检索结果-内蒙古大学图书馆

毒理学杂志 2011年第2期25卷 103-106页

作者：吴赤蓬江淑仪陈秉陈小玲方昌勇钟雪云暨南大学医学院公共卫生学教研室广东广州510632 广东药学院公共卫生学院广东省东莞市疾病预防控制中心暨南大学医学院病理学与病理生理学系

目的研究甲基叔丁基醚(MTBE)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)产生细胞增殖的毒物兴奋效应(hormesis)的剂量范围及其毒理学意义。方法采用MTT法检测MTBE对16HBE细胞增殖的影响及其剂量-效应关系;采用SCGE试验检测MTBE在能诱导细胞增殖horme... 详细信息

目的研究甲基叔丁基醚(MTBE)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)产生细胞增殖的毒物兴奋效应(hormesis)的剂量范围及其毒理学意义。方法采用MTT法检测MTBE对16HBE细胞增殖的影响及其剂量-效应关系;采用SCGE试验检测MTBE在能诱导细胞增殖hormesis的剂量下对细胞DNA的损伤效应;采用相同剂量范围的MTBE水溶液亚慢性染毒昆明小鼠3 m后,检测小鼠全血细胞DNA的损伤效应。结果 MTBE在1～20 g/L的剂量范围内能促进16HBE细胞增殖;当剂量大于5 g/L时,16HBE细胞SCGE试验的各项指标值均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);剂量为2.5和5 g/L的MTBE水溶液可造成小鼠全血细胞DNA的损伤。结论 MTBE在1 g/L～20 g/L剂量范围内能诱导16HBE细胞增殖的hormesis;其诱导细胞增殖hormesis的剂量可能并不安全,具有损伤细胞DNA的作用,存在致突变、致癌的风险。

关键词：甲基叔丁基醚毒物兴奋效应细胞增殖

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天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02细胞损伤的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第3期26卷 211-213页

作者：柏志全胡巢凤孙丽萍暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响。方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度。用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检... 详细信息

目的:探讨天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02损伤的影响。方法:将人肝细胞株L02培养,加入不同浓度的乙醇,采用MTT比色法确定乙醇作用的浓度。用流式细胞仪测定细胞活性氧簇(ROS)及线粒体膜电位的改变;采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析法检测细胞ATP含量。结果:乙醇(25 mL/L)作用36 h可损伤肝细胞,细胞内ROS的水平明显增加;而细胞线粒体膜电位及肝细胞中ATP的含量则显著降低(P<0.01)。天麻素具有减轻细胞损伤的作用,并可降低损伤的肝细胞内ROS的含量,增加细胞线粒体膜电位和ATP的水平。结论:天麻素可抑制乙醇诱导的肝细胞损伤及脂质过氧化反应,改善线粒体功能,增加能量合成,发挥保护肝细胞的作用。

关键词：肝细胞活性氧簇线粒体膜电位能量代谢天麻素

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高胆红素血症新生大鼠脑干听觉诱发电位快慢成分的变化

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中国应用生理学杂志 2010年第1期26卷 77-81页

作者：何斯纯陈中婕马宁暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632

目的:探讨高胆红素血症新生大鼠脑干听觉诱发电位快成分(FC-BAEP)和慢成分(SC-BAEP)及脑干神经元线粒体超微结构的异常变化。方法:生后7天SD大鼠随机分为对照组(C组,17只)和两个实验组(T1和T2组,各17只)。T1和T2组大鼠生后7天和10天腹... 详细信息

目的:探讨高胆红素血症新生大鼠脑干听觉诱发电位快成分(FC-BAEP)和慢成分(SC-BAEP)及脑干神经元线粒体超微结构的异常变化。方法:生后7天SD大鼠随机分为对照组(C组,17只)和两个实验组(T1和T2组,各17只)。T1和T2组大鼠生后7天和10天腹腔注射2g/L胆红素溶液,第二次腹腔注射6h后随机抽出7只断头取血用微量胆红素仪检测血清胆红素,其余大鼠生后17天和20天用诱发电位仪检测FC-BAEP和SC-BAEP,生后20天灌注固定、取耳蜗核进行透射电镜观察。结果:T1和T2组大鼠于生后10天腹腔注射6h后,血清胆红素浓度明显升高;T1和T2组大鼠生后17天三种刺激重复率(10/s,40/s,80/s)引导的FC-BAEP,除Ⅱ-Ⅳ波峰间潜伏期(IPL)外,各波波峰潜伏期(PL)和IPL显著延长,且T2组大鼠各波PL较T1组显著延长;T1和T2组大鼠生后20天三种刺激重复率引导的FC-BAEP,除刺激重复率10/s和40/s引导的Ⅱ-ⅣIPL外,各波PL和IPL显著延长;T1和T2组大鼠生后17天与20天刺激重复率10/s引导的SC-BAEP的PL显著延长,且T2组大鼠生后17天SC-BAEP的PL较T1组显著延长;T1和T2组大鼠耳蜗核电镜观察可见神经元线粒体肿胀变形、膜模糊不清和嵴断裂等。结论:高胆红素血症新生大鼠FC-BAEP和SC-BAEP及脑干神经元线粒体超微结构有显著异常变化,FC-BAEP与SC-BAEP的PL和IPL是早期监测胆红素诱发的听觉和脑损伤的客观灵敏指标。

关键词：高胆红素血症大鼠脑干听觉诱发电位快成分慢成分线粒体

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单纯生物学制剂诱导人脐带间充质干细胞向胰岛素分泌细胞快速分化

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生理学报 2010年第1期62卷 73-78页

作者：王跃春张洹段阿林林伟霞郑乔丹徐文璐暨南大学医学院生理学教研室暨南大学医学院血液病研究所

为探讨用单纯生物学制剂诱导人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord,hUC-MSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,本研究用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及两步离心法从人胎儿完整脐带中分离、纯化出h... 详细信息

为探讨用单纯生物学制剂诱导人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells derived from human umbilical cord,hUC-MSCs)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,本研究用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及两步离心法从人胎儿完整脐带中分离、纯化出hUC-MSCs;用表皮生长因子、碱性成纤维生长因子、银杏提取液和高糖培养基IMDM诱导hUC-MSCs向胰岛素分泌细胞分化。在hUC-MSCs诱导前后,用倒置显微镜观察其形态变化,RT-PCR检测其胰岛相关基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样细胞团(islet-like clusters,ILCs);细胞免疫荧光染色检测ILCs中PDX-1和免疫活性胰岛素(immunoreactive insulin,IRI)的表达;化学发光法检测ILCs的IRI分泌量;Western blot鉴定IRI的性质。结果显示:纯化的hUC-MSCs呈间充质干细胞特有的形态特征:长梭形,平行或螺旋形排列;在上述单纯生物学制剂的诱导下,hUC-MSCs逐渐变圆并聚集成团;在25cm2培养瓶的细胞生长面可见上百个ILCs;ILCs表达胰岛特异性基因pdx-1、insulin;ILCs呈PDX-1和IRI免疫染色阳性反应,双硫腙染色呈阳性;ILCs可分泌IRI,但多为胰岛素原(proinsulin,PI)。以上结果提示,用表皮生长因子、碱性成纤维生长因子、银杏提取液和高糖培养基IMDM可诱导hUC-MSCs快速分化为胰岛素分泌细胞,但ILCs功能不够成熟,难以产生足量真胰岛素。

关键词：脐带间充质干细胞胰岛素分泌细胞细胞分化生物学制剂

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细胞周期蛋白D1重组质粒的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 202-205页

作者：柏志全张海峰陈丽新朱林燕左婉红和树同王立伟暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院药理教研室广东广州510632

目的克隆人细胞周期蛋白D1基因,构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达。方法利用RT-PCR法,以低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞mRNA为模板,扩增周期蛋白D1基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-D1和pEGFP-C2-D1,用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质... 详细信息

目的克隆人细胞周期蛋白D1基因,构建真核表达载体,诱导并鉴定其表达。方法利用RT-PCR法,以低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞mRNA为模板,扩增周期蛋白D1基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-D1和pEGFP-C2-D1,用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质粒转染到低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞,诱导其表达,免疫荧光、Western blotting等鉴定其表达。结果电泳获得918bp预期片段,重组质粒经酶切、PCR和测序分析证实含有周期蛋白D1完整读码框,将重组质粒导入CNE-2Z细胞并成功表达,目的蛋白经免疫荧光和Western blotting鉴定具有生物学活性。结论成功克隆并构建含周期蛋白D1基因的真核表达GFP质粒,为进一步研究周期蛋白D1在鼻咽癌CNE-2Z细胞中的作用奠定基础。

关键词：细胞周期蛋白D1 绿色荧光蛋白质粒构建免疫荧光免疫印迹

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大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶基因载体的构建及对胰腺癌细胞的作用

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医学分子生物学杂志 2011年第4期8卷 313-317页

作者：李文林李克强饶泽昌石小玉赵林南昌大学医学院病理生理学教研室南昌市330006 宁波市第二医院普外科浙江省宁波市315000 江西省医学科学研究所医学生物高技术重点实验室南昌市330006 南昌大学医学院组织胚胎学教研室南昌市330006

目的构建大肠埃希菌（Escherichia coli）嘌呤核苷磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase，PNP）基因表达载体，研究其生物活性，为肿瘤的基因治疗奠定基础。方法PCR扩增大肠埃希菌K12的PNP基因，T4连接酶将PNP连接人pMSCV逆转录... 详细信息

目的构建大肠埃希菌（Escherichia coli）嘌呤核苷磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase，PNP）基因表达载体，研究其生物活性，为肿瘤的基因治疗奠定基础。方法PCR扩增大肠埃希菌K12的PNP基因，T4连接酶将PNP连接人pMSCV逆转录病毒载体，构建重组逆转录病毒载体pMSCV／PNP。pM—SCV／PNP转化感受态大肠埃希菌XLI-Blue，提取pMSCV／PNP，酶切、PCR和测序鉴定。病毒包装细胞293产生重组逆转录病毒pMSCV／PNP，流式细胞仪测病毒滴度。pMSCV／PNP转染胰腺癌细胞BXPC-3，倒置荧光显微镜观察，FACS分离转染阳性细胞（GFP阳性）。RT—PCR检测PNPmRNA在胰腺癌细胞BXPC-3细胞中的表达，MTT法检测PNP基因的生物活性。结果PCR扩增出大肠埃希菌PNP基因（738bp），酶切和PCR的电泳条带显示pMSCV／PNP，测序结果正常。293包装细胞产生高滴度（3．6×10^7U／m1）重组逆转录病毒pMSCV／PNP。RT—PCR实验结果表明，pMSCV／PNP转染的胰腺癌细胞BXPC-3表达PNPmRNA。前药6-甲基嘌呤-2’-脱氧核苷（MePdR）作用72h浓度达1．00mg／L，BXPC-3／PNP细胞存活率为10．09％，随着MePdR浓度加大，BXPC-3／PNP细胞存活率继续下降直至为0。结论构建了pMSCV／PNP载体，获得了表达大肠埃希菌PNP基因的BXPC-3细胞克隆，PNP／MePdR自杀基因系统对胰腺癌细胞BXPC-3有较强的抑杀作用。

关键词：大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因载体胰腺癌

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热休克蛋白90在硫化氢保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤中的作用

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中国药理学通报 2010年第1期26卷 103-107页

作者：孟金兰兰爱平杨春涛杨战利王立伟陈丽新朱琳燕陈培熹冯鉴强广东药学院生理学教研室广东广州5100062 中山大学中山医学院生理学教研室广东广州510080 暨南大学医学院生理学教研室广东广州510632

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 3325... 详细信息

目的探讨热休克蛋白90(Hsp90)在硫化氢(H2S)保护PC12细胞对抗氯化钴(CoCl2)引起的化学性缺氧损伤中的作用。方法在PC12细胞建立H2S预处理对抗CoCl2诱导PC12细胞损伤的实验模型。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡PC12细胞的形态学改变;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blot)检测Hsp90的表达。结果H2S的供体400μmol·L-1硫氢化钠(NaHS)可上调PC12细胞Hsp90的表达,NaHS作用3h,Hsp90表达达最高峰,作用24h时表达恢复到基础水平;NaHS也能明显地增加CoCl2引起的Hsp90的表达上调。NaHS预处理能对抗CoCl2引起的PC12细胞损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率。Hsp90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)可拮抗NaHS预处理对Hsp90表达的上调作用,并明显地减弱H2S诱导的适应性细胞保护作用。结论H2S能保护PC12细胞对抗CoCl2诱导的低氧损伤作用,诱导Hsp90表达上调可能是其细胞保护机制之一。

关键词：硫化氢氯化钴化学性缺氧热休克蛋白细胞保护凋亡 PC12细胞

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姜黄素对LPS激活小胶质细胞条件培养基诱导损伤的海马神经元保护作用及机制

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中国病理生理杂志 2010年第4期26卷 742-747页

作者：杨丽娟董军陆大祥唐红梅暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:通过脂多糖(LPS)激活小胶质细胞条件培养基(MCM)引起原代培养SD大鼠海马神经元损伤,体外模拟炎症相关性神经退行性疾病,探讨姜黄素的保护作用及机制。方法:5μg/LLPS作用于原代培养的SD大鼠小胶质细胞12h,取激活后培养基作用于原... 详细信息

目的:通过脂多糖(LPS)激活小胶质细胞条件培养基(MCM)引起原代培养SD大鼠海马神经元损伤,体外模拟炎症相关性神经退行性疾病,探讨姜黄素的保护作用及机制。方法:5μg/LLPS作用于原代培养的SD大鼠小胶质细胞12h,取激活后培养基作用于原代培养的SD大鼠海马神经元。实验分为5组:空白对照组,LPS组,姜黄素组,MCM组,姜黄素+MCM组。相差显微镜下观察海马神经元各组处理前后形态学改变,MTT法检测各组海马神经元的存活率,并通过全自动生化仪检测各组海马神经元内乳酸盐与丙酮酸盐比值来评价神经元内氧利用情况,RT-PCR法观察各组海马神经元1,4,5-三磷酸肌醇受体3个亚型(IP3R1,IP3R2,IP3R3)的表达情况。结果:LPS激活的小胶质细胞条件培养基引起海马神经元形态发生明显改变,乳酸盐与丙酮酸盐比值较空白对照组亦有明显增加;姜黄素组海马神经元形态未发生明显改变,乳酸盐与丙酮酸盐比值较MCM组降低,MCM组IP3R1及IP3R3表达明显升高,IP2R2无显著变化;姜黄素组IP3R1的表达较MCM组明显下降,但IP3R3表达无明显变化。结论:LPS激活小胶质细胞条件培养基可引起海马神经元损伤,姜黄素对该损伤海马神经元的保护性作用可能是通过增加细胞内氧利用率,降低IP3R1的表达及敏感性,从而减低神经元内钙离子浓度及细胞内钙离子超载机率而发挥作用的。

关键词：姜黄素脂多糖类小胶质细胞条件培养基海马神经元

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P53结合位点在NOD8启动子基因克隆调节及其对NOD8基因中的作用

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现代免疫学 2010年第6期30卷 471-476页

作者：曾琪蒋宇胡巢凤孙丽萍陆大祥暨南大学医学院病理生理学教研室广州510632

为探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用,采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有P53结合位点人NOD8基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-C2中,构建含有人P53结合位点的人NOD8基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP... 详细信息

为探讨P53结合位点在NOD8基因调控中的作用,采用PCR技术从人基因组DNA中扩增含有P53结合位点人NOD8基因启动子序列,并定向克隆入已切除启动子的表达载体pEGFP-C2中,构建含有人P53结合位点的人NOD8基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-NOD8;并构建P53结合位点缺失突变载体pEGFP-C2-NOD8,将构建的质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导瞬时转染HEK293细胞,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。用不同浓度的p53抑制剂PFT-α(pifithrinalpha,PFT-α)预处理HEK293细胞24 h后,将重组质粒pEGFP-C2-NOD8wt瞬时转染HEK293细胞,观察绿色荧光蛋白的表达。结果表明pEGFP-C2-NOD8wt和mpEGFP-C2-NOD8经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功。细胞转染后,缺失P53结合位点的NOD8启动子驱动的绿色荧光蛋白荧光强度明显低于含P53结合位点的重组质粒;且不同浓度PFT-α预处理HEK293细胞后重组质粒绿色荧光蛋白表达下降呈剂量依赖性。结论是P53结合位点突变重组质粒在HEK293细胞中其绿色荧光表达明显减弱;PFT-α可以通过抑制P53表达使重组质粒pEGFP-C2-NOD8wt在细胞中绿色荧光表达呈剂量依赖性减弱。说明P53结合位点在NOD8基因调控中发挥了正调节作用。

关键词： NOD8启动区 P53结合位点基因调控缺失突变 PFT-α

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人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体的构建与鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 140-144页

作者：蒋宇胡巢凤曾琪孙丽萍暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2... 详细信息

目的:构建人RIP2基因启动子的绿色荧光蛋白表达载体。方法:根据特定限制性内切酶位点,以人基因组DNA为模板,PCR扩增含人RIP2基因启动子不同长度2段序列,构建含人RIP2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt、pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt,用VspⅠ和NheⅠ双酶切鉴定重组质粒,进行DNA序列分析,重组质粒经阳离子聚合物JetPeiTM介导转染HEK293细胞48 h后观察。结果:酶切鉴定和序列测定证实目的基因已插入重组质粒;细胞转染结果表明,重组质粒转染HEK293细胞均能表达绿色荧光,其中构建的pEGFP-C2-RIP2(750 bp)wt重组质粒绿色荧光表达强于pEGFP-C2-RIP2(941 bp)wt。结论:成功构建2段不同长度的人RIP2基因启动子绿色荧光蛋白表达载体。

关键词：受体相互作用蛋白2启动子(RIP2启动子) 载体绿色荧光蛋白基因表达

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