检索结果-内蒙古大学图书馆

FlightlessⅠ与核质转运蛋白Importin β及核孔蛋白Nup88的相互作用

生物工程学报 2015年第8期31卷 1247-1254页

作者：廖声友王翠华汤冬娥魏金梅贺玉娇熊海庭徐凤梅高学娟刘小会刘朗夏广东省高校功能蛋白质研究重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广东广州510632

Fightless I(FLII)是一个在肿瘤中高表达的蛋白,前期研究提示FLII可能参与核质转运过程,为鉴定FLII是否与核膜结合蛋白相互作用,构建GST-FLII、GST-LRR融合蛋白重组质粒并转化至大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,使用GST琼脂糖珠进行融合蛋... 详细信息

Fightless I(FLII)是一个在肿瘤中高表达的蛋白,前期研究提示FLII可能参与核质转运过程,为鉴定FLII是否与核膜结合蛋白相互作用,构建GST-FLII、GST-LRR融合蛋白重组质粒并转化至大肠杆菌Rosetta进行诱导表达,使用GST琼脂糖珠进行融合蛋白的纯化。通过SDS-PAGE对纯化蛋白进行验证之后,利用GST-pull down及免疫共沉淀技术证明了FLII与Importinβ、Nup88蛋白的相互作用,并鉴定FLII上的LRR结构域为相互作用区域。研究结果提示FLII可能参与了Importinβ的部分生物学作用,为进一步分析FLII与Importinβ、Nup88的生物学功能奠定了基础。

关键词：分子生物学 RNA转运 GST-pull down 免疫共沉淀 Flightless Ⅰ Importin β Nup88

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支原体污染经 p38 MAPK 途径降低人类细胞株28S 和18SRNC-rRNA

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中国病理生理杂志 2015年第5期31卷 917-923页

作者：王青罗彦彰林修贤荣冬秀张涛王通崔毅峙功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广东广州510632 暨南大学第一附属医院广东广州510632

目的:研究支原体感染对人类细胞株的核糖体新生肽链复合体(RNC)中rRNA组成的影响及其相关机制。方法:分别提取支原体阳性与阴性RNC-RNA进行琼脂糖凝胶电泳,分析RNC-rRNA组成改变情况;在支原体污染环境中培养人正常肺上皮(HBE)细胞,比较... 详细信息

目的:研究支原体感染对人类细胞株的核糖体新生肽链复合体(RNC)中rRNA组成的影响及其相关机制。方法:分别提取支原体阳性与阴性RNC-RNA进行琼脂糖凝胶电泳,分析RNC-rRNA组成改变情况;在支原体污染环境中培养人正常肺上皮(HBE)细胞,比较培养前后RNC-rRNA的变化;对RNC-RNA条带异常细胞进行抗支原体治疗,比较治疗前后RNC-rRNA的变化。利用免疫印迹分析支原体污染对丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径的影响。结果:不同组织来源的多株细胞中,支原体阴性和阳性细胞RNCRNA的琼脂糖电泳显示细胞中RNC-rRNA组成发生异常改变,主要体现为28S和18S真核rRNA的降低,以及16S和未知原核rRNA的增加。在污染环境中培养HBE细胞,其RNC-rRNA组成可由支原体阴性转变为阳性谱型。以环丙沙星抗支原体治疗可逆转上述RNC-rRNA谱型的改变。总蛋白和磷酸化蛋白的免疫印记结果表明,支原体污染显著抑制A549细胞的p38 MAPK途径的活化,而对该细胞的ERK1/2途径无显著改变。结论:支原体感染可通过抑制p38 MAPK活化严重改变人类细胞株中RNC-rRNA的组成,从而影响宿主细胞的翻译行为。

关键词： RNC-rRNA 支原体人细胞系

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hnRNPK与Nef相互作用并有利于细胞表面CD4的表达

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中国生物工程杂志 2015年第4期35卷 17-22页

作者：魏金梅范小琴熊海庭高学娟刘小会刘朗夏广东省高校功能蛋白质研究重点实验室暨南大学生命与健康工程研究院广州510632

目的:前期不同的研究分别证明HIV蛋白Nef下调宿主细胞表面受体CD4的表达,以及Nef与宿主细胞蛋白heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K(hnRNPK)存在相互作用。因此提出了两个值得研究探讨的重要问题:(1)hnRNPK是否参与调节细胞表面... 详细信息

目的:前期不同的研究分别证明HIV蛋白Nef下调宿主细胞表面受体CD4的表达,以及Nef与宿主细胞蛋白heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K(hnRNPK)存在相互作用。因此提出了两个值得研究探讨的重要问题:(1)hnRNPK是否参与调节细胞表面CD4的表达?(2)Nef是否通过hnRNPK调节细胞表面CD4的表达?方法:利用半体外GST-pulldown技术验证Nef与hnRNPK存在相互作用。通过瞬时转染的方式将HIV-1Nef表达在He La-CD4细胞里,同时利用siRNA干扰技术敲低hnRNPK,最后运用流式细胞技术检测细胞表面CD4的表达水平。结果:(1)GST-pulldown结果验证了Nef与hnRNPK存在相互作用;(2)Nef的表达使细胞表面CD4水平下降约75%;(3)不管是否有Nef,hnRNPK的敲低都使细胞表面CD4表达水平明显下降(50%);同样的,Nef下调CD4的作用也不受hnRNPK敲低的影响。结论:(1)hnRNPK与Nef相互作用;(2)hnRNPK有利于细胞表面CD4的表达,其与Nef的下调作用的关系尚不明确,Nef对CD4的下调作用可能涉及有其他因素参与的复杂调控。

关键词：分子生物学 Nef CD4 hnRNPK 流式细胞术

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UV照射和MMS诱导下PCNA表达的变化及相关研究

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激光生物学报 2014年第2期23卷 110-115页

作者：谢颖颖汤冬娥刘小会高学娟刘朗夏暨南大学功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室生命与健康工程研究院广东广州510632

目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况。方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化。运用ShRNA干... 详细信息

目的:建立DNA损伤的模型,在蛋白水平和mRNA水平研究PCNA的表达变化情况。方法:UV照射和MMS处理细胞后利用Western blot和实时荧光定量PCR检测PCNA蛋白表达水平和mRNA水平的变化,以及利用倒置荧光显微镜观察细胞的形态变化。运用ShRNA干扰技术降低泛素E3连接酶RAD18和CUL4A的表达,检测内源PCNA蛋白表达水平的变化。结果与结论:UV照射和MMS处理细胞后,细胞形态发生变化,随着时间的延长,大部分细胞趋于死亡。实时荧光定量PCR的结果发现PCNA的mRNA水平下降,但是PCNA蛋白水平的表达无明显变化,说明DNA损伤时PCNA蛋白的稳定性增加,暗示细胞中存在着一定的机制,维持PCNA蛋白表达量的稳定。干扰E3连接酶CUL4A和RAD18的表达时,PCNA蛋白水平有所升高,提示二者参与了PCNA的降解过程。

关键词： PCNA 表达 DNA损伤 UV MMS

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曲古抑菌素A对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用

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中国药理学通报 2013年第10期29卷 1395-1400页

作者：黄琼越茂松季秋虹王进京季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植和免疫研究中心广东广州510632 南通大学附属医院神经内科江苏南通226001 暨南大学功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室广东广州510632

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)缺氧/缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用及其可能机制。方法采用化学方法建立SH-SY5Y细胞不同时间(1、2、4、6和8 h)... 详细信息

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)缺氧/缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用及其可能机制。方法采用化学方法建立SH-SY5Y细胞不同时间(1、2、4、6和8 h)持续性OGD损伤模型,MTT法检测细胞活性,以评估持续性OGD损伤对SH-SY5Y细胞的损伤程度。继而观察TSA(10、20、40、80 nmol·L-1)对OGD诱导的神经元损伤的影响,实验指标如下:倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT检测TSA对细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡与坏死情况,荧光显微镜检测各组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和线粒体膜电位(mitochondrion membrane potential,MMP)的变化。结果 OGD损伤2 h,模型组的细胞活性和MMP水平较对照组明显降低,并随OGD时间的延长而变化越明显。而ROS含量较对照组明显升高,Hoechst和PI双染检测也发现染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体产生,并随OGD时间的延长,凋亡和坏死细胞的数量增加。与模型组相比,40 nmol·L-1TSA能明显提高OGD诱导的神经元的活性,降低细胞内ROS含量,以及提高MMP水平。结论TSA对OGD诱导SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤具有明显的保护作用,其保护机制可能与降低细胞内ROS水平及维持MMP的高能状态有关。

关键词：曲古抑菌素A SH—SY5Y细胞缺氧缺糖损伤氧化应激活性氧线粒体膜电位

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曲古抑菌素A对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用

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中国药理学通报 2013年第5期29卷 688-692页

作者：越茂松黄琼王进京季秋虹季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广州510632 南通大学附属医院神经内科南通226001 暨南大学功能蛋白质研究广东普通高校重点实验室广州510632

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-... 详细信息

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对PC12大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞缺糖/缺氧损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法建立PC12细胞缺糖/缺氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)损伤模型,1-640 nmol.L-1TSA处理细胞,噻唑蓝(MTT)检测对PC12细胞活性的影响,Propidium iodide(PI)和Hoechst33258染色检测细胞凋亡与坏死,荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的含量。结果与模型组相比,80 nmol.L-1TSA可明显提高ODG PC12的细胞存活率,降低细胞内的ROS含量(P<0.05)。结论 TSA对OGD损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能是通过增加细胞内能量代谢中各种酶的乙酰化水平来应对缺血损伤。

关键词： TSA PC12细胞缺糖缺氧能量代谢乙酰化活性氧

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