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广东省医学会第十九次血液病学学术会议

作者：刘思初陈宇黄欣沈琦陈少华杨力建钟隽张涛李扬秋暨南大学血液病研究所广东省医学科学院广东省人民医院医学研究中心暨南大学血液病研究所广东省医学科学院广东省人民医院医学研究中心暨南大学再生医学教育部重点实验室广东省医学科学院广东省人民医院医学研究中心暨南大学血液病研究所暨南大学附属第一医院血液科暨南大学血液病研究所暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学附属第一医院血液科

目的前期研究提示靶向抑制PPP2R5C基因表达,可显著抑制Jurkat细胞增殖,而HL60细胞增殖抑制作用不明显。为了解PPP2R5C在2种细胞中的调控特点,本研究进一步利用基因芯片技术,对靶向抑制PPP2R5C表达后的HL60细胞及Jurkat细胞中与增殖有...

目的前期研究提示靶向抑制PPP2R5C基因表达,可显著抑制Jurkat细胞增殖,而HL60细胞增殖抑制作用不明显。为了解PPP2R5C在2种细胞中的调控特点,本研究进一步利用基因芯片技术,对靶向抑制PPP2R5C表达后的HL60细胞及Jurkat细胞中与增殖有关的信号通路相关基因进行分析。方法本研究利用核转染技术将PPP2R5C-siRNA799转导至HL60细胞、Jurkat细胞中,选择抑制PPP2R5C效果最佳的样品提取细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3'IVT杂交,以Affymetrix GeneChip Scanner 3000基因芯片扫描仪扫描后进行差异表达谱分析。

关键词：

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脂肪干细胞的三维球形培养

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中国组织工程研究 2014年第6期18卷 872-879页

作者：王婵戴应郭永龙杨艳刘庆陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究所广东省广州市510632

背景:大多哺乳类细胞在正常生理状态下多以三维结构存在,为还原细胞本身在体内的自然状态,很多研究者开始尝试在体外对细胞进行三维培养,球形培养是一种常见的三维培养模式。目的:尝试用3种不同的方法在体外对人脂肪干细胞进行球形培养... 详细信息

背景:大多哺乳类细胞在正常生理状态下多以三维结构存在,为还原细胞本身在体内的自然状态,很多研究者开始尝试在体外对细胞进行三维培养,球形培养是一种常见的三维培养模式。目的:尝试用3种不同的方法在体外对人脂肪干细胞进行球形培养,并观察其生物学特征。方法:对提取的脂肪来源细胞进行表面Marker流式检测以及成脂成骨诱导鉴定后,证实为脂肪干细胞。先后用低黏附培养法、hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法3种方法在体外对脂肪干细胞进行球形培养,对3种方法形成球形的特点进行比较分析,并通过Imagej软件计算出3组多细胞球体的平均面积,利用Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live&Dead Cells试剂盒对3组多细胞球体进行活力检测。结果与结论:①通过流式细胞术鉴定细胞表型标志物,其中CD29,CD44,CD59完全阳性,同时成脂成骨诱导也为阳性,证实提取的细胞为脂肪干细胞。3代以内脂肪干细胞多呈长梭形,并克隆状生长。②低黏附培养法、hanging-drop培养法、Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞聚集成球形生长,但所成多细胞球形有所差异。低黏附培养法所形成的细胞球形大小不一,不易控制;而hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞形成大小均一的球形,但在大小和形成时间上有所不同。③3种不同方法所形成的球形细胞均保持较好的细胞活力。

关键词：干细胞脂肪干细胞诱导分化球形培养活力低黏附培养 hanging-drop培养 Eppendorf管培养国家自然科学基金

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心舒宝对大鼠心肌梗死的保护作用及其药理机制

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激光生物学报 2015年第5期24卷 448-454页

作者：李艳梅陈志亮赵明一彭忠禄陈志衡刘琳蔡骞齐绪峰暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 科技部及广东省科技厅"国际科技合作基地" 广东广州510632 再生医学联合实验室(暨南大学-香港中文大学) 广东广州510632 暨南大学发育与再生生物学系广东广州510632 漳州片仔癀药业股份有限公司福建漳州363000 中南大学湘雅三医院湖南长沙410006 湘南学院文学化生系湖南郴州423000

目的:探讨心舒宝对大鼠心肌梗死的保护作用及其药理机制,为临床用药提供理论依据。方法:0.25g/m L心舒宝灌胃二周后诱导大鼠心肌梗死模型,二周后进行大鼠心肌组织的Masson’s Trichrome染色实验;利用胰酶消化方法分离大鼠心脏原代内皮细... 详细信息

目的:探讨心舒宝对大鼠心肌梗死的保护作用及其药理机制,为临床用药提供理论依据。方法:0.25g/m L心舒宝灌胃二周后诱导大鼠心肌梗死模型,二周后进行大鼠心肌组织的Masson’s Trichrome染色实验;利用胰酶消化方法分离大鼠心脏原代内皮细胞,并培养于培养液。用0.005%,0.01%,0.05%的心舒宝处理细胞后,缺氧培养24 h、48 h,流式细胞仪分析其凋亡率。结果:心舒宝处理组的大鼠心肌梗死面积及其切面胶原明显小于对照组(P<0.01);0.005%心舒宝处理的大鼠心脏原代内皮细胞在缺氧48 h后,其凋亡明显降低(P<0.01)。结论:心舒宝可能通过降低大鼠心脏原代内皮细胞的凋亡而发挥保护大鼠心肌梗死的作用。

关键词：心舒宝心肌梗死细胞凋亡

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Transwell 接触共培养促进单散iPSCs 生长及分化

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中国病理生理杂志 2014年第8期30卷 1404-1409页

作者：刘庆郭永龙郭晓令连瑞玲陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 医学院眼科研究所广东广州510632

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accu... 详细信息

目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accutase消化及40μm过滤处理获得单散iPSCs，将其接种到已有CECs的Transwell小室内共培养14 d，前3 d使用mTeSR1培养基，第4天开始用含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基。分别进行实时荧光定量聚合酶链式反应（ real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ， qPCR ）、免疫荧光、死活细胞染色及碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase ， ALP）染色，对iPSCs多能特性表达及分化进行鉴定。设定单散iPSCs共培养组为实验组，常规培养iPSCs组为对照组（一），非共培养单散iPSCs组为对照组（二）。结果：培养牛CECs形态呈典型的六边形铺路石样外观。人iPSCs呈克隆样生长，共培养3 d后iPSCs贴壁呈单散细胞生长，免疫荧光检测未分化标志Nanog和Oct4呈阳性。 qPCR检测Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达，实验组与对照组（一）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。死活细胞染色显示，实验组死细胞明显减少，与对照组（二）比较差异有统计学意义（P＜0.01）。共培养14 d后，人iPSCs形态比较均一，呈多边形，体积增大，无明显克隆团块；ALP染色阴性；免疫荧光染色ZO-1、AQP1和CD31表达阳性，CD34和CD133表达阴性。 qPCR检测Oct4、Nanog和Sox2 mRNA表达明显下调，与对照组（一）比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：与牛CECs共培养可增强人单散iPSCs活性，使iPSCs形态上向内皮样细胞转化，表达部分CECs的标志。 Transwell接触共培养模型可以促进单散iPSCs生长及分化。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞 Transwell接触共培养

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实时定量PCR检测慢性粒细胞白血病患者Shh、Smo基因的表达水平

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 267-269页

作者：朱华民李扬秋暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广东医学院附属医院急救中心广东湛江524001 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632

目的建立Hedgehog信号通路功能性基因Shh和功能性受体蛋白Smo基因的定量检测方法,并分析其在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的表达水平。方法利用实时定量PCR检测20例CML患者和作为正常对照(8例)的健康人外周血... 详细信息

目的建立Hedgehog信号通路功能性基因Shh和功能性受体蛋白Smo基因的定量检测方法,并分析其在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者中的表达水平。方法利用实时定量PCR检测20例CML患者和作为正常对照(8例)的健康人外周血细胞中Shh、Smo基因的表达水平,以β2微球蛋白(β2-M)基因作为内对照。结果 CML组Shh、Smo表达水平均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论成功建立Shh、Smo基因的定量检测方法;Shh、Smo基因在CML中高表达。

关键词： Shh Smo基因慢性粒细胞白血病实时定量PCR 基因表达

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CARMA1-BCL10-MALT1调节T细胞增殖分化作用及其在T细胞肿瘤中的改变情况

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免疫学杂志 2014年第9期30卷 837-841页

作者：王旭胡峻岩李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广州510632 广州医学院第三附属医院急诊科 510150

由CARMA1、BCL10和MALT1 3种蛋白分子形成的CBM复合物,是活化NF-κB的信号转导通路中的重要信号分子,在调控淋巴细胞增殖和分化的过程中具有重要作用。本文主要综述了该信号通路分子的结构和主要在T细胞增殖和分化中的功能的研究新进展... 详细信息

由CARMA1、BCL10和MALT1 3种蛋白分子形成的CBM复合物,是活化NF-κB的信号转导通路中的重要信号分子,在调控淋巴细胞增殖和分化的过程中具有重要作用。本文主要综述了该信号通路分子的结构和主要在T细胞增殖和分化中的功能的研究新进展以及在T细胞肿瘤中的异常改变和相关分子机制。

关键词： CARMA1 BCL10 MALT1 分化 T细胞肿瘤

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兔角膜内皮细胞球形培养的活性和细胞表型

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中华实验眼科杂志 2014年第9期32卷 786-790页

作者：杨艳刘庆郭永龙王婵傅婷陈建苏暨南大学第一临床医学院眼科广州510632 暨南大学第一临床医学院再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院眼科研究所广州510632

背景组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. ... 详细信息

背景组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞（CECs）,因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的建立兔CECs高活性三维（3D）球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. 方法酶消化法分离和培养兔CECs并进行传代,经低黏附振动培养法产生兔CECs球,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态;采用扫描电子显微镜观察CECs球的表面超微结构;用吖啶橙染色法鉴定CECs球中细胞的活性;采用CCK-8试剂盒检测细胞的吸光度（A450）值,判断细胞的增生情况.将CECs球接种到6孔细胞培养板贴壁培养1周,球形培养的细胞为球形培养组,常规培养的细胞为常规培养组.采用免疫荧光法检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）和Na＋/K＋-ATP酶在细胞中的表达.结果经球形培养的CECs呈聚集生长,培养1周细胞形态为六角形或多边形,融合成单层,呈铺路石状排列;扫描电子显微镜下可见兔CECs球体周围有细胞爬出,未长散的细胞球中细胞与细胞之间结合紧密,球体表面凹凸不平.吖啶橙染色表明,细胞球中90％细胞呈绿色荧光;球形培养组细胞平均A450值为1.524±0.013,常规培养组细胞平均A450值为1.265±0.021,球形培养组细胞增生值明显增加,2个组间差异有统计学意义（t=-3.436,P=0.010）.免疫荧光检测表明,培养的细胞中ZO-1和Na＋/K＋-ATP酶阳性细胞膜对FITC呈绿色荧光,细胞核DAPI染色呈蓝色荧光.结论 CECs的3D球形培养方法培养的细胞可保持细胞的高活性、高增生能力和细胞表型,为构建组织工程角膜内皮及细胞疗法提供了更好的角膜内皮种子细朐.

关键词：角膜内皮细胞球形培养三维细胞活性细胞表型

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慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力

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南方医科大学学报 2014年第9期34卷 1359-1364页

作者：廉滋珍曹佐武陈冉陈雷薛樱子秦俊文齐绪峰张春雪禹艳红暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系广东广州510632 暨南大学附属第一医院麻醉科广东广州510632

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表... 详细信息

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。

关键词： RNA干扰附睾特异表达蛋白 meClps 慢病毒精子运动

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RNA干扰下调PPP2R5C对T-ALL TCR Vβ亚家族分布和克隆增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2014年第4期35卷 361-366页

作者：徐艳陈宇周玲玲刘思初杨力建陈少华罗更新李扬秋暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510630

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单... 详细信息

目的:基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA(PPP2R5C-siRNA)抑制白血病T细胞增殖的结果,进一步了解PPP2R5C-siRNA对T-ALL样本中TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况.方法:利用PPP2R5C-siRNA转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单个核细胞(PBMC),设无关序列对照组(SC)和空白对照组(NC);利用实时定量PCR检测PPP2R5C基因表达水平.利用RT-PCR扩增各组样本中24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3(CDR3);阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,了解其Vβ亚家族T细胞克隆性.结果:PPP2R5C-siRNA处理后明显下调PBMC中PPP2R5C基因表达水平.2例初发T-ALL外周血中分别可检测到10和17个Vβ亚家族,多数Vβ亚家族T细胞为多克隆性,病例1中Vβ9和Vβ17为寡克隆性,而病例2中,Vβ14和Vβ16呈寡克隆性;经过RNA干扰处理后,TCR Vβ亚家族表达率降低,仅检测到3和4个Vβ亚家族,分别为Vβ2,Vβ3,Vβ16和Vβ17.其中2个Vβ家族的寡克隆性模式发生改变,病例1中,Vβ17转为多克隆,而病例2中,Vβ16也转变为多克隆.结论:RNA干扰下调白血病T细胞PPP2R5C基因表达抑制细胞增殖时,在一定程度上影响TCR Vβ亚家族T细胞增殖和克隆模式变化,对正常T细胞功能可能存在一定影响.

关键词： PPP2R5C基因 T细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性

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重编程诱导多功能干细胞的研究进展

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中国病理生理杂志 2014年第7期30卷 1218-1222,1227页

作者：郭晓令刘庆王婵郭永龙余榕捷陈建苏暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一临床学院眼科广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究所广东广州510632

诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞... 详细信息

诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞类型。 iPSCs 的问世，对干细胞的发展具有划时代的意义，使得患者来源的体细胞可以被诱导成iPSCs，用于相关疾病的检测分析与干细胞治疗，规避了免疫排斥和道德论理等问题。但是由于iPSCs诱导的低效性和致瘤性，使得这个＂新星＂在临床中的应用被质疑，目前科学家一直围绕这2个核心问题展开研究，通过改进转导途径，改变重编程方法来提高它的安全性和效率，并取得了一系列喜人的结果，从而使iPSCs未来用于临床的前景变得越来越光明。

关键词：诱导多能性干细胞安全性有效性

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