切分析 ,证明有 5只为阳性 ,阳性整合率为 1 5.1 5% ,但

关键词：显微注射人胰岛素原基因转基因奶山羊乳腺生物反应器

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制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法

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中国兽医学报 2001年第1期21卷 47-48页

作者：成进谷文喜沙依然古丽依米提李文蓉新疆畜牧科学院兽医研究所新疆乌鲁木齐830000 新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用 MM培养基和改良 MM培养基进行了对比试验 ,并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示 ,改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度 ( D)... 详细信息

采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用 MM培养基和改良 MM培养基进行了对比试验 ,并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示 ,改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度 ( D)值明显高于 MM培养基 ;连续通气搅拌培养和通气搅拌培养的方法明显优于静止培养方法。

关键词：鸡大肠杆菌灭活疫苗培养方法培养基

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通过显微注射生产转基因小鼠的研究

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草食家畜 2001年第S2期 168-173页

作者：黄俊成杨梅史洪才新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

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乳汁蛋白质基因的遗传工程研究进展

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草食家畜 2001年第S2期 51-56页

作者：刘明军新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

利用动物转基因技术可以改变家畜乳汁蛋白质的组成。目前这方面的研究主要集中在通过乳汁表达生产异原蛋白质及多肽类药物。如果胚胎干细胞技术或基因打靶技术能够成功用于家畜的遗传修饰和改造 ,今后不仅可以通过产乳家畜乳腺生产高价... 详细信息

利用动物转基因技术可以改变家畜乳汁蛋白质的组成。目前这方面的研究主要集中在通过乳汁表达生产异原蛋白质及多肽类药物。如果胚胎干细胞技术或基因打靶技术能够成功用于家畜的遗传修饰和改造 ,今后不仅可以通过产乳家畜乳腺生产高价值的医用蛋白质 ,而且可以通过遗传工程手段对内源性的乳汁蛋白质进行加工、改造 ,进一步加强和提高乳汁的营养价值和生物学功能。

关键词：乳汁遗传修饰转基因乳腺生物反应器家畜

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人胰岛素原乳腺表达基因构建及其在转基因小鼠乳汁中的表达

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草食家畜 2001年第S2期 179-185页

作者：刘明军武坚李文蓉黄俊成杨冬梅玛依拉郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

从绵羊和人的基因组中用PCR扩增分别克隆了羊乳球蛋白 (BLG) 5’和 3’调控区及人胰岛素原 (hINS)基因组DNA ,并以此为基础构建了人胰岛素原乳腺表达载体 ( pSh -BLG -hINS)。该表达载体包括 4.2kbBLG 5’调控区和 2 .1kbBLG 3’调控区 ... 详细信息

从绵羊和人的基因组中用PCR扩增分别克隆了羊乳球蛋白 (BLG) 5’和 3’调控区及人胰岛素原 (hINS)基因组DNA ,并以此为基础构建了人胰岛素原乳腺表达载体 ( pSh -BLG -hINS)。该表达载体包括 4.2kbBLG 5’调控区和 2 .1kbBLG 3’调控区 ,以及 1 .2kb人胰岛素原基因组DNA。将绿色荧光蛋白基因与BLG 5’和 3’调控区融合后转化乳腺细胞系 (TD47) ,通过荧光显微镜观察和紫外吸收检测 ,证明GFP在TD47乳腺细胞系中获得了表达。用BLG -hINS基因分别注射小鼠 ,通过PCR和限制性内切酶检测分析 ,共获得 5只转基因小鼠。经放免 (RIA)检测 ,两只转基因母鼠乳汁中人胰岛素原的表达量分别为 37.44和 39.99mg/L。该结果表明 ,本文所构建的 pBLG乳腺表达结构。

关键词：人胰岛素原羊乳球蛋白转基因乳腺表达

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建立高效的转基因动物鉴定技术体系

引用

草食家畜 2001年第S2期 45-50页

作者：李文蓉武坚刘明军黄俊成杨冬梅郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PC... 详细信息

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便。

关键词：转基因动物鉴定 PCR 酶切

来源：评论

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