检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 296-299页

作者：蒋引娣卢育洪陈少华朱康儿张学利郁志钟隽张涛罗更新陈洁潘焕玉李琰秦恋岸李扬秋暨南大学附属第一医院血液科医学院血液病研究所再生医学教育部重点实验室广东广州510632

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5... 详细信息

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5型10例,M6型1例),11例AML化疗后完全缓解患者和20例非肿瘤性血液病患者骨髓单个核细胞的eIF4E表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算eIF4E基因表达水平。结果表明:AML未治疗及未缓解/复发组患者骨髓细胞eIF4E表达水平(7.098±5.544)%明显高于非肿瘤患者(0.248±0.163)%(P<0.01)和化疗后完全缓解患者(0.964±0.312)%(P<0.01),各AML亚型之间不存在统计学差异,尽管M4、M5亚型的表达水平相对较高。非白血病患者与缓解患者比较,eIF4E表达水平不存在显著性差异。结论:eIF4E基因在急性髓系白血病细胞中出现高表达,并随着疾病的缓解而明显降低,因此eIF4E有可能作为监测白血病进展的一项参数。

关键词： eIF4E基因实时定量PCR 急性髓系白血病

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房水培养对牛角膜内皮细胞生长的影响

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中华实验眼科杂志 2013年第2期31卷 127-131页

作者：李善义戴应谭美华丁勇钟敬祥陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院眼科研究所广州510632 暨南大学附属第一医院眼科广州510630

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经... 详细信息

背景组织工程角膜内皮层的构建需要有活性的角膜内皮细胞（CECs），因此如何在体外培养出大量有生理功能的角膜内皮种子细胞是迫切需要解决的问题。目的观察房水对体外培养的牛CECs生长的影响。方法从新鲜牛眼球前房抽取1．2ml房水，经消毒过滤后取上清备用。从牛眼角膜组织分离牛CECs并用含质量分数10％胎牛血清的低糖DMEM培养液进行培养传代。分别在培养液中加入不同体积的房水，使房水终体积分数分别为2．5％、5．O％、10．O％、15．O％、20．O％，对照组不加房水，利用细胞计数试剂盒-8（CCK_8）比色法检测各组细胞在450nm处的吸光度（A。，。）值。流式细胞仪分析10．O％房水培养对CECs细胞周期的影响。待培养细胞融合成单层后，1ml塑料枪头尖端在培养皿底划痕并用含10％胎牛血清的DMEM培养液中加入10．O％房水培养24h，未加入房水的培养液作为对照组，检测细胞单层的愈合情况。将细胞以6xlO’个／ml密度接种到培养皿中，分别用含10．0％房水的培养液和无房水的培养液孵育5d，利用DAPI荧光染色技术分析细胞密度。结果培养的CECs呈六角形、铺路石样的扁平状。CCK-8比色法检测表明，各培养组细胞的A450值总体比较差异有统计学意义（F=4．051，P=0．007）；与对照组比较，各房水培养组细胞的A450值均明显高于对照组，以含10．0％房水培养组CECs的A450值最高，差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞术分析表明，10．0％房水孵育24h后，处于S-G2期的细胞比例为（34．80±3．13）％，对照组为（23．06±1．13）％，差异有统计学意义（t=-5．729，P=0．005）。划痕愈合分析检测表明，10．0％房水组的细胞单层划痕面积为（0．116±0．019）mm2，对照组为（0．358±0．049）mm2，差异有统计学意义（t=13．842，P=0．000）。DAPI荧光染色结果显示，10．0％房水组的平均细胞密度为（1439±110）个／视野，大于对照组的（1162±45）个／视野，差异有统计学意义（t=-11．020，P=0．000）。结论房水作用于培养的牛CECs后可促进CECs的生长，10．0％房水对培养的CECs有促进角膜细胞增生的作用。

关键词：房水角膜内皮细胞增生细胞培养

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CdSe／ZnS核壳结构量子点用于人诱导多能干细胞标记的研究

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中华实验眼科杂志 2013年第9期31卷 819-822页

作者：谭美华陈建苏陈剑吴静招志毅戴应李善义暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广州510632 再生医学教育部重点实验室

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的... 详细信息

背景近年来，诱导多能干细胞（iPSCs）的多向分化特性为各种临床疾病的细胞替代治疗提供了新的种子来源，在眼科领域，iPSCs已成为人眼变性类疾病发病机制研究的良好模型，而更好的iPSCs识别和鉴定技术是对其体内生物学特性进行研究的基础。目的探讨量子点标记人iPSCs的可行性及其最佳浓度，并观察量子点标记人iPSCs的光稳定性，为iPSCs应用于眼部细胞移植的实验研究和临床研究提供一种新的示踪技术。方法用无饲养层细胞培养法培养和扩增脐带间充质基质细胞一人iPSCs系，并用免疫荧光法对其干细胞特性进行鉴定；选取不同浓度CdSe／ZnS核壳结构的量子点对扩增培养的iPSCs进行标记，用三维去卷积实时活细胞成像系统观察标记效果。将量子点标记后的iPSCs继续培养，分别于1次传代后1周和2次传代后1周观察荧光标记的稳定性。结果倒置显微镜下观察可见培养和扩增的iPSCs呈克隆样生长，免疫荧光检测显示iPSCs中OCT4和Nanog两种干细胞标志蛋白均阳性表达。5．0、7．5、10．0nmol／L三种浓度的量子点标记后均可见iPSCs中的橘红色荧光，随着量子点浓度的增加，iPSCs中标记的橘红色颗粒明显增加，10．0nmol／L量子点标记后iPSCs中的橘红色荧光最强，荧光颗粒最多。iPSCs2次传代1周后仍可观察到量子点的橘红色荧光，但与传代前和1次传代后1周相比荧光强度减弱。结论量子点标记技术可示踪iPSCs，其荧光标记效果呈浓度依赖性。本研究实验条件下量子点标记的荧光至少可维持2周。

关键词：量子点标志物诱导多能干细胞示踪

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多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞c-Cbl和Cbl-b基因表达下调

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第8期29卷 842-845页

作者：方苏郭翔宇冷秀秀李萡牛宇哲陈少华杨力建李扬秋暨南大学血液病研究所广东广州510632 第四军医大学学员七队陕西西安710032 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的研究多发性骨髓瘤（MM）患者外周血单个核细胞（PBMC）中c-Cbl和Cbl-b基因表达情况。方法收集23例MM患者和22例健康人PBMC, 利用SYBR-Green 实时荧光定量PCR方法检测MM患者和健康人PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因相对表达水平; 利用RT-PC... 详细信息

目的研究多发性骨髓瘤（MM）患者外周血单个核细胞（PBMC）中c-Cbl和Cbl-b基因表达情况。方法收集23例MM患者和22例健康人PBMC, 利用SYBR-Green 实时荧光定量PCR方法检测MM患者和健康人PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因相对表达水平; 利用RT-PCR方法分别扩增MM患者和健康人c-Cbl基因第7-10外显子, 并对PCR产物进行序列分析。结果MM组c-Cbl表达水平（中位数0.798%）, 与健康对照组c-Cbl表达水平（中位数2.443%）相比, 显著降低（P〈0.05）; Cbl-b表达水平（中位数0.714%）与健康对照组Cbl-b表达水平（中位数2.179%）比较, 也显著降低（P〈0.05﹚。在2例MM患者中检测到c-Cbl基因第7-10外显子存在2个大小不同的片段： 483 bp和148 bp, 分别为野生型c-Cbl和删除突变的c-Cbl基因, 所有PCR产物测序后均未发现突变。结论 MM患者PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因表达下调。

关键词：多发性骨髓瘤 c-Cbl Cbl-b 荧光定量PCR RT-PCR

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血管紧张素转化酶抑制剂对表皮干细胞增殖、分化、迁移的影响

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中华实验外科杂志 2013年第8期30卷 1626-1630页

作者：肖静刘宏伟程飚肖丽玲徐媛李升红暨南大学附属第一医院整形外科再生医学教育部重点实验室广州510630 广州军区广州总医院整形外科

目的观察血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂卡托普利对表皮干细胞（ESCs）增殖、迁移、分化的影响，探讨ACE在维持ESCs生物学功能中的作用。方法利用差速贴壁法获得10例儿童的ESCs，进行离体培养，检测ACE在ESCs的表达。用XTT法检测不同浓... 详细信息

目的观察血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂卡托普利对表皮干细胞（ESCs）增殖、迁移、分化的影响，探讨ACE在维持ESCs生物学功能中的作用。方法利用差速贴壁法获得10例儿童的ESCs，进行离体培养，检测ACE在ESCs的表达。用XTT法检测不同浓度（1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7、1×10^-8mol／L）ACEI卡托普利对ESCs增殖的影响；体外创伤模型观察1×10^-6 mol／L的卡托普利对ESCs6、12、18、24h各时间段的迁移能力；流式细胞仪检测K10的表达观察1×10^-6 moL／L的卡托普利对ESCs分化的影响。结果培养的细胞经β1-整合素和K19免疫荧光双重标记染色，83．55％细胞为双标记阳性细胞，即ESCs。免疫荧光染色和逆转录．聚合酶链反应（RT—PCFt）结果显示ESCs表达ACE。流式细胞仪定量检测培养的细胞ACE阳性率为74．2％。1×10^-6 mol／L的卡托普利可明显抑制ESCs的增殖（P〈0．05），且在第5天达到峰值。1×10^-6 mol／L的卡托普利可明显抑制细胞的迁移能力（P〈0．05）和克隆能力（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果表明，1×10^-6 moL／L的卡托普利并不影响K10的表达（P〉0．05）。结论ACE通过影响ESCs的增殖，迁移从而影响皮肤的损伤修复和自我更新。

关键词：表皮干细胞血管紧张素转化酶增殖迁移分化

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MALT1基因2种转录本在正常人和B细胞白血病患者中的表达特点

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中国病理生理杂志 2013年第6期29卷 1124-1128,1132页

作者：王旭张帆徐艳吴秀丽陈少华杨力建李萡卢育洪李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性... 详细信息

目的:比较正常人和B细胞白血病患者外周血中黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1(MALT1)2种异构体的分布和表达差异。方法:根据MALT1基因的结构特点,设计2对引物,通过建立2种转录本的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析8例B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、8例B细胞慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)和8例正常人的外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1的表达情况。实时定量PCR分析各组样本的MALT1 mRNA表达水平。结果:所有样本中均能得到所预期的PCR产物,其中第1对引物可以扩增出2条片段,分别为MALT1转录本1(包含第5、6、7、8、9外显子)和MALT1转录本2(包含第5、6、8、9外显子),第2对引物只能扩增出1条包含转录本1的片段,所有PCR产物均通过核苷酸序列分析证实。MALT1 2种转录本均在外周血中有表达,并且MALT1转录本2表达水平高于转录本1。通过灰度分析发现,在B-ALL中,MALT1转录本1的灰度与正常人相比显著增高(P<0.05),而MALT1转录本2显著降低(P<0.05);在B-CLL中,MALT1 2种转录本的灰度与正常人相比无显著差异(P>0.05)。此外,B-ALL中,MALT1 mRNA表达水平(中位数:1.253)低于正常人(中位数:1.976)(P=0.05);而B-CLL中,MALT1 mRNA的表达水平与正常人相比无显著差异(P>0.05)。结论:MALT1 2种转录本均表达于正常和B细胞白血病样本中,但B-ALL中两者的表达水平有所差异,同时,B-ALL的MALT1 mRNA表达水平也有所降低。B-ALL中MALT1基因表达的异常可能影响MALT1信号通路而与疾病的发生发展相关。

关键词：黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤转位基因1 转录本白血病 B细胞基因表达

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髓性白血病的免疫调节和细胞免疫治疗研究进展

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2013年第6期34卷 571-576页

作者：李扬秋陈少华査显丰暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510630 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学暨南大学附属第一医院临床检验中心广东广州510630

T细胞免疫状态与白血病病人抗白血病效应息息相关,在髓性白血病中,随着病情进展T细胞功能抑制更为明显。近年来,对于不同疾病不同阶段以及同种异型造血干细胞移植后复发病人,已形成了一些免疫治疗的新措施。本文主要介绍新近一些针对髓... 详细信息

T细胞免疫状态与白血病病人抗白血病效应息息相关,在髓性白血病中,随着病情进展T细胞功能抑制更为明显。近年来,对于不同疾病不同阶段以及同种异型造血干细胞移植后复发病人,已形成了一些免疫治疗的新措施。本文主要介绍新近一些针对髓性白血病的特异免疫治疗包括过继性细胞免疫治疗以及可能的免疫调节治疗的研究进展。

关键词：急性髓性白血病慢性粒细胞性白血病细胞毒T细胞免疫抑制免疫治疗

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MALT1-A20-NF-κB信号分子在MM中的表达特点

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2013年第4期34卷 373-377页

作者：王旭徐玲张帆徐艳吴秀丽杨力建陈少华李萡卢育洪李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的:了解多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中黏膜相关组织淋巴瘤异位基因1(MALT1)、A20与核转录因子κB(NF-κB)基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR和相对定量分析法检测20例MM患者(Ⅰ期7例,Ⅱ期3例,Ⅲ期10例)及21例健... 详细信息

目的:了解多发性骨髓瘤(MM)患者外周血中黏膜相关组织淋巴瘤异位基因1(MALT1)、A20与核转录因子κB(NF-κB)基因的表达特点。方法:采用SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR和相对定量分析法检测20例MM患者(Ⅰ期7例,Ⅱ期3例,Ⅲ期10例)及21例健康人外周血单个核细胞(PBMC)中MALT1、A20和NF-κB基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2m)作为内参;采用相对定量公式:α^(-△Ct)×100%,分别计算MALT1、A20和NF-κB基因的表达水平。结果:MM患者PBMC中的MALT1和A20基因的表达水平较健康人都有明显的降低(P=0.000),而MM中NF-κB基因的表达水平较正常人有所升高,但无统计学差异(P>0.05)。在健康人组,MALT1和NF-κB的表达水平呈现正相关(P=0.001,r=0.666),而在MM组,MALT1、A20与NF-κB 3种基因均不存在明显相关性。同时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者MALT1基因的表达量较健康人明显降低(P<0.05),A20基因的表达量较健康人明显降低(P<0.01),而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期MM患者MALT1、A20和NF-κB之间的表达情况均无统计学差异。结论:当MALT1-A20介导的细胞免疫和炎症的信号通路发生异常改变时,可能与MM的发生发展有着密切关系。

关键词：多发性骨髓瘤多发性骨髓瘤(MM) 黏膜相关组织淋巴瘤异位基因1(MALT1) A20 NF-κB 基因表达

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组织工程角膜内皮层移植的研究与应用

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中国组织工程研究 2013年第2期17卷 363-368页

作者：李善义陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究所广东省广州市510632 暨南大学附属第一医院眼科广东省广州市510632

背景:组织工程角膜内皮可以克服角膜内皮移植的短缺并能够改善角膜内皮细胞的质量,其应用前景十分广阔。因此,寻找一种理想的重建角膜内皮方法是组织工程角膜研究领域的重要课题和研究热点。目的:总结并讨论组织工程角膜内皮重建的研究... 详细信息

背景:组织工程角膜内皮可以克服角膜内皮移植的短缺并能够改善角膜内皮细胞的质量,其应用前景十分广阔。因此,寻找一种理想的重建角膜内皮方法是组织工程角膜研究领域的重要课题和研究热点。目的:总结并讨论组织工程角膜内皮重建的研究进展。方法:应用计算机检索PubMed数据库(http://***/PubMed)相关文章,检索时间为2000至2012年,检索词为"corneal endothelial cell,transplantation,tissue engineering",并限定文章语言种类为英语,然后再从中筛选出与主题相关的部分文献。结果与结论:初检得到163篇文章,按主题相关性对文献进一步筛选,最终纳入44篇文章。目前构建单层角膜内皮层的研究较多,也取得了巨大的成绩,但是仍没有一种材料或重建方式可以完全符合临床应用的组织工程的人角膜内皮。每一种材料和方法都各有优缺点,克服这些缺点以及观察在体内的长期影响是今后的发展方向。

关键词：组织构建组织构建学术探讨角膜内皮细胞载体动物模型角膜内皮层移植组织工程国家自然科学基金

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PML-RARα245与hGM-CSF双基因DNA疫苗的构建与表达

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江苏医药 2013年第8期39卷 878-881,F0002页

作者：胡刚周羽竝岑东芝杨力建陈少华李扬秋惠东县人民医院内二科广东省516300 暨南大学医学院血液病研究所暨南大学医学院生化教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,... 详细信息

目的采用长度为245bp的急性早幼粒细胞白血病PML-RARα融合基因片段构建新的PML-RARα与hGM-CSF真核双表达载体。方法用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增长度为245bp的PML-RARα基因片段,PCR技术从pORF-hGM-CSF质粒中扩增出hGM-CSF基因,分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点A和B中,构建真核双表达载体。用酶切和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将重组质粒转染K562细胞,利用RT-PCR和点杂交技术检测重组质粒在真核细胞中的转录和翻译情况。结果双酶切结果证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARα基因片段及hGM-CSF基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列完全正确。该重组质粒能够在真核细胞中正常转录和翻译。结论成功构建了含有PML-RARα245及hGM-CSF的双表达载体,为筛选合适的抗原片段用于构建治疗急性早幼粒细胞白血病的PML-RARαDNA疫苗提供重要资料。

关键词： PML-RARα融合基因 hGM-CSF基因急性早幼粒细胞白血病 DNA疫苗

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