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中华实验眼科杂志 2012年第11期30卷 976-981页

作者：招志毅陈建苏钟敬祥谭美华李善义戴应暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs... 详细信息

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs与兔角膜内皮细胞（CECs）混合共培养后分化iPSCs的形态学变化，并找出其细胞膜超微结构变化的规律。方法分别培养兔CECs和人MMC-iPSCs细胞系，用免疫组织化学法测定iPSCs细胞的标志物以鉴定iPSCs细胞。将传代后7d的iPSCs与60％融合的CECs在内皮细胞培养基中共培养建立混合共培养模型，利用AFM结合倒置显微镜观察CECs及共培养前后iPSCs的形貌和超微结构变化。结果CECs的长度和宽度分别为（66．93±10．48）μm和（44．85±8．14）μm，共培养前未分化的谮SCs的长度和宽度分别为（12．51±1．40）μm和（10．93±1．69）μm，共培养后分化的iPSCs长度和宽度分别为（36．12±10．29）μm和（31．53±9．65）μm。分化的iPSCs长度和宽度均大于共培养前的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05）。分化的iPSCs宽度与CECs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CECs细胞膜表面突起的最大宽度和高度分别为（2．11±1．03）μm和（115．68±92．08）nm，膜表面凹陷为窗孔样凹陷，最大宽度为（1．49±0．65）μm，膜表面结构几何参数均方根粗糙度（Rq）为（39．20±7．82）nm，平均粗糙度（Ra）为（30．37±5．32）nm；未分化的iPSCs细胞膜表面突起为颗粒状，突起的最大宽度和高度分别为（0．39±0．22）μm和（13．11±9．18）nm，膜表面凹陷为虫蚀样，凹陷的最大宽度为（0．34±0．18）μm，Rq和Ra分别为（26．60±4．93）nm和（9．97±3．78）nm；分化的iPSCs细胞膜表面突起为指状，突起的最大宽度和高度分别为（1．91±0．76）μm和（106．55±77．27）nm，膜表面凹陷为窗孔样，凹陷的最大宽度为（1．61±1．25）μm，Rq为（57．33±12．80）nm，Ra为（43．63±11．17）nm。分化的iPSCs细胞膜表面突起最大宽度和高度、凹陷最大宽度、Rq、Ra均大于共培养前未分化的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05），与CECs比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AFM能够敏感地观察到iPSCs与CECs接触共培养7d后iPSCs向CECs方向转化的形态学变化，为进一步研究iPSCs向CECs的分化提供了研究基础。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合共培养分化原子力显微镜

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诱导多能干细胞在眼科的研究进展

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 662-666页

作者：招志毅(综述) 陈建苏(审校) 暨南大学附属第一医院眼科、暨南大学医学院眼科研究所、再生医学教育部重点实验室广州510632

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间... 详细信息

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间充质细胞均可重编程成为iPSCs并可通过一定的诱导分化为特定类型的细胞，为多种疾病的特异性治疗提供了新的方法。而iPSCs研究在眼科领域的研究也取得了长足进展。在眼科，iPSCs诱导后可分化为视网膜色素上皮（RPE）细胞、感光细胞和其他视网膜细胞，从而为治疗视网膜退行性病变奠定了基础。与传统的干细胞治疗不同，iPSCs移植治疗相应的疾病避免了传统干细胞治疗所存在的道德伦理及免疫排斥等限制，具有较好的应用前景。就iPSCs的概念、诱导策略及方法、在眼科领域的研究现状、研究中存在的问题及应用前景等方面进行综述。

关键词：诱导多能干细胞视网膜变性性疾病眼科

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鸡胚发育中神经钙黏蛋白对头部神经嵴细胞分层的作用(英文)

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中国病理生理杂志 2012年第7期28卷 1269-1274页

作者：文皓旻李艳王广张笑坛王晓钰张兆龙杨雪松暨南大学再生医学教育部重点实验室生命科学技术学院广东广州510632 暨南大学医学院广东广州510632

目的:阐明神经钙黏蛋白(N-cadherin)在神经嵴细胞分层中的作用。方法:利用原位杂交鉴定N-cadherin在神经管上的表达。转染过表达N-cadherin的野生型N-cadherin(wild-type N-cadherin,wt-N-cad)或阻断N-cadherin表达的结构域缺失型N-cadherin(dominant-negative N-cadherin,dn-N-cad),利用免疫组化方法检测头部神经嵴细胞的迁移变化。结果:无论是过表达N-cadherin还是下调N-cadherin表达,头部神经嵴细胞迁移都受到了影响。结论:头部神经嵴细胞的分层和迁移依赖于神经管上N-cadherin的表达。

关键词：神经嵴神经钙黏蛋白迁移分层鸡胚

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造血干细胞移植后T细胞免疫重建的监测和调控

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白血病．淋巴瘤 2012年第2期21卷 65-67页

作者：李扬秋暨南大学医学院血液病研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

造血干细胞移植后T细胞免疫重建是预防病毒感染和肿瘤复发的一个关键因素。如何调整移植预处理方案、移植物成分和促进移植后免疫重建的问题也是2011年美国血液学会（ASH）年会中移植免疫的一个主要专题，本文主要介绍年会相关新进展。

关键词：造血干细胞移植 T细胞免疫重建美国血液学会年会

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基于TCR基因位点的FT-aCGH分析鉴定T-ALL中异常TCR Vβ-IgH重排

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第5期28卷 533-535页

作者：郑海涛陈少华杨力建李萡吴秀丽李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:鉴定T细胞-急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)异常基因重排。方法:利用基于T细胞受体(TCR)基因位点的精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(FT-aCGH)技术分析1例T-ALL样本与对照组基因组DNA的差异,了解7号和14号染色体TCRβ、TCRγ和TC... 详细信息

目的:鉴定T细胞-急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)异常基因重排。方法:利用基于T细胞受体(TCR)基因位点的精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(FT-aCGH)技术分析1例T-ALL样本与对照组基因组DNA的差异,了解7号和14号染色体TCRβ、TCRγ和TCRαδ位点上可能的断裂点位置,根据所提供的初步结果,根据断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法分析与之发生重排的基因序列。结果:FT-aCGH结果显示所检测T-ALL样本中,各TCR基因位点都存在断裂点,经过LM-PCR和序列分析,以及利用PCR和特异引物检测基因组DNA结果确定了T-ALL克隆为Vα8-Jα22基因重排,并发现了7号染色体在TCRβ基因位点,Vβ20-1基因片段与14号染色体位于免疫球蛋白重链区基因位点的IgHVII-26-2基因片段发生异常重排,形成t(7;14)(q34;q32)染色体易位。结论:利用FT-aCGH和LM-PCR技术在1例T-ALL中发现了一种新的Vβ20-1-IgHVII-26-2异常重排,这种异常重排有可能可以作为该肿瘤克隆的生物标记物。

关键词： TCR基因 FT-aCGH T-ALL 基因重排

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共培养环境中兔角膜内皮细胞诱导人iPSCs分化

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中国病理生理杂志 2012年第8期28卷 1488-1493页

作者：谭美华陈建苏招志毅丁勇钟敬祥戴应李善义杨皓庄暨南大学第一临床医学院眼科暨南大学医学院眼科研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学医学院病理生理学系广东广州510632

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。... 详细信息

目的:观察人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)与兔角膜内皮细胞(cornealendothelial cells,CECs)共培养前后的形态学变化,检测iPSCs向CECs分化前后部分标志蛋白表达的变化,为研究iPSCs向CECs的分化提供实验依据。方法:分离培养兔CECs并传代,同时使用无饲养层细胞法培养扩增人脐带源iPSCs,Western blotting对其进行鉴定;用量子点对iPSCs进行标记示踪,以不同密度比例建立iPSCs与CECs的共培养模式,用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)结合倒置显微镜观察共培养前后iPSCs的形态学变化,免疫荧光法检测iPSCs分化前后CD34、CD133、CD31和水通道蛋白1(AQP1)蛋白表达的变化。结果:培养扩增的兔CECs形态为六边形,呈典型的铺路石样外观;iPSCs呈克隆样生长,Western blotting检测Oct4、Nanog和Sox2多能性标志蛋白均呈阳性;10 nmol/L量子点标记的iPSCs以1/4悬液与融合60%的兔CECs共培养为最佳模式;AFM结合倒置显微镜观察到共培养后iPSCs体积增大,胞浆增多,核浆比减小,细胞膜表面可见颗粒状突起物,膜表面粗糙度增加;免疫荧光法检测分化前iPSCs的CD34、CD133、CD31和AQP1表达均呈阴性,共培养2周后iPSCs的CD34、CD133和CD31表达阴性,AQP1表达阳性。结论:与兔CECs混合共培养后人iPSCs不仅从形态学上向内皮样细胞方向转化,同时表达角膜内皮细胞标志蛋白AQP1。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合培养显微镜检查原子力水通道蛋白1

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PTEN基因对早期胚胎神经嵴细胞迁移的作用研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2012年第3期21卷 269-273页

作者：张兆龙李艳王广王晓钰张笑坛文皓旻马征来杨雪松暨南大学医学院组织胚胎教研室暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632

目的初步探讨PTEN基因在早期神经嵴细胞迁移中的作用。方法首先胚胎整体的原位杂交和免疫荧光方法检测鸡胚胎内源性的PTEN基因及蛋白水平的表达情况;其次,利用鸡胚胎体内半侧神经管转染的方法,使神经管一侧PTEN基因过表达,对侧神经管为... 详细信息

目的初步探讨PTEN基因在早期神经嵴细胞迁移中的作用。方法首先胚胎整体的原位杂交和免疫荧光方法检测鸡胚胎内源性的PTEN基因及蛋白水平的表达情况;其次,利用鸡胚胎体内半侧神经管转染的方法,使神经管一侧PTEN基因过表达,对侧神经管为正常对照侧;最后,通过Pax7的整体胚胎免疫荧光表达观察PTEN基因对其标记的部分神经嵴细胞迁移的影响。结果内源性PTEN基因在mRNA和蛋白水平表达显示,其在早期胚胎HH4期的神经板即开始明显的表达;通过半侧过表达PTEN基因后观察到过表达PTEN基因侧的头部神经嵴细胞迁移与对照侧相比明显受到抑制,但对躯干部的影响并不明显。结论 PTEN基因可能抑制早期胚胎头部神经嵴细胞的迁移。

关键词： PTEN Pax7 神经嵴细胞细胞迁移

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小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度的变化及其意义

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 581-585页

作者：王存傅婷李志杰夏潮涌暨南大学一香港中文大学再生医学教育部重点实验室广州510600 暨南大学医学院组织学与胚胎学教研室广州510632

背景目前已有许多关于哺乳动物发育阶段角膜神经分布的研究，但是尚无对睁眼前后这几个时间段角膜神经分布的研究。目的了解小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度随着年龄增长的变化规律，为进一步的实验和临床研究提供依据。方法SPF级C5... 详细信息

背景目前已有许多关于哺乳动物发育阶段角膜神经分布的研究，但是尚无对睁眼前后这几个时间段角膜神经分布的研究。目的了解小鼠睁眼前后角膜神经纤维长度与密度随着年龄增长的变化规律，为进一步的实验和临床研究提供依据。方法SPF级C57BL／6小鼠分为出生后1d（P1d）、P7d、P13d（睁眼前1d）、P14d（半睁眼）、P17d（完全睁眼后1d）和P23d（完全睁眼后7d），各组均5只鼠10只眼。采用β-微管蛋白Ⅲ抗体进行整张角膜铺片免疫荧光染色，使用Delta Vision Core拍摄角膜背鼻侧、背颞侧、腹鼻侧和腹颞侧的神经纤维图像，根据体视学测量线性结构的原理，运用Image—Pro Plus5．1软件中的“手动测量-建立多边形特征”计算角膜面积，并且使用***曲线（间距为53μm）分别计算各组小鼠的角膜面积、神经纤维总长度以及各分区的神经纤维密度。结果C57／BL6小鼠P1、P7、P13、P14、P17、P23d的角膜面积分别为（0．404±O．007）、（1．362±0．154）、（1．573±O．080）、（1．603±0．046）、（1．8474±0．052）、（2．445±O．798）mm^2，神经纤维总长度值分别为（3．718±1．044）、（19．065±3．350）、（23．687±0．907）、（27．309±2．477）、（31．989±3．976）、（41．214±1．573）mm，神经纤维密度分别为（9．592±1．138）、（14．506±1．908）、（15．088±1．241）、（16．772±1．897）、（16．8214±2．102）、（17．660±1．216）mm／mm^2，均随鼠龄的增长而增加，差异均有统计学意义（F=22．906、0．424、2．375，P=0．000），角膜面积和神经纤维长度之间呈正相关（r=0．983，P〈0．01）。角膜4个分区的神经纤维密度随年龄的增长而增加（背鼻侧区：F=0．159，P=0．000；背颞侧区：F=2．172，P=0．001；腹鼻侧区：F=1．998，P=0．000；腹颞侧区：F=2．352，P=0．000）。其中从P13d到P14d，背鼻侧区的神经纤维密度减少了6．O％，差异无统计学意义（t=0．589，P=0．572）；而且从P14d到P17d，背颞侧区、腹鼻侧区和腹颞侧区的神经纤维密度分别减少了4．6％、5．5％和0．1％，差异均无统计学意义（t=0．549，P=0．596；t=0．701，P=0．501；t=-0．100，P=0．919）。结论小鼠睁眼过程对整个角膜或角膜各分区神经纤维的发育都有不同程度的影响。从P17d开始，小鼠角膜神经纤维呈追赶性增长，恢复增长趋势。

关键词：角膜神经纤维长度神经纤维密度 C57/BL6小鼠

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TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病病人T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点

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免疫学杂志 2012年第9期28卷 825-828页

作者：史丽陈少华杨力建吴秀丽李萡卢育洪郁志沈琦闫小娟李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 暨南大学医学院第一附属医院血液科广州510632 暨南大学医学院再生医学教育部重点实验室广州510632

目的了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点。方法采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70... 详细信息

目的了解TCRζ缺陷的急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人外周血T细胞中Elf-1、Zap-70和FcεR Iγ基因的表达特点。方法采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测10例TCRζ缺陷的AML病人外周血CD3+T细胞中Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达情况。以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,10例健康成人作为对照;采用相对定量公式:2-△Ct×100%,计算Zap-70、Elf-1和FcεR Iγ基因的表达水平。结果 TCRζ缺陷的AML病人外周血T细胞中Elf-1基因的表达水平(中位数8.526%)明显低于健康对照组(中位数33.237%)(P<0.001),而FcεR Iγ基因的表达水平(中位数2.571%)则高于健康对照组(中位数0.958%)(P=0.019),Zap-70基因在两组中的表达水平没有显著性差异,但均与TCRζ基因的表达水平呈正相关。结论 TCRζ缺陷的AML病人T细胞中Elf-1基因的低表达可能是导致AML病人TCRζ基因缺陷性表达的原因之一,而FcεR Iγ基因的高表达则可能是在一定程度上缓解了TCRζ基因缺陷性表达所带来的T细胞免疫异常。

关键词： TCRζ缺陷急性髓细胞白血病 Elf-1 Zap-70 FcεR Iγ

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T细胞介导炎症与血液肿瘤发生相关性研究进展

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2012年第2期33卷 111-115页

作者：李扬秋杨力建陈少华暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

慢性炎症是肿瘤发生过程中一个重要因素,越来越多的研究显示T细胞介导炎症与多种肿瘤发生密切相关。本文主要综述近期有关T细胞介导炎症与血液肿瘤发生的相关性及其分子机制的新进展。

关键词： T细胞慢性炎症自身免疫性疾病血液肿瘤肿瘤发生

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