检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2017年第6期33卷 1086-1090页

作者：陈娟林玉壁尹更生李自成陈万群胡娟谭琳琳许少玲郑冬玲潘涌泉暨南大学基础医学院生物化学和分子生物学系广东广州510632 广东省心血管病研究所广东广州510080 暨南大学附属第一医院临床检验中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院心血管内科广东广州510632 暨南大学医学院临床医学专业广东广州510632

目的:通过检测血清血管紧张素转换酶2(ACE2)水平,分析ACE2与冠心病(CHD)不同病程之间的相关性,探讨其在CHD发生发展中的变化规律。方法:选取非CHD对照组样本85例,CHD样本174例,并按照冠状动脉狭窄严重程度分成轻度(<50%)狭窄组(ls-CH... 详细信息

目的:通过检测血清血管紧张素转换酶2(ACE2)水平,分析ACE2与冠心病(CHD)不同病程之间的相关性,探讨其在CHD发生发展中的变化规律。方法:选取非CHD对照组样本85例,CHD样本174例,并按照冠状动脉狭窄严重程度分成轻度(<50%)狭窄组(ls-CHD组)、中度(50%~75%)狭窄组(ms-CHD组)和严重(≥75%)狭窄组(ss-CHD组)。通过ELISA检测所有样本血清中ACE2水平,统计分析CHD不同病程下的ACE2水平,从而探讨血清ACE2水平与CHD发生发展间的关系。结果:ls-CHD、ms-CHD和ss-CHD组血清ACE2水平均高于非CHD组,并且随着冠状动脉狭窄严重程度的加深而上升。男性血清ACE2水平要比女性的高。单一性别内,ls-CHD、ms-CHD和ss-CHD组血清ACE2水平均高于非CHD组,并有显著性差异。回归分析发现性别、糖尿病、CHD与血清ACE2水平相关,并且性别和CHD是血清ACE2水平的独立影响因素。结论:男性血清ACE2水平高于女性;与非CHD患者相比,CHD患者血清ACE2水平升高;在CHD发生发展过程中,血清ACE2水平随CHD病情的恶化而持续升高。

关键词：血清血管紧张素转换酶2 冠心病

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人血清白蛋白基因的序列特征分析

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山东医药 2006年第35期46卷 3-4页

作者：王峰黄璐圆暨南大学基因组药物研究所广东广州510632 中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心

目的克隆人血清白蛋白(HSA)基因并对其序列进行分析。方法利用PCR方法从人胎肝cDNA中克隆HSA基因片段,用DNASIS(2.5)软件分析核苷酸及其推导的氨基酸序列,用SignalP3.0Server预测N末端氨基酸信号肽,用ClustalX(1.81)和GeneDoc对蛋白序... 详细信息

目的克隆人血清白蛋白(HSA)基因并对其序列进行分析。方法利用PCR方法从人胎肝cDNA中克隆HSA基因片段,用DNASIS(2.5)软件分析核苷酸及其推导的氨基酸序列,用SignalP3.0Server预测N末端氨基酸信号肽,用ClustalX(1.81)和GeneDoc对蛋白序列进行多重序列联配分析。结果成功克隆HSA基因,有15个外显子和14个内含子,与猴、猫、牛、兔和老鼠的蛋白氨基酸相似率分别为93%、82%、76%、75%、73%;含有3个保守的白蛋白结构域。结论本研究为开发长效蛋白药物奠定了良好的基础。

关键词：血清白蛋白序列分析基因结构

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胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤寡脱氧核苷酸对慢性支气管哮喘小鼠气道重塑的影响

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中华结核和呼吸杂志 2006年第9期29卷 612-616页

作者：揭志军金美玲蔡映云袁正宏胡芸文徐扬任涛杨振华上海第二医科大学附属新华医院呼吸科复旦大学附属中山医院呼吸疾病研究所上海200032 复旦大学上海医学院教育部医学分子病毒学重点实验室

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能否预防或减轻慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑的发生。方法 40只雌性清洁级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为4组，每组10只。（1）慢性哮喘组（A组）... 详细信息

目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能否预防或减轻慢性支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道重塑的发生。方法 40只雌性清洁级C57BL／6小鼠按随机数字表法分为4组，每组10只。（1）慢性哮喘组（A组）：分别于第1、14天小鼠腹腔注射1ml致敏液[卵蛋白（OVA，10μg）＋氢氧化铝凝胶（100μg）]；从第21天开始雾化吸入2．5％OVA溶液，每次30min，每周3次，连续8周。（2）CpG—ODN干预组（B组）：在OVA致敏的同时给予浓度为60μg／ml的CpG—ODN腹腔注射1ml共2次，以后每2周腹腔注射1次共4次。（3）GpC—ODN对照组（C组）：将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶（GpC，剂量及用法同CpG-ODN）作为对照。（4）生理盐水（NS）对照组（D组）：给予NS进行致敏（每次1ml腹腔注射）和激发（用NS雾化吸入）。在末次激发24h后所有小鼠取血测嗜酸粒细胞（EOS）数和血清IgE；收集支气管肺泡灌洗液（BALF）做细胞分类计数，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测上清液中自细胞介素13（IL-13）和转化生长因子β1（TGF—β1）的浓度。取左肺组织行苏木精-伊红（HE）染色和Masson三色染色，用抗α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）抗体和抗TGF—β1抗体行免疫组化染色。结果 A组外周血EOS计数为（89±10）×10^4／ml、血清IgE为（279±53）ng／ml，BALF中EOS计数和分类分别为（6．30±1．30）×10^5／ml、0．181±0．030，A组IL-13浓度为（4015±361）pg／ml、TGF—β1浓度为（356±64）pg／ml，以上数值与D组比较差异有统计学意义（t值分别为24．0、15．7、14．7、18．4、12．0和18．9，P均〈0．01）；A组Masson三色染色、α-SMA、TGF-β1阳性染色面积百分比[分别为（29．7±4．2）％、（45±7）％、（34±4）％]与D组比较差异也有统计学意义（t值分别为18．0、15．6和17．9，P均〈0．01）。应用CpG-ODN干预后（B组）的Masson三色染色、α—SMA、TGF—β1阳性染色面积百分比[分别为（13．8±3．2）％、（25±3）％、（18±4）％]与A组比较差异也有统计学意义（t值分别为9．5、8．9、9．8，P均〈0．05）。结论应用CpG-ODN干预慢性哮喘模型，不仅能抑制Th2细胞反应和EOS肺浸润，还能抑制气道重塑的发生和发展，它可能是通过抑制TGF—β1、IL-13等因子而抑制气道重塑的。

关键词：哮喘气道重塑炎症小鼠 CpG-寡脱氧核苷酸

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马铃薯酪氨酸酶的部分纯化及理化性质的研究

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山西大学学报(自然科学版) 1995年第2期 184-189页

作者：王君玲，口如琴，成汇，袁静明，周永安山西大学分子所山西医学院第二附属医院细胞室武汉病毒研究所

马铃薯酪氨酸经粗提、丙酮沉淀和硫酸铵分级后，得到了纯化１．８倍，活力回收　４２．５％，比活力为４９．７Ｕ／ｍｇ蛋白的部分纯化酶，并对其理化性质进行了研究。结果表明，以多巴为底物，酶的Ｋｍ为５．７ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ为１... 详细信息

马铃薯酪氨酸经粗提、丙酮沉淀和硫酸铵分级后，得到了纯化１．８倍，活力回收　４２．５％，比活力为４９．７Ｕ／ｍｇ蛋白的部分纯化酶，并对其理化性质进行了研究。结果表明，以多巴为底物，酶的Ｋｍ为５．７ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍ为１６．２μｍｏｌ／Ｌ·ｍｉｎ，最适ｐＨ为８．２，最适温度为４０℃，、Ｆ￣－、苯甲酸、叠氮化钠、过氧化氢为其抑制剂，Ｖｃ、苯肼等对该酶的半抑制浓度为μｔｍｏｌ／Ｌ水平。Ｃｕ￣（２＋）在低浓度可激活、高浓度可抑制该酶，ＥＤＴＡ可降低酶活。４ｍｏｌ／Ｌ脲和０．５ｍｏｌ／Ｌ胍可使酶活丧失７０％，在６ｍｏｌ／Ｌ脲中充分变性的酶经稀释复性，酶活中恢复５９．２％。

关键词：马铃薯,酪氨酸酶,提纯,性质

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健康人和T-ALL患者BCL11B-3’UTR miRNA结合位点区域的单核苷酸多态性/突变情况

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中国病理生理杂志 2018年第7期34卷 1228-1231页

作者：陆帅何子凡廖紫薇曾成武杨力建陈少华 Suming HUANG 李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学基础医学院血液学研究所广东广州510632 佛罗里达大学医学院生化与分子生物学系美国佛罗里达州盖恩斯维尔326100245

目的:建立检测B细胞淋巴瘤/白血病11B基因3’端非翻译区(BCL11B-3’UTR)微小RNA(miRNA)结合位点区域单核苷酸多态性(SNP)和突变的方法,并初步分析健康人和T细胞型急性淋巴细胞白血病(TALL)患者的SNP/突变情况。方法:通过Target Scan等... 详细信息

目的:建立检测B细胞淋巴瘤/白血病11B基因3’端非翻译区(BCL11B-3’UTR)微小RNA(miRNA)结合位点区域单核苷酸多态性(SNP)和突变的方法,并初步分析健康人和T细胞型急性淋巴细胞白血病(TALL)患者的SNP/突变情况。方法:通过Target Scan等生物学软件对Gen Bank数据库中BCL11B-3’UTR序列的miRNA结合位点进行预测分析;设计扩增包含主要BCL11B-3’UTR中miRNA结合位点区域的特异性引物,PCR扩增20例健康人和21例T-ALL患者外周血单个核细胞DNA的相应片段并送核苷酸序列分析后比对其序列变化情况。结果:根据context++score和seed match类型等评价标准筛选得到BCL11B-3’UTR中24个高度保守的潜在miRNA结合位点;发现1例T-ALL患者存在BCL11B-3’UTR第2 402位点核苷酸替换(T>C),该突变已在db SNP数据库登记(rs184678181);健康人BCL11B-3’UTR miRNA结合位点区域未检测到SNP/突变。结论:健康人和TALL患者BCL11B-3’UTR序列突变罕见。本研究率先发现1例T-ALL患者BCL11B-3’UTR的第2 402位点存在T>C改变,涉及hsa-miR-6814-5p结合位点区域。该SNP对BCL11B表达调控的影响有待进一步研究,以期为BCL11B在T-ALL中的作用研究提供新的资料。

关键词： B细胞淋巴瘤/白血病11B T细胞型急性淋巴细胞白血病 3’端非翻译区微小RNA 单核苷酸多态性突变

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shRNA慢病毒质粒的构建技巧

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中国生物工程杂志 2011年第3期31卷 124-127页

作者：秦俊文谢琪璇蔡冬青秋山泰身井上纯一郎暨南大学生殖免疫研究所广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室科技部及广东省科技厅国际科技合作基地广州510632 东京大学医科学研究所分子发癌分野东京108-8639

携带shRNA慢病毒质粒的慢病毒宿主范围广,能感染分裂期与非分裂期细胞,转染效率高,shRNA在宿主细胞中能高效、长期稳定地表达,因此shRNA慢病毒载体正被越来越广泛地应用于RNAi研究和疾病治疗中。

关键词： shRNA 慢病毒载体质粒宿主细胞宿主范围转染效率 RNAi 分裂

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小鼠TRAF6特异性shRNA慢病毒质粒的构建及活性

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生物技术 2011年第6期21卷 20-24页

作者：谢琪璇罗峰秋山泰身井上纯一郎秦俊文暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632 东京大学医科学研究所分子发癌分野暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。方法:设计、合成小鼠TRAF6基因特异性shRNA核苷酸,将其链接入pENTR/U6载体,基因测序;通过LR克隆酶将pENTR/U6中的TRAF6特异性shRNA核苷酸插入CS-RfA-EG慢病毒载体,KpnⅠ限制酶切分析;通... 详细信息

目的:构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。方法:设计、合成小鼠TRAF6基因特异性shRNA核苷酸,将其链接入pENTR/U6载体,基因测序;通过LR克隆酶将pENTR/U6中的TRAF6特异性shRNA核苷酸插入CS-RfA-EG慢病毒载体,KpnⅠ限制酶切分析;通过慢病毒将TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒导入MEF13细胞中,FACS分析质粒导入率,同时利用Western blot技术检测MEF13细胞中TRAF6的表达以及磷酸化IκBα的表达。以LacZ基因特异性shRNA慢病毒质粒为对照。结果:构建的小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒与设计相符;MEF13细胞中慢病毒质粒的导入率为95%以上;与对照组比较,TRAF6基因特异性shRNA可长期、完全抑制MEF13细胞中TRAF6的表达及TRAF6介导的IκBα的磷酸化。结论:成功构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。

关键词： TRAF6 慢病毒质粒 shRNA RNAi

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微RNA对K562细胞基因表达谱的影响

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南方医科大学学报 2006年第5期26卷 606-609页

作者：周珏宇马文丽费嘉丁大鹏石嵘姜立郑文岭南方医科大学基因工程研究所广东广州510515 暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510632 华南基因组研究中心广东广州510800

目的应用基因芯片技术,研究微RNA(miR-181a)对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法针对miR-181a成熟序列设计并合成miR-181aRNAduplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用AgilentHuman1A寡核苷酸基因芯片,检测和分... 详细信息

目的应用基因芯片技术,研究微RNA(miR-181a)对人白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法针对miR-181a成熟序列设计并合成miR-181aRNAduplexes,采用OligofectamineTM脂质体法转染K562细胞。应用AgilentHuman1A寡核苷酸基因芯片,检测和分析对照组与微RNA转染组间的基因表达谱差异。结果从20173个候选基因中,筛选出228个差异表达基因。与对照组K562细胞比较,表达上调的基因有59个,主要有代谢相关基因、抑癌基因、信号转导相关基因、免疫防御相关基因等;表达下调的有169个,主要有原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关基因、信号转导相关基因、细胞周期及发育相关基因等。RT-PCR技术验证了CTCF、ZAP70、SEMA4C和RALA4个基因表达的变化。结论微RNA转染K562细胞48h后,影响了细胞内一系列基因的表达。这些基因可能与微RNA的功能相关,同时也是转录后水平上抑制基因表达的调控方式实现的基础。这为进一步深入研究微RNA的功能及其具体的作用机制提供了重要的线索和依据。

关键词： K562细胞微RNA 白血病基因表达谱基因芯片

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人α-防御素基因的克隆及其在293T细胞中表达的临床意义

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山东医药 2007年第23期47卷 10-12页

作者：王峰黄璐圆暨南大学药学院基因组药物研究所广东广州510632 中国科学院广州生物医药与健康研究院分子医学中心

目的克隆人α-防御素(α-HNP)基因,构建重组真核表达质粒pCG-HNP并检测其在293T细胞中的表达。方法提取人PBMC细胞的RNA,以其为模板用RT-PCR技术克隆人α-HNP的cDNA,并将其插入质粒pCG中构建真核表达载体。测序证实后,将重组质粒用脂质... 详细信息

目的克隆人α-防御素(α-HNP)基因,构建重组真核表达质粒pCG-HNP并检测其在293T细胞中的表达。方法提取人PBMC细胞的RNA,以其为模板用RT-PCR技术克隆人α-HNP的cDNA,并将其插入质粒pCG中构建真核表达载体。测序证实后,将重组质粒用脂质体法转染293T细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western)检测目的蛋白分子的表达。结果测序证实克隆的人α-HNP阅读框正确完整,PCR鉴定和酶切鉴定证实插入方向正确,免疫印迹结果显示重组质粒能够在293T细胞中表达HNP-GFP-Flag融合蛋白。结论α-HNP基因成功克隆;其在293T细胞中的表达可为进一步研究其抗HIV活性奠定基础。

关键词：防御素 293T细胞真核表达

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CXCR4 HIV-1抑制剂的设计合成及活性研究

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军事医学 2014年第8期38卷 602-607页

作者：叶建涵周尚民王茜陆路董铭心陈红飙姜世勃戴秋云湘潭大学化学学院湖南湘潭411105 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、M... 详细信息

目的设计、合成一系列新型四氢喹啉-苄基或苯并咪唑多胺类化合物,作为潜在的靶向CXCR4辅助受体的新型抑制剂,并测定其抗HIV-1活性。方法组合HIV-1辅助受体CXCR4抑制剂三氮构效团与CCR5部分药效团,设计并合成一系列新化合物并经1H-NMR、MS表征,用HIV-1ⅢB病毒测定化合物抑制活性。结果与结论设计合成的10个目标化合物未见文献报道。活性测试结果显示,四氢喹啉-苯并咪唑多胺类化合物具有较好的抗HIV活性(IC50<1μmol/L),四氢喹啉-苄基多胺类化合物活性较差(IC50>8μmol/L)。

关键词： CXCR4 HIV-1 抑制剂合成活性

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