检索结果-内蒙古大学图书馆

草食家畜 2001年第S2期 45-50页

作者：李文蓉武坚刘明军黄俊成杨冬梅郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PC... 详细信息

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便。

关键词：转基因动物鉴定 PCR 酶切

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生物活性因子对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育的影响

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草食家畜 2001年第S2期 131-135页

作者：施巧婷黄俊成杨梅王立虎李辉玛依拉郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性... 详细信息

免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性因子。结果表明ICP在浓度为 50 0ng/ml时对卵母细胞成熟有抑制作用 ,对胚胎发育无明显作用 ;EGF( 50ng/ml)

关键词：牛卵母细胞胚胎免疫活性肽表皮生长因子

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人胰岛素原基因的PCR扩增、克隆和鉴定

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草食家畜 2001年第S2期 174-178页

作者：李文蓉刘明军武坚杨冬梅郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

根据已知的人胰岛素原基因序列设计引物 ,用PCR直接从人基因组DNA中获得天然的人胰岛素原基因 ,并将其克隆到 pUC1 8载体中 ,通过内切酶图谱及序列分析 ,证实所获得的人胰岛素原基因与已报道的序列完全一致。对于已知序列的基因克隆 ,PC... 详细信息

根据已知的人胰岛素原基因序列设计引物 ,用PCR直接从人基因组DNA中获得天然的人胰岛素原基因 ,并将其克隆到 pUC1 8载体中 ,通过内切酶图谱及序列分析 ,证实所获得的人胰岛素原基因与已报道的序列完全一致。对于已知序列的基因克隆 ,PCR扩增法操作简捷。

关键词：人胰岛素原基因 PCR克隆序列分析

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山羊的超排处理及影响因素的研究

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草食家畜 2001年第S2期 107-109页

作者：黄俊成史洪才杨梅武坚杨冬梅郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000

本试验比较了FSH的剂量、供体羊的年龄与经产情况、不同季节及环境条件对奶山羊超数排卵效果的影响。从统计分析可以看出 ,不同批号的FSH超数排卵用的剂量不完全相同 ,并且同一批号的FSH剂量在其一定的剂量范围内变化时 ,对本地山羊和... 详细信息

本试验比较了FSH的剂量、供体羊的年龄与经产情况、不同季节及环境条件对奶山羊超数排卵效果的影响。从统计分析可以看出 ,不同批号的FSH超数排卵用的剂量不完全相同 ,并且同一批号的FSH剂量在其一定的剂量范围内变化时 ,对本地山羊和奶山羊的超数排卵效果影响不显著 (P >0 .0 5) ;经产羊做供体的超排效果明显好于青年羊 (P <0 .0 5) ;在供体羊体况良好的情况下 ,经合适的同期化及超排处理 ,春季山羊的超排效果并不比秋季差 ;塔城本地山羊与奶山羊在呼图壁的超数排卵效果无明显差异 (P >0 .0 5) ,而与奶山羊在塔城的超数排卵效果有显著差异 (P <0 .0 5) ,并且 ,同一批奶山羊在塔城地区种羊场和在呼图壁种牛场分别进行超数排卵处理 ,结果排卵效果有极显著的差异 (P <0 .0 1 ) ,这主要是由于塔城地区 1 0月份气温比呼图壁的气温偏低。

关键词：山羊超数排卵 FSH 年龄季节环境气候

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利用动物耳皮肤组织培养成纤维细胞的研究

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草食家畜 2001年第S2期 210-214页

作者：王红梅黄俊成刘明军王立虎计巧灵郭志勤新疆大学生物系新疆乌鲁木齐830046 新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000 中国农业大学动物科技学院北京100094

对采集的动物耳部皮肤样品采用将组织块剪碎后直接贴附于细胞培养瓶底部培养的方法与酶消化法对动物体细胞进行原代培养 ,前者使得对不同品种绵羊、山羊、牛、北山羊的原代体细胞出现率及可传代率均达到 1 0 0 %。两种培养方法在成纤维... 详细信息

对采集的动物耳部皮肤样品采用将组织块剪碎后直接贴附于细胞培养瓶底部培养的方法与酶消化法对动物体细胞进行原代培养 ,前者使得对不同品种绵羊、山羊、牛、北山羊的原代体细胞出现率及可传代率均达到 1 0 0 %。两种培养方法在成纤维细胞出现及可进行传代时间上有所差别。对于在体细胞传代培养中出现的上皮样细胞与成纤维样细胞混合生长的问题根据两者贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5%的胰酶—EDTA对其进行不同时间的消化 ,将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。纯化的体细胞经数次传代培养后进行冷冻—解冻后仍具有正常的传代能力。对不同代次绵羊和牛的体细胞进行的核型分析表明 ,在体外培养至 2 0～ 30代 (绵羊胎儿细胞培养至 45代 )

关键词：皮肤细胞系体外培养

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三种不同激活方法对牛卵母细胞孤雌激活效果的研究

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草食家畜 2001年第S2期 203-205页

作者：杨梅黄俊成王立虎李辉郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室新疆乌鲁木齐830000 中国农业大学动物科学技术学院北京100094 新疆石河子大学农学院新疆石河子832000

本试验以体外成熟培养 (IVM ) 2 2～ 2 4h的牛卵母细胞为对象 ,采用以下 3种激活方法 :①电激活 ( 2次直流脉冲 ,时间 30us,强度 1 .8KV/cm ,时间间隔 70us) +环己酰胺 +细胞松弛素B法 ;②电激活 (同上 ) +离子霉素 + 6 -DMAP(二甲基 -... 详细信息

本试验以体外成熟培养 (IVM ) 2 2～ 2 4h的牛卵母细胞为对象 ,采用以下 3种激活方法 :①电激活 ( 2次直流脉冲 ,时间 30us,强度 1 .8KV/cm ,时间间隔 70us) +环己酰胺 +细胞松弛素B法 ;②电激活 (同上 ) +离子霉素 + 6 -DMAP(二甲基 -氨基嘌呤 )法 ;③ 7%乙醇 +环己酰胺直接激活的方法对体外成熟牛卵母细胞进行孤雌激活实验 ,观察激活后 48h卵母细胞的早期分裂情况。结果表明 ,方法①的卵母细胞分裂率为 31 .32 % ( 2 6 /83) ;方法②的分裂率为 2 7.5% ( 32 /1 1 6 ) ;方法③的分裂率为44.1 1 % ( 45/1 0 2 ) ,与前两种方法相比差异显著 ( p <0 .0 5)。

关键词：牛卵母细胞孤雌激活

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不同成熟时间对牛卵母细胞发育及去核效率的影响

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草食家畜 2001年第2期 1-3页

作者：施巧婷黄俊成杨梅张家新王力虎李辉郭志勤新疆大学生物系乌鲁木齐830046 新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室乌鲁木齐830000 中国农业大学北京100094 新疆石河子大学动科系石河子832000

本文研究了不同成熟时间对牛卵母细胞的体外成熟、体外受精及后期的体外培养的影响和不同成熟时间的极体出现率。结果表明 ,牛卵母细胞在成熟 16h时极体出现率达 69.3%、分裂率为 54.7%、囊胚率仅为 6.2 5% ;而成熟 2 4h时极体出现率达 ... 详细信息

本文研究了不同成熟时间对牛卵母细胞的体外成熟、体外受精及后期的体外培养的影响和不同成熟时间的极体出现率。结果表明 ,牛卵母细胞在成熟 16h时极体出现率达 69.3%、分裂率为 54.7%、囊胚率仅为 6.2 5% ;而成熟 2 4h时极体出现率达 76.9%、分裂率为 70 .0 %、囊胚率为2 7.7% ,差异均显著 (P <0 .0 5)。成熟 16h的卵母细胞刚刚排出第一极体 ,细胞核与极体非常近 ,此时去核率较高 ;而成熟 2

关键词：牛卵母细胞体外成熟第一极体细胞发育去核效率成熟时间

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不同融合条件及激活方法对体细胞克隆绵羊胚胎发育的影响

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天津师范大学学报（自然科学版） 2001年第2期21卷 63-66页

作者：王立虎黄俊成杨梅张家新施巧婷李辉王红梅郭志勤中国农业大学动物科学技术学院北京100094 新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室乌鲁木齐830000 新疆大学生物系乌鲁木齐830046 石河子大学农学院新疆石河子832000

对成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代 .将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MII期去核卵母细胞中进行核移植胚胎的生产 .用细胞松弛素B法与离子霉素 + 6 DMAP法对核移植胚胎 (重构胚 )在电融合后进行化学激活 ,... 详细信息

对成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代 .将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MII期去核卵母细胞中进行核移植胚胎的生产 .用细胞松弛素B法与离子霉素 + 6 DMAP法对核移植胚胎 (重构胚 )在电融合后进行化学激活 ,然后在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下 ,进行体外培养 (IVC) .重构胚卵裂率分别为 37.8%与 43.8% ( 51 /1 35与 81 /1 85) ,囊 /桑葚胚率分别为 9.8%和 1 2 .3% ( 5/51和 1 0 /81 ) .在融合电压 1 .5kV/cm、持续时间 30μs、脉冲次数为 2次的条件下 ,孤雌激活胚胎的卵裂率和囊 /桑葚胚率分别为 81 .0 %和1 2 .9% .

关键词：绵羊体细胞核移植克隆激活融合条件胚胎发育

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绵羊体细胞核移植实验研究

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草食家畜 2001年第2期 17-19页

作者：王立虎黄俊成杨梅张家新施巧婷李辉王红梅郭志勤中国农业大学动物科技学院北京100094 新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室乌鲁木齐830000 新疆大学生物系乌鲁木齐830046 石河子大学农学院动科系石河子832000

用成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代。将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MⅡ期去核卵母细胞中 ,重构胚经电融合与化学激活后 ,在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下进行体外培养 (IVC)。用细胞松驰素B法与... 详细信息

用成年绵羊耳部皮肤细胞进行培养传代。将培养出的成纤维细胞经血清饥饿法处理后 ,作为核供体移植到MⅡ期去核卵母细胞中 ,重构胚经电融合与化学激活后 ,在 38.6℃、5%CO2 、最大相对湿度条件下进行体外培养 (IVC)。用细胞松驰素B法与离子霉素 +6-DMAP法在电融合后进行化学激活。重构胚卵裂率分别为 37.8%与 4 3.8% ( 51/135与 81/185) ,囊 /桑堪胚率分别为9.8%和 12 .3% ( 5/51和 10 /81)。在融合电压 1.5Kv/cm、持续时间 30us、脉冲次数为 2次的条件下 ,孤雌激活胚胎的卵裂率和囊 /桑堪胚率分别为 81.0 %和 12 .9%。

关键词：绵羊体细胞核移植克隆电融合化学激活方法

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人胰岛素原基因在转基因小鼠乳汁中的表达

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西北农业大学学报 2000年第4期28卷 65-68页

作者：黄俊成史洪才李文蓉武坚杨冬梅郭志勤新疆畜牧科学院农业部畜牧兽医生物技术重点开放实验室乌鲁木齐830000

将构建的绵羊 β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因小鼠。共移植 888枚注射 BLG-胰岛素原基因的小鼠卵 ,移植受体 31只 ,怀孕 1 4只 ,产仔 53只。PCR检测 51只 ,有 5只为阳性 ,并均为雌性 ,其中 ... 详细信息

将构建的绵羊 β-乳球蛋白基因 ( BLG)调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因小鼠。共移植 888枚注射 BLG-胰岛素原基因的小鼠卵 ,移植受体 31只 ,怀孕 1 4只 ,产仔 53只。PCR检测 51只 ,有 5只为阳性 ,并均为雌性 ,其中 2只小鼠泌乳 ,经放免检测小鼠乳汁中人胰岛素原的质量浓度分别为 37.44mg/L和 39.99mg/L。另外 3只异常消瘦而不孕 ,其中

关键词：人胰岛素原基因转基因小鼠基因表达乳汁糖尿

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