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广东省医学会第十九次血液病学学术会议

作者：郭理杏李萡张玉平陈少华杨力建李扬秋暨南大学血液病研究所广州市第一人民医院血液科暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学第一附属医院血液科

目的再生障碍性贫血(AA)是骨髓造血功能衰竭而导致全血细胞减少、贫血、出血和感染的一种恶性疾病,AA患者存在T细胞免疫功能,尤其是TCR信号膜表面分子TCRζ表达上调.本研究进一步分析作为T细胞活化的共刺激信号分子CD28和具有负性调控...

目的再生障碍性贫血(AA)是骨髓造血功能衰竭而导致全血细胞减少、贫血、出血和感染的一种恶性疾病,AA患者存在T细胞免疫功能,尤其是TCR信号膜表面分子TCRζ表达上调.本研究进一步分析作为T细胞活化的共刺激信号分子CD28和具有负性调控作用的CTLA4表达情况以明确AA患者中T细胞活化共刺激信号调控机制在AA患者T细胞免疫功能异常中的作用.方法利用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR分别检测18例健康人和88例AA患者外周血单个核细胞中TCRζ,CTLA4,CD28表达.β 2M作为内参,根据相对定量公式(2-ΔCt)计算健康人和AA患者TCRζ,CTLA4和CD28基因表达水平.结果 AA患者外周血单个核细胞中CD28的mRNA的相对表达量(M=0.707)和TCRζ的mRNA的相对表达量(M=1.144)表达量显著高于健康人(M=0.298,P=0.00;M=0.397,P=0.003),而AA患者CTLA4的mRNA的相对表达量(M=0.131)表达量显著低于健康人(M=0.158,P=0.05).AA患者与健康人中,TCRζ与CTLA4,CD28以及CD28与CTLA4均呈显著正相关.结论本研究首次报道AA患者外周血单个核细胞中T细胞活化共刺激信号分子CD28和CTLA4表达情况以及与TCRζ之间的关系.AA患者中T细胞活化共刺激信号分子表达异常,可能与失调的TCR信号共同导致AA患者T细胞免疫功能异常.

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急淋白血病患者PHTF1及相关基因的表达特点

急淋白血病患者PHTF1及相关基因的表达特点

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第十五届全国实验血液学学术会议

作者：黄欣翁建宇耿素霞陆泽生曾令基钟立业万长春李敏明邓程新廖鹏军杜欣吴秀丽李扬秋广东省人民医院血液科广东省医学科学院暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

背景我们的前期研究中,揭示BCL11B基因异常表达与人类T细胞肿瘤发生密切相关.BCL11B-siRNA可以诱导白血病T细胞株发生凋亡,并通过基因表达谱分析发现其作用相关的PHTF1(预测同源域转录因子1)基因上调16倍.PHTF1是近年新发现的一个从果... 详细信息

背景我们的前期研究中,揭示BCL11B基因异常表达与人类T细胞肿瘤发生密切相关.BCL11B-siRNA可以诱导白血病T细胞株发生凋亡,并通过基因表达谱分析发现其作用相关的PHTF1(预测同源域转录因子1)基因上调16倍.PHTF1是近年新发现的一个从果蝇到哺乳类动物高度进化保守的基因,作为核转录因子主要参与转录、调控转录和DNA依赖等生命过程.FEM1b是新近鉴定的PHTF1的靶基因,也是一个促凋亡蛋白,其可以通过与Apaf-1(凋亡蛋白酶激活因子-1)相互作用调控凋亡家族.

关键词：急性淋巴细胞白血病 PHTF1基因 FEM1b基因 Apaf-1基因

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急淋白血病患者PHTF1及相关基因的表达特点

急淋白血病患者PHTF1及相关基因的表达特点

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广东省医学会第十九次血液病学学术会议

作者：黄欣翁建宇耿素霞陆泽生曾令基钟立业万长春李敏明邓程新廖鹏军吴秀丽李扬秋杜欣广东省人民医院血液科广东省医学科学院暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室

背景我们的前期研究中，揭示BCL11B基因异常表达与人类T细胞肿瘤发生密切相关.BCL11B-siRNA可以诱导白血病T细胞株发生凋亡，并通过基因表达谱分析发现其作用相关的PHTF1(预测同源域转录因子1)基因上调16倍.PHTF1是近年新发现的一个从...

背景我们的前期研究中，揭示BCL11B基因异常表达与人类T细胞肿瘤发生密切相关.BCL11B-siRNA可以诱导白血病T细胞株发生凋亡，并通过基因表达谱分析发现其作用相关的PHTF1(预测同源域转录因子1)基因上调16倍.PHTF1是近年新发现的一个从果蝇到哺乳类动物高度进化保守的基因，作为核转录因子主要参与转录、调控转录和DNA依赖等生命过程.FEM1b是新近鉴定的PHTF1的靶基因，也是一个促凋亡蛋白，其可以通过与Apaf-1(凋亡蛋白酶激活因子-1)相互作用调控凋亡家族.

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伊马替尼耐药伴ABI基因突变慢性粒细胞白血病患者TCR Vβ基因谱系及克隆分布特点

伊马替尼耐药伴ABI基因突变慢性粒细胞白血病患者TCR Vβ基因谱系...

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第十五届全国实验血液学学术会议

作者：徐玲赖菁金真伊徐艳陈少华杨力建李扬秋卢育洪陈洁余卫查显丰暨南大学血液病研究所暨南大学第一附属医院血液科广州市第十二人民医院血液科暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学第一附属医院检验科

目的 T细胞受体谱系(TCR repertoire)多样性是T细胞免疫功能完整性的重要反映，其与肿瘤的发生与发展密切相关。通过T细胞谱系检测了解白血病患者的免疫状态对于发展特异性的免疫治疗具有重要作用。本课题组前期已在慢性期慢性粒细胞白... 详细信息

目的 T细胞受体谱系(TCR repertoire)多样性是T细胞免疫功能完整性的重要反映，其与肿瘤的发生与发展密切相关。通过T细胞谱系检测了解白血病患者的免疫状态对于发展特异性的免疫治疗具有重要作用。本课题组前期已在慢性期慢性粒细胞白血病患者(CP-CML) TCR谱系检测中发现了具有特异性抗CML的Vβ21+T细胞克隆，本研究进一步对伴有例伊马替尼耐药ABL基因突变的急变期慢性粒细胞白血病(BC-CML)患者的TCR Vβ基因谱系及克隆分布进行了检测和分析。

关键词： T细胞谱系急变期慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药 ABL基因突变

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伊马替尼耐药伴ABL基因突变慢性粒细胞白血病患者TCRVβ基因谱系及克隆分布特点

伊马替尼耐药伴ABL基因突变慢性粒细胞白血病患者TCRVβ基因谱系...

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第十届全国免疫学学术大会

作者：徐玲卢育洪赖菁余卫金真伊徐艳陈洁查显丰陈少华杨力建李扬秋暨南大学血液病研究所暨南大学第一附属医院血液科广州市第十二人民医院血液科暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学第一附属医院检验科

目的 :T细胞受体谱系(TCR repertoire)多样性是T细胞免疫功能完整性的重要反映,其与肿瘤的发生与发展密切相关。通过T细胞谱系检测了解白血病患者的免疫状态对于发展特异性的免疫治疗具有重要作用。本课题组前期已在慢性期慢性粒细胞白... 详细信息

目的 :T细胞受体谱系(TCR repertoire)多样性是T细胞免疫功能完整性的重要反映,其与肿瘤的发生与发展密切相关。通过T细胞谱系检测了解白血病患者的免疫状态对于发展特异性的免疫治疗具有重要作用。本课题组前期已在慢性期慢性粒细胞白血病患者(CP-CML)TCR谱系检测中发现了具有特异性抗CML的Vβ21+T细胞克隆,本研究进一步对伴有例伊马替尼耐药ABL基因突变的急变期慢性粒细胞白血病(BC-CML)患者的TCR Vβ基因谱系及克隆分布进行了检测和分析。方法 :利用RT-PCR扩增4例BC-CML患者外周或骨髓血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果 :4例BC-CML患者TCR Vβ谱系均呈现出明显的限制性表达和克隆复杂性下降。每个样本中均可检测到克隆性表达的TCR Vβ亚家族(4-8个不等)。在3例伴不同ABL突变的急淋样变CML(LBC-CML)患者中均可检测到一个CDR3区大小为139bp的Vβ9克隆的优势增殖,而该克隆在仅有的一例急髓变CML(MBCCML)患者样本中并未检测到。结论 :TCR Vβ亚家族的限制性表达和克隆复杂性降低反映了BC-CML患者伴有严重的T细胞免疫缺陷,与此同时,克隆性增殖的T细胞亚家族的存在则反映出针对肿瘤抗原产的特异性免疫反应的存在。克隆性增殖的Vβ9(139bp)克隆则可能是识别LBC-CML患者肿瘤相关抗原的特异性反应性T细胞克隆。

关键词：慢性粒细胞白血病 T细胞 T细胞受体

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命运分子cNumb在原肠期胚胎的表达及其生物信息学分析

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广东药学院学报 2015年第3期31卷 383-387页

作者：顾取良陈佳园王广徐涛郐一贺杨雪松王丽京广东药学院基础学院广东广州510006 广东药学院血管生物学研究所广东广州510006 暨南大学医学院组织与胚胎学教研室/再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的探讨命运分子c Numb在原肠期胚胎中的表达情况及其基因和编码蛋白的基本生物学特征。方法利用原位杂交技术检测c Numb基因在原肠期鸡胚中的表达情况,同时应用生物学软件和在线平台对c Numb基因及其编码蛋白进行生物信息学分析。结果... 详细信息

目的探讨命运分子c Numb在原肠期胚胎中的表达情况及其基因和编码蛋白的基本生物学特征。方法利用原位杂交技术检测c Numb基因在原肠期鸡胚中的表达情况,同时应用生物学软件和在线平台对c Numb基因及其编码蛋白进行生物信息学分析。结果 c Numb mRNA在鸡胚4期开始表达于原条顶端,随发育过程逐渐扩展至亨氏节、头突和神经管,但表达区域仍相对集中。Numb基因在不同物种中具有较高保守性,c Numb编码的蛋白属于胞内蛋白,包含磷酸酪氨酸相互作用结构域和多个潜在磷酸化位点,可参与调节多种细胞生物学过程。结论通过生物信息学分析获得了c Numb基因及其蛋白的生物学特征,为进一步研究Numb在胚胎神经发育中的调控机制奠定了基础。

关键词： Numb 胚胎发育生物信息学分析

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再生障碍性贫血患者中T细胞活化共刺激信号分子表达特点

再生障碍性贫血患者中T细胞活化共刺激信号分子表达特点

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第十五届全国实验血液学学术会议

作者：郭理杏李萡吴秀丽张玉平李扬秋暨南大学血液病研究所广州市第一人民医院血液科暨南大学血液病研究所再生医学教育部重点实验室第一附属医院血液科

目的再生障碍性贫血(AA)是骨髓造血功能衰竭而导致全血细胞减少、贫血、出血和感染的一种恶性疾病,AA患者存在T细胞免疫功能,尤其是TCR信号膜表面分子TCRζ表达上调.本研究进一步分析作为T细胞活化的共刺激信号分子CD28和具有负性调控... 详细信息

目的再生障碍性贫血(AA)是骨髓造血功能衰竭而导致全血细胞减少、贫血、出血和感染的一种恶性疾病,AA患者存在T细胞免疫功能,尤其是TCR信号膜表面分子TCRζ表达上调.本研究进一步分析作为T细胞活化的共刺激信号分子CD28和具有负性调控作用的CTLA4表达情况以明确AA患者中T细胞活化共刺激信号调控机制在AA患者T细胞免疫功能异常中的作用.方法利用SYBR Green I实时荧光定量PCR分别检测18例健康人和88例AA患者外周血单个核细胞中TCRζ,CTLA4,CD28表达.β 2M作为内参,根据相对定量公式(2-△Ct)计算健康人和AA患者TCRζ,CTLA4和CD28基因表达水平.结果 AA患者外周血单个核细胞中CD28的mRNA的相对表达量(M=0.707)和TCRζ的mRNA的相对表达量(M=1.144)表达量显著高于健康人(M=0.298,P=0.00;M=0.397,P=0.003),而AA患者CTLA4的mRNA的相对表达量(M=0.131)表达量显著低于健康人(M=0.158,P=0.05).AA患者与健康人中,TCRζ与CTLA4,CD28以及CD28与CTLA4均呈显著正相关.结论本研究首次报道AA患者外周血单个核细胞中T细胞活化共刺激信号分子CD28和CTLA4表达情况以及与TCR ζ之间的关系.AA患者中T细胞活化共刺激信号分子表达异常,可能与失调的TCR信号共同导致AA患者T细胞免疫功能异常.

关键词：再生障碍性贫血 T细胞 CD28 CTLA4

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下调PPP2R5C表达后HL60和Jurkat细胞增殖相关调控基因表达谱影响比较分析

下调PPP2R5C表达后HL60和Jurkat细胞增殖相关调控基因表达谱影响...

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广东省医学会第十九次血液病学学术会议

作者：刘思初陈宇黄欣沈琦陈少华杨力建钟隽张涛李扬秋暨南大学血液病研究所广东省医学科学院广东省人民医院医学研究中心暨南大学血液病研究所广东省医学科学院广东省人民医院医学研究中心暨南大学再生医学教育部重点实验室广东省医学科学院广东省人民医院医学研究中心暨南大学血液病研究所暨南大学附属第一医院血液科暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学附属第一医院血液科

目的前期研究提示靶向抑制PPP2R5C基因表达,可显著抑制Jurkat细胞增殖,而HL60细胞增殖抑制作用不明显。为了解PPP2R5C在2种细胞中的调控特点,本研究进一步利用基因芯片技术,对靶向抑制PPP2R5C表达后的HL60细胞及Jurkat细胞中与增殖有...

目的前期研究提示靶向抑制PPP2R5C基因表达,可显著抑制Jurkat细胞增殖,而HL60细胞增殖抑制作用不明显。为了解PPP2R5C在2种细胞中的调控特点,本研究进一步利用基因芯片技术,对靶向抑制PPP2R5C表达后的HL60细胞及Jurkat细胞中与增殖有关的信号通路相关基因进行分析。方法本研究利用核转染技术将PPP2R5C-siRNA799转导至HL60细胞、Jurkat细胞中,选择抑制PPP2R5C效果最佳的样品提取细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3'IVT杂交,以Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片扫描仪扫描后进行差异表达谱分析。

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慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力

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南方医科大学学报 2014年第9期34卷 1359-1364页

作者：廉滋珍曹佐武陈冉陈雷薛樱子秦俊文齐绪峰张春雪禹艳红暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系广东广州510632 暨南大学附属第一医院麻醉科广东广州510632

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表... 详细信息

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。

关键词： RNA干扰附睾特异表达蛋白 meClps 慢病毒精子运动

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Transwell 接触共培养促进单散iPSCs 生长及分化

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中国病理生理杂志 2014年第8期30卷 1404-1409页

作者：刘庆郭永龙郭晓令连瑞玲陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 医学院眼科研究所广东广州510632

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accu... 详细信息

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accutase消化及40μm过滤处理获得单散iPSCs，将其接种到已有CECs的Transwell小室内共培养14 d，前3 d使用mTeSR1培养基，第4天开始用含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基。分别进行实时荧光定量聚合酶链式反应（ real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ， qPCR ）、免疫荧光、死活细胞染色及碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase ， ALP）染色，对iPSCs多能特性表达及分化进行鉴定。设定单散iPSCs共培养组为实验组，常规培养iPSCs组为对照组（一），非共培养单散iPSCs组为对照组（二）。结果：培养牛CECs形态呈典型的六边形铺路石样外观。人iPSCs呈克隆样生长，共培养3 d后iPSCs贴壁呈单散细胞生长，免疫荧光检测未分化标志Nanog和Oct4呈阳性。 qPCR检测Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达，实验组与对照组（一）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。死活细胞染色显示，实验组死细胞明显减少，与对照组（二）比较差异有统计学意义（P＜0.01）。共培养14 d后，人iPSCs形态比较均一，呈多边形，体积增大，无明显克隆团块；ALP染色阴性；免疫荧光染色ZO-1、AQP1和CD31表达阳性，CD34和CD133表达阴性。 qPCR检测Oct4、Nanog和Sox2 mRNA表达明显下调，与对照组（一）比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：与牛CECs共培养可增强人单散iPSCs活性，使iPSCs形态上向内皮样细胞转化，表达部分CECs的标志。 Transwell接触共培养模型可以促进单散iPSCs生长及分化。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞 Transwell接触共培养

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