检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2017年第6期33卷 879-883页

作者：冯沛然黄建芳王敏珍廖伟聪郝代玲向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632 暨南大学转化医学转化研究院国际免疫学中心广州510632

目的:获得能应用于临床诊断以及阻断PD-L1与PD-1结合的抗人PD-L1单克隆抗体。方法:采用重组表达的人PD-L1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术获得稳定分泌抗人PD-L1单抗的阳性细胞株,ELISA方法鉴定抗体的特异性、亲和力、亚型... 详细信息

目的:获得能应用于临床诊断以及阻断PD-L1与PD-1结合的抗人PD-L1单克隆抗体。方法:采用重组表达的人PD-L1蛋白免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术获得稳定分泌抗人PD-L1单抗的阳性细胞株,ELISA方法鉴定抗体的特异性、亲和力、亚型等方面特性;免疫印迹、间接免疫荧光方法对肿瘤细胞进行检测;肿瘤杀伤实验验证抗体阻断活性。结果:共获得2株抗人PD-L1单抗,抗体效价分别为1∶2.56×10~6和1∶3×10~5,亲和力分别为1.5×10~9L/mol和2.5×10~8L/mol,均与PD-L2蛋白无交叉反应。免疫印迹、间接免疫荧光证实抗体有诊断作用。杀伤实验显示抗体有阻断作用。结论:共获得两株稳定分泌高效价、高特异性的抗人PD-L1单抗的杂交瘤细胞株,能作为诊断抗体应用于肿瘤表型检测和预后有效性的评估。抗体的阻断功能可应用于联合CIK细胞免疫治疗。

关键词： PD-L1 单克隆抗体流式细胞术 CIK细胞肿瘤诊断

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小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺中RLH信号通路的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2016年第6期37卷 834-839页

作者：张梦媛颜宇琦秦洪琼王森林施珊珊吴莎江振友暨南大学医学院微生物与免疫学系//广东省分子免疫学与抗体工程重点实验室广东广州510632

【目的】研究小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺组织中RLH信号通路的影响,探讨其抗病毒作用的机制。【方法】以50μL流感病毒FM1株LD50滴鼻感染RIG-I-/-小鼠和正常野生型C57BL/6小鼠,建立小鼠流感模型,分别用小檗碱和奥司他韦治疗。... 详细信息

【目的】研究小檗碱对甲型流感病毒FM1株感染小鼠肺组织中RLH信号通路的影响,探讨其抗病毒作用的机制。【方法】以50μL流感病毒FM1株LD50滴鼻感染RIG-I-/-小鼠和正常野生型C57BL/6小鼠,建立小鼠流感模型,分别用小檗碱和奥司他韦治疗。观察小鼠的生存率以及肺组织炎症损伤状况;RT-q PCR和Western-blot检测正常野生型C57BL/6小鼠RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS的表达。【结果】正常野生型C57BL/6小鼠小檗碱组的生存率为80%,与病毒组50%相比明显提高,其肺组织病变局限,炎症明显减轻。通过RT-q PCR和Western-blot检测到小檗碱可下调正常野生型C57BL/6小鼠RLH信号通路中RIG-I、NF-κB和MAVS的表达。与病毒组相比,RIG-I、NF-κB和MAVS的m RNA表达量分别降低42.28%、33.12%和48.12%,同时,它们的蛋白表达量分别降低17.37%、13.83%和28.91%。【结论】小檗碱对于FM1株引起的小鼠流感具有较好的治疗作用,可通过影响RLH信号传导通路的活化来发挥抗流感病毒作用。

关键词：小檗碱 RLH信号通路流感病毒FM1株炎症反应

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凡纳滨对虾新过敏原烯醇化酶的鉴定

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中国免疫学杂志 2016年第6期32卷 808-811页

作者：谈思怡黄建芳孙一帆郭成斌向军俭(指导) 暨南大学抗体工程研究中心暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室广州510632

目的:鉴定凡纳滨对虾分子量为47 kD过敏原的性质。方法:采用丙酮沉淀法提取凡纳滨对虾总蛋白,通过SDS-PAGE、11例虾过敏患者血清IgE的Western blot分析凡纳滨对虾中过敏原组份,运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(Matrix-Assisted ... 详细信息

目的:鉴定凡纳滨对虾分子量为47 kD过敏原的性质。方法:采用丙酮沉淀法提取凡纳滨对虾总蛋白,通过SDS-PAGE、11例虾过敏患者血清IgE的Western blot分析凡纳滨对虾中过敏原组份,运用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(Matrix-Assisted laser desorption ionization/time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)鉴定凡纳滨对虾47 kD未知过敏原组分。结果:通过SDS-PAGE电泳证明所提取的凡纳滨对虾总蛋白组分完全。Western blot结果显示,凡纳滨对虾至少有14种与阳性血清反应的组分,其中,55%的虾过敏患者Ig E与分子量为47 kD的蛋白分子发生特异性反应,质谱分析结果显示47 kD蛋白为烯醇化酶。结论:烯醇化酶是凡纳滨对虾的一种新的过敏原。

关键词：凡纳滨对虾过敏原烯醇化酶质谱 Western blot

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抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备及应用

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第8期31卷 1115-1119页

作者：杨全利刘诗琴谈思怡邵晨晨黄建芳向军俭暨南大学抗体工程中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测企业重点实验室暨南大学分室广东广州510632

目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;... 详细信息

目的制备高效价、高特异性的抗人肌红蛋白（MYO）单克隆抗体（m Ab）,建立ELISA双抗体夹心法检测人血清中MYO。方法用天然的MYO进行免疫,用杂交瘤技术获得稳定分泌抗人MYO m Ab的细胞株;制备腹水型m Ab,经亲和纯化后进行抗体特性鉴定;确定最佳配对组合并建立双抗体夹心ELISA一步法,对血清样本进行检测,并与进口试剂盒进行比较。结果共筛选出9株能稳定分泌m Ab的细胞株,其中2M1、3M4、5M7、10M4亲和纯化后效价达到（1.0-2.6）×10^6（A450约为1.0时的抗体稀释倍数）。抗体配对共筛选出3对能进行夹心配对的抗体（2M1/HRP-3M4、5M7/HRP-3M4、10M4/HRP-5M7）,其中5M7/HRP-3M4这个配对有较高的灵敏度和较大的线性范围;利用最佳配对组合5M7/HRP-3M4建立标准曲线,其线性范围为（25-1000）ng/m L,优于进口试剂盒的线性范围（25-500）ng/m L;样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为95%（19/20）,阴性检出率为100%（40/40）。结论获得了2株高特异性,高亲和力的抗人MYO m Ab,建立了双抗体夹心ELISA一步法,为ELISA试剂盒的研制奠定了基础。

关键词：人肌红蛋白细胞融合单克隆抗体 ELISA双抗体夹心法

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cTnI-linker-TnC融合蛋白的原核表达及鉴定

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 48-53页

作者：龚隆财罗镇明杨雁青王振宇向军俭王宏暨南大学广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州510632 广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室暨南大学分室广州510632

从PUBMED中查找人心脏cTnI和cTnC的cDNA序列,在两者之间加上15个中性氨基酸残基(G4S)3的linker编码序列,并分别构建原核表达质粒pET32a-cTnI-linker-TnC和pET28a-cTnI-linker-TnC,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导其表达。通过SDS-PAGE电泳和间接ELISA对目的蛋白进行初步鉴定,并优化表达条件以实现目的蛋白的可溶性高表达。用标准抗cTnI单克隆抗体和标准抗cTnC单克隆抗体对目的蛋白进行Western blot鉴定和双抗体夹心ELISA鉴定,同时用八位心肌梗塞患者血清做间接ELISA鉴定。结果表明,cTnI-linker-TnC融合蛋白在表达载体pET32a中实现了可溶性高表达,最佳表达条件为28℃、0.4mmol/L IPTG、诱导表达5h;且融合蛋白具有较好的免疫原性,保存了cTnI和cTnC单体的天然结构,有望成为天然cTnI-TnC复合物的替代物,为下一步制备高特异性的抗cTnI-TnC复合物的单克隆抗体奠定了基础。

关键词： cTnI-linker-TnC 融合蛋白原核表达双抗体夹心ELISA

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直接竞争ELISA检测大米样品中的重金属镉

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免疫学杂志 2015年第6期31卷 528-532页

作者：刘艳梅钟辉黄建芳谈思怡刘诗琴邵晨晨向军俭暨南大学抗体工程研究中心广东省分子免疫与抗体工程重点实验室广州市疾病与食品安全免疫学快速检测重点实验室广州510632

目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米T... 详细信息

目的直接竞争ELISA方法检测大米样品中重金属镉。方法用纳米Ti O2对微波消解处理的大米样品中的重金属镉进行富集,通过比较不同p H值和不同洗脱体积来优化纳米Ti O2富集方法,再用直接竞争ELISA检测重金属镉的含量。结果在p H为9时,纳米Ti O2对重金属镉有良好的吸附性,20 mg/ml的EDTA·2Na可将纳米Ti O2吸附的镉定量洗脱。用纯化后的镉单克隆抗体建立直接竞争ELISA检测方法,并进行灵敏度和特异性分析,其灵敏度（IC50）为19 ng/ml,检测限（IC10）为2.1 ng/ml,检测范围（IC20~IC80）为3.6~98.2 ng/ml。用优化后的直接竞争ELISA对富集洗脱后的镉溶液进行检测,检测效果满足国家检测标准。结论本研究对6份市售大米样品采用微波消解和富集,通过直接竞争ELISA检测其镉含量,所得结果与仪器法测定结果一致,可用于实际样品的快速检测。

关键词：重金属镉单克隆抗体直接竞争ELISA 纳米TiO2富集

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基于FRET的新型莱克多巴胺荧光猝灭试纸条的研究

基于FRET的新型莱克多巴胺荧光猝灭试纸条的研究

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中国化学会第十七届全国有机分析与生物分析学术研讨会

作者：史聪颖梁家杰周克楠付强强向军俭唐勇暨南大学广东省分子免疫学与抗体工程重点实验室暨南大学转化医学研究院

用于小分子检测的免疫竞争胶体金试纸条使用时,高浓度的阳性样品使检测线信号完全消失,且所得检测信号与样品浓度呈负相关,易引起误判。为了克服这个问题,我们在胶体金试纸条的平台上,根据荧光共振能量转移(FRET)的原理,建立了一种新型... 详细信息

用于小分子检测的免疫竞争胶体金试纸条使用时,高浓度的阳性样品使检测线信号完全消失,且所得检测信号与样品浓度呈负相关,易引起误判。为了克服这个问题,我们在胶体金试纸条的平台上,根据荧光共振能量转移(FRET)的原理,建立了一种新型的荧光免标记猝灭试纸条。该方法制备更简便,更易于引起荧光共振能量转移,产生荧光猝灭,可转换检测信号和提高灵敏度。在本研究中,我们以莱克多巴胺为检测目标建立了荧光免标记猝灭试纸条,该试纸条对猪尿中的莱克多巴胺的最低检测限可达到0.31ng/mL,且荧光信号与样品浓度正相关。该方法对比胶体金试纸条有较多的优势,如更灵敏,得到的结果数值与样品浓度呈正相关,可定量等,其设计思路可适用于试纸条平台上的各种小分子检测研究。

关键词：荧光猝灭荧光共振能量转移莱克多巴胺。

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麻痹性贝类毒素GTX2,3模拟表位的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第6期26卷 530-532页

作者：向征刘北一侯晓睿向军俭富宁暨南大学分子免疫学与抗体工程实验室广东广州510632 南方医科大学免疫学教研室广东广州510515

目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心EL... 详细信息

目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心ELISA方法鉴定噬菌体克隆,竞争ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的特异性。对阳性克隆进行DNA测序并推导噬菌体所展示的氨基酸序列。竞争ELISA鉴定模拟GTX2,3表位的合成肽的特异性。结果:经过3轮筛选获得20株能与靶分子高亲和力结合的阳性噬菌体克隆。序列分析表明DXLXPP为保守序列(X为任意氨基酸)。竞争ELISA检测表明,麻痹性贝类毒素GTX2,3可抑制阳性噬菌体克隆phage2与抗GTX2,3mAb结合。根据阳性序列合成的短肽可以抑制phage2与抗GTX2,3mAb的结合(IC50=13μg/mL)。结论:通过噬菌体肽库筛选技术,成功地获得麻痹性贝类毒素GTX2,3的模拟表位,并初步证实以此为基础合成的短肽能够准确和特异的模拟GTX2,3的表位。

关键词：噬菌体展示肽库麻痹性贝类毒素GTX2,3 模拟表位肽

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异基因造血干细胞移植前肿瘤和移植后第二肿瘤中survivin,MMP2,TIMP1,CD44和nm23的表达变化

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南方医科大学学报 2010年第6期30卷 1291-1294页

作者：李慧灵向征赵彤南方医科大学南方医院病理科广东广州510515 暨南大学分子免疫学与抗体工程实验室教研室广东广州510632 广州呼吸疾病研究所暨呼吸疾病国家重点实验室广州医学院第一附属医院广东广州510120

目的探讨在不同免疫状态下发生的移植前肿瘤和移植后第二肿瘤,其肿瘤粘附、扩散及存活相关因子Survivin,MMP2,TIMP1,CD44和nm23的表达变化。方法急性淋巴细胞白血病骨髓标本和异基因造血干细胞移植后发生的淋巴瘤标本均来自于同一个病人... 详细信息

目的探讨在不同免疫状态下发生的移植前肿瘤和移植后第二肿瘤,其肿瘤粘附、扩散及存活相关因子Survivin,MMP2,TIMP1,CD44和nm23的表达变化。方法急性淋巴细胞白血病骨髓标本和异基因造血干细胞移植后发生的淋巴瘤标本均来自于同一个病人,应用免疫组织化学方法对两份肿瘤标本进行了Survivin,MMP2,TIMP1,CD44和nm23的表达差异对比研究。结果移植前患者的白血病骨髓标本细中,Survivin,MMP2,TIMP1,CD44和nm23明显强表达,移植后发生的淋巴瘤标本细胞中的上述分子不表达或极弱表达。结论接受异基因外周造血干细胞移植的患者发生的第二肿瘤,其与恶性肿瘤存活、黏附和转移有关的分子Survivin、MMP2、TIMP1、CD44和nm23的表达均较普通免疫状态下出现表达抑制现象。

关键词：造血干细胞移植移植后淋巴增殖性疾病 survivin MMP2 TIMP1 CD44 nm23

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食物过敏中肥大细胞释放组胺的研究进展

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医学理论与实践 2007年第3期20卷 269-271页

作者：蒋红玲向军俭暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程实验室广州510632

组胺是Ⅰ型变态反应中最重要的炎性介质,深入研究肥大细胞的组胺释放,对食物过敏的防治具有重要的意义。本文介绍食物过敏中肥大细胞组胺释放机制、组胺检测方法及检测组胺的意义等方面的研究进展。

关键词：组胺肥大细胞食物过敏

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