检索结果-内蒙古大学图书馆

汕头大学医学院学报 2024年第4期37卷 193-199页

作者：辜竹萌陈怡妹林贵祥黄欣愉贾佳鄢占魁高分飞汕头大学医学院广东汕头515041 汕头大学医学院第二附属医院药学部广东汕头515041 汕头大学医学院药理学教研室广东汕头515041

目的:探讨慈丹胶囊治疗原发性肝癌的关键成分与作用靶点。方法:借助网络药理学相关数据库和分析平台(HERB、OMIM、Cytoscape等)预测慈丹胶囊治疗原发性肝癌的潜在靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,进行GO和KEGG富集分析,采用Autodoc... 详细信息

目的:探讨慈丹胶囊治疗原发性肝癌的关键成分与作用靶点。方法:借助网络药理学相关数据库和分析平台(HERB、OMIM、Cytoscape等)预测慈丹胶囊治疗原发性肝癌的潜在靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,进行GO和KEGG富集分析,采用Autodock软件进行分子对接,预测关键成分与作用靶点。进一步通过细胞增殖、细胞划痕、RT-qPCR等实验验证预测结果。结果:经网络药理学分析,筛选得到慈丹胶囊-原发性肝癌共同靶点32个,慈丹胶囊中发挥作用的主要核心成分为芹菜素、山豆根碱、槲皮素和山奈酚。分子对接结果表明慈丹胶囊对原发性肝癌有治疗作用的关键成分为芹菜素,靶点为CTNNB1蛋白,两者结合能为-1.537 kcal/mol。CCK-8细胞增殖和细胞划痕实验表明芹菜素对HepG2细胞增殖和迁移具有抑制作用,RT-qPCR实验表明芹菜素对HepG2细胞中CTNNB1基因的表达具有抑制作用。结论:慈丹胶囊治疗原发性肝癌的关键成分可能是芹菜素,作用靶点为CTNNB1蛋白;芹菜素能抑制HepG2细胞的增殖、迁移和CTNNB1基因的表达。

关键词：慈丹胶囊原发性肝癌网络药理学芹菜素 CTNNB1

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细胞分裂周期相关基因8表达水平与肿瘤发展及预后关系的研究进展

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中国医药导报 2023年第33期20卷 43-47页

作者：张涵强顾汇权陈茜花杨绍胤陈能刘嫱海南医学院第二临床学院海南海口571199 海南医学院药学院海南海口571199 海南医学院药理学教研室海南海口571199

细胞分裂周期相关基因8(CDCA8)表达水平异常可影响多种信号通路,尤其是对于多种癌症的发生及发展过程起到增殖促进作用,相关机制主要包括影响细胞分裂周期、作为PI3K和p53等信号通路的共性调控因子加速癌症发生与发展、影响趋化因子细... 详细信息

细胞分裂周期相关基因8(CDCA8)表达水平异常可影响多种信号通路,尤其是对于多种癌症的发生及发展过程起到增殖促进作用,相关机制主要包括影响细胞分裂周期、作为PI3K和p53等信号通路的共性调控因子加速癌症发生与发展、影响趋化因子细胞通路等。同时,CDCA8表达水平与肿瘤预后存在关联。本文综述了CDCA8与膀胱癌、女性生殖系统肿瘤、前列腺癌等疾病发生及发展的关系、作用机制及CDCA8与肿瘤不良预后、病理分期等的关系,为多种肿瘤的治疗和预后预测提供新思路。

关键词：细胞分裂周期相关基因8 恶性肿瘤作用机制预后评估

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Metrnl表达降低促进结直肠癌发生和发展

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海军军医大学学报 2023年第2期44卷 222-225页

作者：罗亨宇王霞于恩达朱良亮杨旌鸿侯顺李志勇缪朝玉海军军医大学(第二军医大学)药学系药理学教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)第一附属医院肛肠外科上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院学员队上海200433

目的探讨镍纹样蛋白(Metrnl)与结直肠癌的关系及其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法利用人体组织芯片分析结直肠癌和癌旁组织中Metrnl的表达与分布(n=30)。收集临床结直肠癌组织和正常人的结直肠组织样本各15例,利用q PCR检测Metrnl ... 详细信息

目的探讨镍纹样蛋白(Metrnl)与结直肠癌的关系及其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法利用人体组织芯片分析结直肠癌和癌旁组织中Metrnl的表达与分布(n=30)。收集临床结直肠癌组织和正常人的结直肠组织样本各15例,利用q PCR检测Metrnl mRNA的表达水平。在细胞实验中,通过慢病毒介导sh RNA干扰技术敲减人克隆结肠腺癌细胞系Caco-2细胞中Metrnl表达(Metrnl shRNA组),对照为无关序列(Scr shRNA组),利用CCK-8、caspase 3活性检测试剂盒、膜联蛋白Ⅴ-FITC/PI流式细胞术凋亡检测试剂盒探究细胞在5-氟尿嘧啶作用下的存活和凋亡情况。结果结直肠癌组织中Metrnl蛋白质表达水平高于癌旁组织(P<0.0001),但结直肠癌组织中Metrnl mRNA的相对表达水平低于正常结直肠组织(0.09±0.02 vs 0.22±0.06,P<0.05)。敲减Metrnl可抑制5-氟尿嘧啶诱导的细胞活力降低(P<0.05)。Metrnl shRNA组Caco-2细胞中caspase 3相对活性、凋亡细胞比例均低于Scr sh RNA组[1.04±0.27 vs 1.67±0.44、(12.53±6.69)%vs(26.56±10.89)%,P均<0.05]。结论在结直肠癌中,分泌蛋白Metrnl在局部癌组织中蓄积,但Metrnl转录降低可能促进了结直肠癌的发生、发展。

关键词：结直肠肿瘤镍纹样蛋白分泌蛋白质类 Caco-2细胞

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骆驼蓬总碱通过诱导细胞自噬促进Tau蛋白和α-突触核蛋白的降解

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中华神经医学杂志 2021年第11期20卷 1081-1091页

作者：雷秀英伊力亚斯·艾萨张瑜陈倩冯学召西仁阿依·西热甫米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院药理学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院生物学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学药学院生药学教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院乌鲁木齐830011

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL ... 详细信息

目的:探讨骆驼蓬总碱(TAH)能否诱导神经细胞自噬并促进神经毒性蛋白Tau蛋白和α-突触核蛋白(α-Syn)的降解。方法:(1)将体外培养的PC12细胞分为空白对照组及1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH组,分别加入0、1、2.5、5、10、20、50μg/mL TAH作用24 h,观察细胞形态及数目的变化,采用MTT法检测细胞存活率;(2)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬激活剂雷帕霉素及1、2.5、5、10、20μg/mL TAH作用4 h,采用免疫荧光染色检测细胞自噬体数;(3)将PC12细胞分为空白对照组、雷帕霉素组、10μg/mL TAH组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L雷帕霉素、10μg/mL TAH作用4 h,Western blotting检测细胞p62和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白的表达;(4)将PC12细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L自噬抑制剂氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用4 h,Western blotting检测细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达;(5)将PC12细胞分为TAH组和空白对照组,分别加入10μg/mL TAH和等量溶剂处理4 h后,Western blotting检测细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)的表达;(6)将过表达Tau-绿色荧光蛋白(GFP)的Tet on HEK293细胞分为空白对照组、TAH组、强力霉素组、强力霉素+TAH组、强力霉素+TAH+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、强力霉素+TAH+氯喹组,后4组细胞加入200 ng/mL强力霉素处理24 h后,空白对照组加入等量溶剂,TAH组加入10μg/mL TAH,后3组细胞分别加入10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+5 mmol/L 3-MA、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹,作用24 h后在激光共聚焦显微镜下观察细胞绿色荧光强度的变化,Western blotting检测细胞Tau-GFP和LC3-Ⅱ蛋白的表达;(7)将稳定表达α-Syn的HEK293细胞分为空白对照组、氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组,分别加入等量溶剂、50 nmol/L氯喹、10μg/mL TAH、10μg/mL TAH+50 nmol/L氯喹作用24 h,Western blotting检测细胞α-Syn和LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果:(1)与空白对照组比较,20、50μg/mL TAH组细胞存活率降低,且50μg/mL TAH组细胞存活率低于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)与空白对照组比较,雷帕霉素组、10、20μg/mL TAH组细胞自噬体数增多,且10μg/mL TAH组细胞自噬体数多于20μg/mL TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05),因此,选择10μg/mL TAH用于后续实验;(3)与空白对照组比较,雷帕霉素组、TAH组细胞p62蛋白的表达均降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,差异均有统计学意义(P<0.05);(4)与空白对照组比较,氯喹组、TAH组、TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达均增加,且TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,差异均有统计学意义(P<0.05);(5)与空白对照组比较,TAH组细胞p-mTOR、p-p70S6K的表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);(6)强力霉素组细胞Tau-GFP蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素组降低,强力霉素+TAH+3-MA组、强力霉素+TAH+氯喹组细胞Tau-GFP蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较空白对照组增加,强力霉素+TAH组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素组增加,强力霉素+TAH+3-MA组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组降低,强力霉素+TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达较强力霉素+TAH组增高,差异均有统计学意义(P<0.05);(7)与空白对照组比较,TAH组HEK293细胞α-Syn蛋白的表达降低,LC3-Ⅱ蛋白的表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05);TAH+氯喹组细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达高于氯喹组,TAH+氯喹组细胞α-Syn蛋白的表达高于TAH组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TAH可能通过抑制mTOR/p70S6K信号通路激活神经细胞

关键词：骆驼蓬总碱细胞自噬 Tau蛋白 α-突触核蛋白

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基于网络药理学探究骆驼刺治疗脓毒症的作用机制及实验验证

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世界科学技术-中医药现代化 2023年第9期25卷 3024-3036页

作者：邹炙臻邓喜玲王云来张杰董江涛柳小玲梁粟王菊张辉吴江东章乐吴芳张万江石河子大学医学院病理生理学教研室/《新疆地方与民族高发病》教育部重点实验室石河子832002 石河子大学药学院药学系/《新疆植物药资源利用》教育部重点实验室石河子832002 浙江大学医学院附属第二医院杭州310000 石河子大学医学院第一附属医院石河子832003

目的采用网络药理学和分子对接技术及分子动力学技术,研究骆驼刺治疗脓毒症作用机制,并进行动物实验验证。方法首先筛选骆驼刺有效成分及其作用靶点,同时筛选治疗脓毒症的相关作用靶点,构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行拓扑学分析,... 详细信息

目的采用网络药理学和分子对接技术及分子动力学技术,研究骆驼刺治疗脓毒症作用机制,并进行动物实验验证。方法首先筛选骆驼刺有效成分及其作用靶点,同时筛选治疗脓毒症的相关作用靶点,构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行拓扑学分析,绘制中药-疾病-靶点网络图。其次对网络图中核心靶点进行京都基因与基因组百科全书富集分析,同时进行基因本体功能富集分析;接着对核心靶点进行分子对接和分子动力学模拟实验验证。最后采用小鼠进行动物实验验证。结果筛选出骆驼刺活性成分30个,度值排名前5为(-)-儿茶素酸酯、金雀异黄酮、山奈酚、槲皮素、表没食子儿茶素,作用靶点196个;脓毒症疾病相关靶点2144个,骆驼刺-脓毒症交集靶点105个,核心靶点为TNF、IL-6、AKT1、VEGFA、CASP3、IL-1β等。涉及PI3K-Akt、TNF、HIF-1、AGE-RAGE、IL-17等信号通路,介导炎症反应、细胞凋亡等生物过程,发挥对脓毒症的治疗作用。分子对接结果显示,骆驼刺黄酮类化合物与各关键靶点结合性能均良好,其中结合能最低最稳定的构象为(-)-epigallocatechin gallate-IL-6和quercetin-IL-6,对两对复合物进行分子动力学模拟,结果表明,通过静电、范德华势能和氢键的共同作用,可以达到稳定结合的效果。动物实验证实骆驼刺可抑制脓毒症小鼠肺组织内PI3K/Akt信号通路的激活,降低Caspase-3、VEGF蛋白表达,减少外周血炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,减轻组织及脏器炎性损伤。结论骆驼刺对脓毒症的治疗作用是通过多生物过程、多靶点、多通路来实现的。本研究为骆驼刺的临床应用以及脓毒症治疗提供了一定的理论依据。

关键词：骆驼刺脓毒症网络药理学分子对接分子动力学作用机制

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香草酸通过诱导自噬缓解HepG2细胞脂肪变性

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中国临床药理学杂志 2021年第19期37卷 2622-2626页

作者：陈倩伊力亚斯·艾萨雷秀英张瑜冯学召西仁阿依·西热甫米娜新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆医科大学药学院药理学教研室新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆医科大学基础医学院病理与病理生物学教研室新疆医科大学药学院生药学教研室新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院

目的研究自噬在香草酸（VA）缓解肝细胞脂肪变性中的作用。方法将HepG2细胞分为空白组（不含药物的完全培养基）、阳性对照组(50 nmol·L-1西罗莫司)和低、中、高剂量实验组(25,50,100μmol·L-1VA),作用时间12 h。用蛋白质印... 详细信息

目的研究自噬在香草酸（VA）缓解肝细胞脂肪变性中的作用。方法将HepG2细胞分为空白组（不含药物的完全培养基）、阳性对照组(50 nmol·L-1西罗莫司)和低、中、高剂量实验组(25,50,100μmol·L-1VA),作用时间12 h。用蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3B（LC3Ⅱ）和泛素结合蛋白P62（P62）表达水平的变化,探究VA诱导自噬的作用。用VA单独或联合100 nmol·L-1巴弗洛霉素A1（BafA1）处理Hep G2细胞12 h,实验分为空白组（不含药物的完全培养基）、对照A组(100 nmol·L-1BafA1)、对照B组(50μmol·L-1VA)和实验组(50μmol·L-1VA+100 nmol·L-1Baf A1)。用蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ蛋白表达水平的变化,探究VA对自噬流的影响。用VA单独或联合3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预棕榈酸（PA）诱导的HepG2细胞脂肪变性模型,将细胞分为空白组（不含药物的完全培养基）、模型组(100μmol·L-1PA)、对照组(100μmol·L-1PA+50μmol·L-1VA)和实验组(100μmol·L-1PA+50μmol·L-1VA+5 mmol·L-13-MA),作用时间24 h。用比色法检测细胞内三酰甘油（TG）的含量,用蛋白质印迹法检测脂滴包被蛋白3（Perilipin3）表达水平的变化。结果在探究VA诱导自噬的研究中,空白组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组的LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.53±0.08,0.93±0.31,0.89±0.22,0.96±0.24和0.92±0.14,P62蛋白相对表达量分别为1.47±0.16,0.96±0.17,1.07±0.06,0.76±0.07和0.63±0.12;空白组的上述指标与中、高剂量实验组比较,差异均有统计学意义（均P <0.05）。在探究VA对自噬流的影响中,空白组、对照A组、对照B组和实验组LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.40±0.12,0.87±0.14,0.67±0.07和1.13±0.11;实验组与对照A组、对照B组的上述指标和空白组比较,差异均有统计学意义（均P <0.05）。在脂肪变性模型中,空白组、模型组、对照组和实验组细胞中TG相对含量分别为0.70±0.16,1.34±0.11,1.07±0.03和1.33±0.14,Perilipin3蛋白相对表达量分别为0.61±0.14,1.24±0.19,0.72±0.03和1.03±0.21;模型组的上述指标与空白组和对照组比较,或实验组的上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义（均P <0.05）。结论香草酸通过诱导自噬,从而缓解PA诱导的HepG2细胞脂肪变性。

关键词：香草酸棕榈酸脂肪变性细胞自噬

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黑骨藤追风活络胶囊调节mPGES-1改善胶原诱导性关节炎的作用研究

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医学信息 2024年第20期37卷 57-61页

作者：罗进芳何吉乐岚何康黄勇其姚血明黄聪贵州中医药大学基础医学院药理学教研室贵州省高等学校中药(民族药)药性与效应研究重点实验室贵州中医药大学药学院贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科

目的研究黑骨藤追风活络胶囊（HZC）调节mPGES-1干预类风湿关节炎的作用机制。方法随机选取24只SD大鼠并分为正常组、模型组、HZC组、甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）组，造模成功后对大鼠进行灌胃给药，除正常组外，其余三组采用牛Ⅱ... 详细信息

目的研究黑骨藤追风活络胶囊（HZC）调节mPGES-1干预类风湿关节炎的作用机制。方法随机选取24只SD大鼠并分为正常组、模型组、HZC组、甲氨蝶呤（methotrexate, MTX）组，造模成功后对大鼠进行灌胃给药，除正常组外，其余三组采用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂混合乳化剂构建胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）模型，大鼠分别给予生理盐水、MTX和HZC灌胃，共给药21 d。比较各组足肿胀、脾指数、微粒体前列腺素E2合酶-1(microsomal prostaglandin E synthase 1,mPGES-1)的表达情况。结果与正常组大鼠比较，模型组大鼠足肿胀程度明显且伴随着关节变形肿大，HZC组和MTX组大鼠未见明显足肿胀和关节变形。模型组给药第14、21天足肿胀厚度高于正常组，差异有统计学意义（P<0.05），而HZC组和MTX组给药后第14、21天足肿胀厚度低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。模型组脾指数高于正常组、HZC组、MTX组，差异有统计学意义（P<0.05）；与正常组比较，模型组大鼠关节滑膜组织m PGES-1蛋白表达上升（P<0.05），而与模型组比较，HZC组和MTX组mPGES-1蛋白表达下调（P<0.05）。结论 HZC能通过干预m PGES-1的表达情况而改善CIA大鼠的炎症反应，起到治疗作用。

关键词：黑骨藤追风活络胶囊胶原诱导性关节炎 mPGES-1

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地拉罗司治疗地中海贫血铁过载的快速卫生技术评估

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中国药房 2022年第1期33卷 90-95页

作者：王君萍张梅汪国玉吴正宇周鹏张家佳宁丽娟高杉中国科学院合肥肿瘤医院药学中心合肥230031 安徽省第二人民医院药学部合肥230001 中国科学技术大学附属第一医院(安徽省立医院)药剂科合肥230001 安徽医科大学基础医学院药理学教研室合肥230032

目的采用快速卫生技术评估的方法评价地拉罗司治疗地中海贫血铁过载的有效性、安全性和经济性,为临床合理用药提供循证依据。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、NHS EED、CADTH、中国知网、万方数据库等中英文数据库/网... 详细信息

目的采用快速卫生技术评估的方法评价地拉罗司治疗地中海贫血铁过载的有效性、安全性和经济性,为临床合理用药提供循证依据。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、NHS EED、CADTH、中国知网、万方数据库等中英文数据库/网站,收集地拉罗司对比去铁胺/去铁酮治疗地中海贫血铁过载的卫生技术评估(HTA)、系统评价/Meta分析和药物经济学研究,检索时限均为建库/建站起至2021年6月。在筛选文献、提取资料的基础上,分别采用HTA checklist、系统性评价方法学质量评估表、经济评价报告标准量表评价纳入HTA报告、系统评价/Meta分析和药物经济学研究的文献质量,并对有效性、安全性结果进行定量描述,对经济学评价结果进行定性描述。结果从1569篇文献中筛选纳入1篇HTA报告、5篇系统评价/Meta分析和5篇药物经济学研究。纳入HTA报告、系统评价/Meta分析、药物经济学研究的质量等级均较高。多数研究报道,30 mg/(kg·d)地拉罗司降低血清铁蛋白水平、肝脏铁过载水平的效果优于去铁胺;地拉罗司组患者的不良反应多为轻度胃肠道刺激症状、皮肤瘙痒、关节痛、转氨酶升高等,一般不影响后续治疗;去铁胺组与地拉罗司组患者严重不良反应比较,差异无统计学意义[RR=0.96,95%CI(0.85,1.08),P=0.52];与去铁胺比较,地拉罗司的成本-效益较高;而与去铁酮相比,地拉罗司不太可能具有成本-效益。结论地拉罗司治疗地中海贫血铁过载具有良好的有效性和安全性;与去铁胺相比,地拉罗司在伊朗、英国等国家有良好的经济学优势。

关键词：地拉罗司地中海贫血铁过载快速卫生技术评估

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基于网络药理学探究黄诺玛苷对非酒精性脂肪肝的降脂作用

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第三军医大学学报 2021年第5期43卷 383-394页

作者：魏晓丽郭艳丽张永威冉峥兰怡王丽凤毛新民新疆医科大学药学院药理学教研室中亚高发病成因与防治国家重点实验室和自治区中西医结合高峰学科乌鲁木齐830000 新疆医科大学第四附属医院干部二科乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院生理学教研室乌鲁木齐830000 新疆医科大学中医学院乌鲁木齐830000

目的利用网络药理学探索黄诺玛苷抗非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用靶点和信号通路,研究黄诺玛苷治疗NAFLD的作用机理。方法(1)在Swiss Target Prediction数据库中检索黄诺玛苷活性靶点,DisGeNET数据... 详细信息

目的利用网络药理学探索黄诺玛苷抗非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用靶点和信号通路,研究黄诺玛苷治疗NAFLD的作用机理。方法(1)在Swiss Target Prediction数据库中检索黄诺玛苷活性靶点,DisGeNET数据库中搜索疾病靶点,通过化合物靶点与疾病靶点作Venn分析得到黄诺玛苷调节NAFLD脂代谢的预测靶点。借助Biso Genet软件构建蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络图,利用Metascape数据库对核心靶点进行GO功能富集与KEGG通路富集分析,用Cytoscape软件绘制"靶点-通路"网络图。(2)采用db/db小鼠模型进行体内实验验证,30只雄性db/db小鼠按随机数字表法分为3组:db/m组(正常)、db/db模型组、db/db+黄诺玛苷组(50 mg/kg)。给药12周后处死,取小鼠肝脏,检测肝脏TG、GSH、GSSG含量,HE和油红O染色观察肝脏病理学变化,qRT-PCR和Western blot检测小鼠肝脏脂代谢的关键mRNA及蛋白的表达水平。(3)HepG2细胞在游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs,油酸∶棕榈酸=2∶1)干预成模后,分为正常组、FFAs处理组(500μmol/L)、FFAs+黄诺玛苷低中高浓度组(25、50、100μmol/L),作用24 h。油红O染色检测HepG2细胞内TG的含量。qRT-PCR和Western blot检测HepG2细胞脂代谢的关键mRNA及蛋白的表达水平。结果(1)通过Venn分析,得到黄诺玛苷对接NAFLD的29个核心靶点,主要包括过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、血管内皮生长因子(VEGF)和丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)等。GO功能富集了6个分子功能、20个生物过程、5个细胞组分。KEGG富集的关键信号通路有40条,主要包括AMPK脂代谢通路、胰岛素抵抗(IR)通路、细胞凋亡通路等。(2)动物实验结果表明,黄诺玛苷能降低db/db模型组TG水平(P<0.05),提高GSH/GSSG比例(P<0.05)。HE和油红O染色显示黄诺玛苷可逆转肝细胞的肿大,减少肝细胞内的脂滴浸润。qRT-PCR结果表明黄诺玛苷可以降低脂质合成基因ACC1、SCD1、FASN mRNA的表达(P<0.05),增强β-氧化基因ACOX-1、CPT1αmRNA的表达(P<0.05)。Western blot结果显示,与db/db模型组相比,db/db+黄诺玛苷组SREBP、FASN蛋白水平显著降低(P<0.05),PPARγ、PPARα蛋白水平显著升高(P<0.05)。(3)体外细胞实验表明,黄诺玛苷可以降低HepG2细胞的TG含量(P<0.05),降低脂质合成基因SREBP、SCD1、ACC1的表达,提高CPT1α、ACOX-1 mRNA水平(P<0.05)。在蛋白水平,黄诺玛苷可以显著降低SREBP、FASN的表达(P<0.05)。结论黄诺玛苷可能通过调节PPARγ/SREBP/FASN信号通路改善氧化应激,增强脂肪酸β-氧化并减少脂质合成,对NAFLD发挥治疗作用。

关键词：黄诺玛苷网络药理学非酒精性脂肪肝病 PPARγ/SREBP/FASN信号通路降脂

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利用CRISPR/Cas9系统建立叉头框G1基因敲除的人胚胎干细胞系

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第二军医大学学报 2020年第5期41卷 513-519页

作者：袁媛张冠宇孙平新章越凡李铁军李文林安徽中医药大学研究生院药学系合肥230012 海军军医大学(第二军医大学)药学院药理学教研室上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院细胞生物学教研室上海200433

目的采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建叉头框G1(FOXG1)基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个... 详细信息

目的采用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建叉头框G1(FOXG1)基因敲除的人胚胎干细胞系,研究FOXG1基因在人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的作用。方法利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过转染2个向导RNA(gRNA)诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除,经单克隆筛选、测序分析和蛋白质印迹分析验证获得FOXG1基因敲除的人胚胎干细胞;通过细胞免疫荧光染色、qRT-PCR检测FOXG1基因敲除前后细胞在早期神经诱导过程中关键标志物配对框基因6(PAX6)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)和正小齿同源物2(OTX2)的表达。结果利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功获得FOXG1基因大片段缺失的人胚胎干细胞,细胞免疫荧光染色、qRT-PCR结果均显示人胚胎干细胞早期神经诱导过程中的关键标志物PAX6、SOX2和OTX2的表达并未受FOXG1缺失的影响。结论通过2个gRNA共转染可以快捷地诱导人胚胎干细胞FOXG1基因的大片段敲除。FOXG1基因缺失并不影响人胚胎干细胞的早期神经诱导。

关键词： CRISPR/Cas9基因编辑叉头框蛋白G1 基因敲除人胚胎干细胞

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